乳腺癌转移中的磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱分析（英文）

我们以前曾报道花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢产物可以促进乳腺癌细胞增殖和迁移.为了进一步寻找维持高转移乳腺癌细胞中AA高水平代谢的内源机制,深入探求AA代谢促进乳腺癌细胞转移的分子机理,我们应用HPLC/ESI/MSn技术检测和分析了乳腺癌MCF-7和高转移乳腺癌LM-MCF-7细胞中溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholines,Lyso PCs)和磷脂酰胆碱(phosphatidylcholines,PCs)的成分和含量.发现了10种Lyso PC的含量在LM-MCF-7细胞中显著高于MCF-7细胞,有6种PC可水解产生AA,它们在LM-MCF-7细胞中的含量显著低于MCF-7细胞,提示这些溶血磷脂含量的升高和磷脂含量的降低可能与乳腺癌转移相关.在LM-MCF-7细胞中,COX-2抑制剂吲哚美辛(indomethacin,Indo)和LOX抑制剂(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)共同作用可明显下调c PLA2的活性,应用HPLC-ESI-MSn技术比较c PLA2活性下调前后LM-MCF-7细胞中Lyso PC和PC含量的变化,发现其中4种PC可被c PLA2水解产生AA.还发现,细胞内Lyso PC与PC的比值可以反映c PLA2的活性.通过以上研究进一步证实了由c PLA2活性调节的AA释放及代谢对乳腺癌转移具有重要作用.     

天然二亚油酰磷脂酰胆碱的富集

二亚油酰磷脂酰胆碱是重要的药物辅料,本研究使用冷冻分提的方法提高产品中二亚油酰磷脂酰胆碱的含量。在研究试验条件下,取分提溶剂乙醇的体积分数为95%,液固比为2.5,结晶温度为-7℃,以二亚磷脂酰胆碱含量为49.8%的大豆磷脂酰胆碱为原料,制备得到二亚磷脂酰胆碱含量为59.4%的产品,该产品二亚磷脂酰胆碱含量大于国外同类产品。并通过MS对二亚油酰磷脂酰胆碱进行了进一步确证。     

磷脂酰肌醇转移蛋白

磷脂酰肌醇转移蛋白(phosphatidylinositol/phosphatidylcholine transfer proteins,PITP)普遍存在于真核生物细胞中,PITP能够结合并交换一分子的磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)或磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC),并促进这两类脂分子在细胞内膜组分间的转移。PITP对细胞内膜组分间脂类的运输和代谢、分泌囊泡的形成和运输、磷脂酶C(phospholipase,PLC)调节的信号传导以及神经退化等生理生化过程具有重要的影响。综述了近年来PITP的研究进展,并对目前研究中存在的一些问题进行探讨。     

胆碱摄取及磷脂酰胆碱合成的调节研究

木文研究了多种氨基酸、乙醇胺和甲基乙醇胺对细胞摄取胆碱和合成磷脂酰胆碱（ＰＣ）的影响,发现多种氨基酸非竞争性地抑制细胞摄取胆碱。含胆碱代谢物的分析显示胆碱转变成ＣＤＰ－胆碱,随之形成ＰＣ均不受氨基酸影响。乙醇胺竞争性地抑制胆碱摄取,且存在剂量依赖关系。乙醇胺能明显抑制胆碱激酶活性,但细胞内胆碱和磷酸胆碱的代谢池并不改变,提示乙醇胺不影响胆碱转变成磷酸胆碱。根据ＣＤＰ－胆碱和ＰＣ的比放射性分布,乙醇胺也不影响ＰＣ的生物合成。甲基乙醇胺抑制胆碱摄入的程度强于乙醇胺,并抑制胆碱激酶和ＣＴＰ：磷酸胆碱胞苷转移酶活性,含胆碱代谢物以ＣＤＰ－胆碱下降最显著;提示甲基乙醇胺不仅抑制胆碱摄入而且还干扰了ＣＤＰ－胆碱通路。     

