植物酶的组织和细胞化学定位研究方法

酶是参与植物体内生化反应的特殊蛋白质。在保持活组织和细胞结构完整性的条件下,利用组织化学、细胞化学、免疫学和显微检测等技术研究酶的即位定位,是了解酶在组织、细胞和亚细胞中的分布、活性动态与定量及酶功能等的重要途径。对植物体中酶定位的组织化学和细胞化学方法的概念、原理与研究进展进行了综述,并根据国际酶化学分类编号顺序,分别介绍了25种酶的组织化学染色定位所用的反应介质和染色方法及46种酶的细胞化学定位方法的参考文献。     

蕤核叶片解剖结构和组织化学定位研究

采用解剖学和组织化学方法,研究了蕤核(Prinsepia uniflora Batal.)叶片的解剖结构,并对叶片中的黄酮类、生物碱类及多糖的组织化学定位进行了研究。结果表明:蕤核叶片上表皮有角质层,下表皮有气孔分布,气孔密度为278个·mm-2,近轴面栅栏组织细胞2～3层,排列紧密而整齐,含有许多晶体;叶片主脉木质部发达,由多列导管组成。上述特征说明蕤核叶片的解剖结构与环境之间的适应性。组织化学定位显示黄酮多分布于栅栏组织和厚角组织,生物碱含量少,多糖均匀分布于叶肉中。     

扬子鳄胃的组织化学及超微结构研究

爬行动物胃的一般组织学和组织化学的研究资料较多,Luppa1对此作了较为详细的总结.超微结构方面,龟鳖类和蜥蜴类亦有报道2,3,鳄类的资料尚缺.扬子鳄(Alligator sinensisFuval)是我国现存惟一的特有鳄类,陈壁辉4等曾对其食性进行了细致的考察,也对胃的一般组织结构作了描述.作者拟从组织化学和超微结构方面对扬子鳄的胃作进一步的研究,以丰富比较组织和细胞学资料,同时也增进对扬子鳄进化位置及其食性适应性结构的认识.       

介绍植物组织中几种酶的定位测定法

在植物生理学的研究上,利用组织化学的方法来说明植物体内的生理活动问题;在国际上开展得不多。当需要檢定某种物质在植物体内的分布和性质时,用组织化学的方法可以达到定位和定性的目的;而且有时此用剝离部分器官或组织来作生化测定更能说明问     

玉米茎秆细胞壁和组织构建对抗压强度的影响

耐密抗倒伏玉米品种是玉米育种的重要方向,探究影响玉米茎秆抗压强度的机制是培育玉米新品种的重要途径。本实验采用组织化学、显微观察的方法研究了10个玉米品种茎秆的形态结构、解剖特征和细胞壁的化学组成,并分析了这些变量之间的相关性,结果表明:茎的皮层/半径、厚壁组织比例、机械组织比例和纤维素含量、木质素含量与抗压强度呈极显著正相关关系;薄壁组织比例、茎长/茎粗、维管束个数与抗压强度呈极显著负相关关系。利用共线性诊断和逐步线性回归分析发现,影响茎秆抗压强度的主要因素为皮层/半径、机械组织比例、维管束个数、纤维素含量和木质素含量。利用通径分析进一步定量研究了这5个变量与抗压强度之间的直接作用和间接作用,明确了决定玉米茎秆抗压强度的主要因素为纤维素含量、木质素含量和单位面积维管束个数。本实验还建立了玉米茎微观结构与细胞壁化学构成的数学模型,为进一步揭示玉米茎微观力学形成机理提供了思路,进而为耐密抗倒伏玉米育种提供了研究方向。     

基于电镜和免疫组化的线粒体数目标志物评估肝癌的初步研究

目的:研究线粒体数目与肝癌生长的相关性。方法:利用电子显微镜技术定量肝癌组织中线粒体数目,利用免疫组织化学技术评估肝癌组织中的线粒体标志物COX Ⅳ及HSP60表达水平,分析电镜肝癌线粒体定量结果与COX Ⅳ及HSP60表达量之间的相关性,并比较肝癌中线粒体数目、COX Ⅳ及HSP60表达量与肝癌直径之间的关系。结果:与癌旁相比,肝癌组织中线粒体数目(P0.001)、COX Ⅳ及HSP60的表达量显著降低(P=0.0417,P=0.0290)。COX Ⅳ及HSP60表达水平与线粒体数目无显著相关(r~2=0.009,P=0.5468;r~2=0.056,P=0.1396)。线粒体数目与肿瘤直径显著负相关(r~2=0.1086,P=0.0434),COX Ⅳ及HSP60表达量与肿瘤直径无显著相关(r~2=0.0251,P=0.3287;r~2=0.0461,P=0.1830)。结论:线粒体数目是潜在的肝癌生长标志物。但常用的线粒体定量分子HSP60与COX Ⅳ并不能准确定量肝癌线粒体。     

大鼠中枢和外周组织中脑钠素样物质的分布、特性和作用

本工作首先应用特异性脑钠素放射免疫测定、放射受体分析和免疫组织化学的方法,研究了大鼠中枢神经系统和一些外周组织中脑钠素免疫活性物质的分布、生化特性、受体结合和生物学作用,提出脑钠素可作为一种新的神经递质或循环激素,广泛分布于体内不同组织内,并参与水电介质和心血管活动的调节。     

SYF2在胶质瘤中的表达及其临床意义

目的研究前mRNA剪接因子SYF2在胶质瘤中的表达水平及其与临床病理因素之间的关系,分析SYF2对胶质瘤预后的影响。方法应用Western blot检测II/III/IV级胶质瘤组织和正常组织中SYF2的表达;应用免疫组织化学染色比对80例胶质瘤组织中SYF2的表达;应用医学统计学方法分析SYF2与胶质瘤患者临床病理因素之间的相关性。结果 Western blot和免疫组织化学检测均显示SYF2在胶质瘤组织中的表达高于正常组织,其表达与胶质瘤病理分级相关,与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、手术范围、坏死等因素不相关。结论 SYF2在胶质瘤组织中呈高表达,提示SYF2与胶质瘤的发生发展及不良预后有关。     

培养细胞免疫组化方法的改进

本介绍了一种培养细胞免疫组织化学的方法,即利用琼脂糖预包埋培养细胞,制成富含细胞的琼脂块,再按一般组织块处理程序制成石蜡切片,进行免疫组织化学检测,获得了较满意的结果,并解决了培养细胞进行免疫组织化学检测的某些问题。     

植物冰冻切片条件的优化及其与石蜡切片在组织化学应用中的比较

冰冻切片是植物组织学研究中一项重要的实验技术,冷冻温度和冷冻时间是决定切片质量的关键因素。通过比较15种冰冻切片条件,得出植物组织直接冰冻切片较适宜的冷箱温度、冷台温度和冷冻时间。同时,通过对5种植物的不同组织进行组织化学染色,比较了新鲜材料直接冰冻切片与常规石蜡切片在不同化学成分鉴定上的异同及各自的适用范围。结果表明,对于多糖、蛋白质和角质,两种切片方法的鉴定结果比较一致,但对于脂肪只能采用冰冻切片技术。研究结果对植物组织学实验和研究方法的改进具有一定的参考价值。     

药用植物的结构、发育与其主要药用成分积累关系的研究

药用植物防病治病的基础是含有药用化学成分,这些药用成分都贮存在它们的药用部分(根、茎、树皮、叶、花、果实或种子等)内.为此,研究药用植物的结构、发育与其主要药用成分积累的关系,具有重要的理论和实践意义.应用植物解剖学、组织化学和植物化学等技术相结合的方法,先后研究和阐明了西洋参、金丝桃属和芦荟属植物、绞股蓝、盾叶薯蓣、青藤和毛青藤以及地黄等药用植物的主要药用化学成分在药用部分中积累的部位、贮存结构的特点,在植物不同生长发育时期中药用成分含量的变化规律以及同属不同种植物的结构与药用成分积累的关系.研究结果为药用植物的合理采收、制定植物药材的SOP、GAP,以及药用植物资源的开发利用和保护提供了科学依据.     

生态系统营养动态的网络透视法（续）

生态系统营养动态的网络透视法（续）张晓爱（中国科学院西北高原生物研究所,西宁８１０００１）４生态系统结构的测定４．１垂直结构的测定定量描述生态系统营养结构的一般有效方法是用一种定量指数使不同生态系统之间的比较和探测生态系统内部变化趋势成为可能,如演替...     

微波炉和高压锅抗原修复与不修复免疫组织化学效果的定量对比分析

某些研究认为 ,免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露。组织经 1 0 %福尔马林固定。甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联 ,使决定簇的构像改变。从而影响检测蛋白表达。要充分暴露抗原决定簇 ,微波炉和高压锅抗原修复是目前常采用的方法 [1,2 ]。本实验利用高灵敏 HPIAS-1 0 0 0图像处理系统进行定量对比分析 ,从而得到微波炉和高压锅修复与否乳腺癌组织中 P53、ras P2 1、PCNA蛋白表达的阳性率和阳性表达程度对比。为得到三种癌基因蛋白免疫组织化学染色最佳效果提供详细资料。材料和方法1 .材料乳腺癌组织标本五例 ,…     

Lef-1基因在棕色和白色羊驼皮肤差异表达

本实验旨在研究Lef-1在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色间的关系.采用实时荧光定量PCR、Western blotting以及免疫组织化学方法,研究白色和棕色羊驼皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位.实时荧光定量PCR结果显示,Lef-1在棕色羊驼皮肤组织相对基因表达量是3.3727±0.1989,在白色羊驼皮肤组织是1.0003±0.0227; Western blotting结果显示,在羊驼皮肤组织总蛋白中存在分子量约44 KD与兔抗Lef-1多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示,在棕色羊驼皮肤组织中多表达在毛球部、表皮也有分布,在白色羊驼皮肤组织中多表达在表皮,在棕色和白色羊驼皮肤组织中外根鞘都有较强表达.结果显示Lef-1在棕色和白色羊驼皮肤的定位和含量存在差异,提示Lef-1可能影响了羊驼被毛颜色的形成.     