活体内磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺影响E.coli细胞的功能

【目的】通过磷脂酰胆碱(PC)阳性大肠杆菌菌株与磷脂酰乙醇胺(PE)阳性野生型和PE阴性突变型菌株比较,并用PC+PE+双阳性菌株佐证,从细菌形态、生理生化以及巨噬细胞对细菌的吞噬作用等方面探讨活体内磷脂酰胆碱能否替代磷脂酰乙醇胺。【方法】光学和电子显微镜观察细菌形态和结构;不同条件培养细菌并使用分光光度计测定OD600值,评估细菌的生长情况;使用SDS-PAGE和2-D电泳法测定细菌间质蛋白组分;用小鼠RAW264.7巨噬细胞系检测细菌的粘附和吞噬作用。【结果】与短棒状的PE+野生型细菌AD93/pDD72相比,PC+细菌AD93/ptac67中仍有25%丝状体;与PE-突变体AD93一样,PC+细菌AD93/ptac67仍需要添加二价离子Mg2+或Ca2+才能生长;与野生型AD93/pDD72相比,PC+细菌AD93/ptac67的周质蛋白组分、粘附率与相对吞噬效率呈现明显的差异;与野生型细菌Top10/ptac85相比,PE+PC+双阳性细菌Top10/ptac66的细胞壁外层、抗逆性和周质蛋白组分也显示差别。【结论】在活体内,膜磷脂中PC替代PE不能使PE-突变体细胞的功能完全恢复至野生型状态,PE和PC在功能上存在明显的差别,两者在功能上不能相互替代。     

磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C的研究

随着人们对信号转导认识的逐步加深,各种磷脂酶在信号通路中的作用也日渐受到重视,并日趋明了。其中磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）、磷脂酰胆碱特异性磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）的基因已克隆,对磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ）也有较深了解,而对磷脂酰胆碱特异性磷...     

高效液相色谱法测定大麦虫磷脂酰胆碱含量

建立高效液相色谱法测定大麦虫体内磷脂酰胆碱含量的方法。样品经甲醇提取、净化后,经高效液相色谱分析。采用外标法定量,磷脂酸胆碱标准溶液质量浓度在250～2 000 μg/mL范围内呈良好的线性相关,相关系数为0.999 6,样品加标回收率在97%～109%之间,相对标准偏差小于2.4%。对不同生长阶段大麦虫体内磷脂酰胆碱含量测定结果表明,大麦虫体内卵磷脂含量随个体重量的变化符合二项式曲线的变化规律,相关系数R2=0.865(P＜0.01)。     

土壤假单胞菌593使用Pcs途径合成磷酯酰胆碱

【目的】原核生物有两条代谢途径N-甲基化途径(Pmt途径)和磷脂酰胆碱合酶途径(Pcs途径)合成磷脂酰胆碱(PC)。本文对土壤细菌Pseudomonas sp.593的磷脂酰胆碱合成进行了研究,试图弄清楚假单胞菌的磷脂酰胆碱的合成途径。【方法】通过氨基酸序列比较,获得已报道的磷脂酰胆碱合酶(Pcs)的氨基酸保守序列,并设计简并引物,从Pseudomonas sp.593总DNA中PCR扩增出磷脂酰胆碱合酶基因(pcs)的片段,然后用扩增的DNA片段作探针,对Pseudomonas sp.593基因组DNA亚克隆文库进行菌落原位杂交,获得pcs全基因序列;利用同源重组原理进行活体突变,获得Pseudomonas sp.593 pcs-突变体;采用薄层层析(TLC)法分析细菌总磷脂,检测PC含量以及pcs基因活性。【结果】TLC分析显示Pseudomonas sp.593细菌仅在添加外源胆碱的M9或LB培养基中生长时才合成PC;从Pseudomonas sp.593细菌中克隆出894 bp的DNA序列,编码的蛋白具有磷脂酰胆碱合酶活性;活体缺失pcs基因后,Pseudomonas sp.593 pcs-突变体在添加或不添加胆碱的条件下都不能合成PC。【结论】Pcs途径是土壤Pseudomonas sp.593乃至其它假单胞菌合成磷脂酰胆碱的唯一途径。     

佛波酯促进CRBH7919细胞中磷脂酰胆碱水解及其酶学基础

用佛波酯（佛波醇－１２－豆蔻酸－１３－乙酸酯,ＰＭＡ）作用大鼠咒９细胞,发现ＰＭＡ能促进ＣＲＨＢ７９１９细胞中磷脂酰胆碱（ＰＣ）水解,此效应出现在ＰＭＡ作用细胞１５分钟后,且具有ＰＭＡ浓度依赖性。分析ＰＣ水解产物,发现ＰＣ主要水生成胆碱而不是磷酸胆是一步测定膜结合磷脂酰胆碱专一性的磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）活性,结果显示１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ作用细胞１０分钟即激活ＰＣ－ＰＬＤ,至３０分钟ＰＣ－ＰＬ     

磷脂酰胆碱对酒精性肝病保护作用的研究进展

酒精性肝病已逐渐成为第二大肝脏疾病,威胁着人类的健康。乙醇引发肝损伤的机制主要包括其代谢产物乙醛对肝细胞造成的毒性作用、自由基损伤及对肝脏线粒体产生的毒性作用等。已证实,磷脂酰胆碱对酒精肝损伤具有明显的保护作用。简要介绍了酒精肝病机制及磷脂酰胆碱对酒精性肝损伤的保护作用研究进展,以期为治疗酒精性肝病提供帮助。     

花生四烯酸代谢相关酶和ERK与乳腺癌转移关系

花生四烯酸代谢相关酶环加氧酶(COX)、脂氧合酶(LOX)和活化的胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）等与乳腺癌发生发展具有密切关系.为了进一步阐明它们在乳腺癌转移中的作用及其分子机制,应用反转录PCR（RT-PCR）、免疫印迹和免疫组化等方法,分别检测了乳腺癌细胞系、乳腺癌组织、癌旁组织和转移淋巴结组织中COX-2、5-LOX、12R-LOX、cPLA2和p-ERK1/2的表达水平.结果显示,与对照组相比,在具有高转移潜能的乳腺癌LM MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞以及转移淋巴结组织中,COX-2、5-LOX、12R-LOX、cPLA2和p-ERK1/2均有较高水平表达.进而发现,p-ERK1/2的特异性抑制剂PD98059可拮抗LM-MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中COX-2、5-LOX、12R-LOX和cPLA2的高表达.上述结果表明,p-ERK1/2可以通过促进花生四烯酸代谢相关酶的表达促进乳腺癌细胞发生转移.     

DKK-1通过上调nm23表达抑制乳腺癌细胞迁移

Dickkopf-1(DKK-1)作为Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)经典信号传导通路的拮抗剂而受到关注.为了进一步阐明DKK-1在乳腺癌细胞迁移中的作用及其分子机制,应用我们建立的乳腺癌细胞MCF-7高转移倾向亚克隆LM-MCF-7细胞株,比较了DKK-1在不同转移能力的乳腺癌细胞株中表达水平及其与细胞迁移能力的关系.结果显示,DKK-1在LM-MCF-7细胞中表达明显下调;"伤口愈合"实验结果表明,在MCF-7细胞中,RNA干扰DKK-1可导致细胞迁移能力增强;相反,在LM-MCF-7细胞中过表达DKK-1则可抑制细胞的迁移.进一步研究结果显示,DKK-1为肿瘤转移抑制因子nm23的上游激活因子.因此,我们的研究结果表明,DKK-1表达水平下调导致nm23表达水平下调,解除了对乳腺癌细胞迁移的抑制作用,是LM-MCF-7乳腺癌细胞具有高迁移能力的原因之一;反之,与LM-MCF-7相比,DKK-1在MCF-7细胞中高表达,其通过上调nm23可抑制乳腺癌细胞迁移.这一发现对进一步揭示乳腺癌细胞转移的分子机制具有的重要意义.     