中药与肠道微环境相互作用研究进展

中药化学成分与肠道微环境的相互作用是中药发挥疗效的一个关键环节,相关研究对阐明中药药效物质及其作用机制至关重要,其中涉及中药化学成分、肠道菌群和肠道细胞之间复杂的相互关系.随着多学科理论和技术的发展特别是本草基因组学学科概念的提出,中药化学成分与肠道微环境的相互作用研究也由原来的化学成分生物转化研究、菌群结构和免疫调控研究深入到基因水平,其内容涉及结构和功能基因组、蛋白质组、转录组、代谢组、表观基因组、宏基因组等理论与实验技术.本文对该领域的研究进展进行了综述,并对该领域未来研究的发展方向进行了展望.     

原位杂交组织化学及其在神经科学中的应用

原位杂交组织化学是近年来新发展起来的一项能特异地显示组织细胞内mRNA 的技术,它把重组 DNA 技术和组织化学方法结合起来,用于对已知的神经激素、神经肽及其受体的 mRNA 的细胞定位,观察特异的 mRNA 在体内表达的部位;观察单个细胞内 mRNA 量的变化,研究 mRNA 代谢的调节;半定量地测定细胞内 mRNA 的含量。     

改良大鼠子宫内膜异位症模型的建立及微血管密度观察

目的对皮下筋膜层与腹壁肌层之间移植自体子宫内膜制作的子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）模型进行评估。方法取10只雌性未交配性成熟大鼠,术前雌激素诱导,手术开腹取右侧子宫,将自体子宫内膜种植于双侧皮下筋膜层与腹壁肌层之间,术后第29天取出异位组织,进行组织形态学观察,免疫组织化学染色观察微血管密度（Microvessel density,MVD）。结果异位内膜在腹壁内生长,呈隆起囊状小包块,内有黏液,具有正常子宫内膜基本组织结构。异位内膜中微血管密度较在位内膜和正常子宫内膜高。结论此手术方法建立的大鼠子宫内膜异位症模型异位内膜病理改变与EMs患者类似,可以作为子宫内膜异位研究的动物模型。     

大豆异黄酮对油酸致大鼠肝损伤的干预作用

为了探究大豆异黄酮(soybean isoflavone,SIF)对油酸致大鼠肝损伤的影响,该研究对6周龄SD(sprague dawley)大鼠尾静脉注射油酸构建肝损伤模型,应用血液生化检查法、苏木精–伊红染色法、免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法探究油酸引起的肝损伤以及大豆异黄酮的干预作用,对大鼠进行血液中ALT、AST含量检测、肝组织形态学观察和肝组织中TNF-α(tumor necrosis factor-α)、IL-6 (interleukin-6)蛋白阳性分布检测及其mRNA的转录水平检测。研究结果显示,与基础对照组相比,溶媒对照组的血液中ALT、AST含量显著升高,肝细胞显示出较严重的弥漫性水肿、空泡变性,以及少量坏死,SIF干预后,高、中、低剂量组的血液中ALT、AST含量显著降低,肝细胞病理情况显著改善。免疫组织化学结果显示,与基础对照组相比,溶媒对照组肝细胞显示出TNF-α、IL-6的高表达,SIF干预后,高、中、低剂量组TNF-α、IL-6的表达显著降低。实时荧光定量PCR结果显示,目的基因TNF-α和IL-6的mRNA转录水平与免疫组织化学结果中其蛋白表达基本一致。以上结果表明,不同剂量大豆异黄酮在持续灌胃一段时间后,减轻了油酸诱导的肝组织TNF-α、IL-6表达,改善了油酸性肝损伤,进一步探究大豆异黄酮对油酸性肝损伤的确切作用机制有利于SIF的临床开发与应用。     

原癌基因pokemon mRNA及其蛋白在非小细胞肺癌中的表达和意义

目的探讨原癌基因PokemonmRNA及其编码蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC发生的关系。方法应用RT-PCR和原位杂交技术检测pokemon mRNA在NSCLC组织和癌旁正常组织中的相对表达量及细胞定位;利用免疫组织化学染色分析NSCLC组织和癌旁正常组织标本中Pokemon蛋白的表达。结果半定量RT-PCR显示,pokemon mRNA在NSCLC组织中高表达(0.916±0.424),在对应的癌旁正常组织中低表达(0.408±0.307),两组之间具有显著的统计学差异(P<0.05);原位杂交结果显示,pokemon转录本在NSCLC细胞胞质中呈阳性表达,而癌旁正常组织不表达或低表达;免疫组织化学染色分析结果显示,NSCLC组织和对应的癌旁正常组织中Pokemon蛋白阳性表达率分别为87.5%(35/40)和15%(6/40),两组之间具有显著的统计学差异(X2=42.076,P<0.005)。Pokemon蛋白主要定位在癌细胞胞质内,少量定位在胞核中,呈颗粒状分布。结论原癌基因poke-mon mRNA及其编码蛋白在N...     

脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.