Ascorbate promotes the cellular accumulation of doxorubicin and reverses the multidrug resistance in breast cancer cells by inducing ROS-dependent ATP depletion

Chemotherapy is the most effective strategy for the treatment of metastatic breast cancer. However, P-glycoprotein (P-gp)-mediated multidrug resistance severely limits the efficacy of chemotherapy and is a major cause of the failure during chemotherapeutic treatment. In this study, we investigated the anticancer effects of combining chemotherapeutic drugs with ascorbate (AA) in human breast cancer cells. We found that combined administration of AA can improve the sensitivity of both MCF-7 and doxorubicin (Dox)-resistant MCF-7/Adr cells to Dox in vitro and in vivo by a reactive oxygen species (ROS)-dependent mechanism. Further studies proved that AA can promote the accumulation of Dox in MCF-7/Adr cells when combined with doxorubicin. AA had no effect on the expression of P-gp at the mRNA and protein levels, but could decrease its activity as demonstrated by an obvious inhibition of efflux of P-gp substrate Rh 123. AA reduced ATP levels in both MCF-7 and MCF-7/Adr cells, and pretreating AA-stimulating cells with catalase completely rescued ATP levels. With ATP reduction, we observed an increased cellular calcium and the appearance of vacuoles and micropores on the cell surface, indicating the increased cell membrane permeability in AA-treated MCF-7/Adr cells. The above results suggest that AA could promote the cellular accumulation of doxorubicin by inducing ROS-dependent ATP depletion. Clinically, a combination of AA with doxorubicin would be a novel strategy for reversal of the multidrug resistance in human breast cancer cells during chemotherapy.     

高转移倾向乳腺癌细胞中p-ERK促进增殖和迁移作用的信号转导途径

在建立乳腺癌细胞MCF-7高转移倾向亚克隆LM-MCF-7细胞株的基础上,为阐明LM-MCF-7细胞具有更强增殖和迁移能力的分子机制,对其相关分子及其信号转导途径进行了探讨.免疫印迹结果显示,与MCF-7细胞相比,LM-MCF-7细胞中p-ERK1/2水平显著升高.流式细胞术和“伤口愈合”实验结果表明,ERK1/2的特异性抑制剂PD98059可明显抑制LM-MCF-7细胞的高增殖和高迁移能力.免疫印迹检测发现,与MCF-7细胞相比,LM-MCF-7细胞中与增殖和迁移相关的因子,如β-catenin、细胞周期蛋白D1、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的水平呈明显增高,PD98059对这些因子水平的增高具有抑制作用.免疫荧光染色显示,LM-MCF-7细胞中β-catenin分布在细胞核中,应用PD98059处理后,β-catenin主要分布在胞浆中.上述研究结果表明,在LM-MCF-7细胞中活化的ERK1/2水平升高,是导致该细胞增殖和迁移能力增强的重要原因之一,与ERK1/2-MLCK-p-MLC和ERK1/2-β-catenin 细胞周期蛋白D1等信号转导途径有密切的关系.     

Cathepsin B mediates tumor necrosis factor-induced arachidonic acid release in tumor cells

Arachidonic acid (AA) generated by cytosolic phospholipase A2 (cPLA2) has been suggested to function as a second messenger in tumor necrosis factor (TNF)-induced death signaling. Here, we show that cathepsin B-like proteases are required for the TNF-induced AA release in transformed cells. Pharmaceutical inhibitors of cathepsin B blocked TNF-induced AA release in human breast (MCF-7S1) and cervix (ME-180as) carcinoma as well as murine fibrosarcoma (WEHI-S) cells. Furthermore, TNF-induced AA release was significantly reduced in cathepsin B-deficient immortalized murine embryonic fibroblasts. Employing cPLA2-deficient MCF-7S1 cells expressing ectopic cPLA2 or cPLA2-deficient immortalized murine embryonic fibroblasts, we showed that cPLA2 is dispensable for TNF-induced AA release and death in these cells. Furthermore, TNF-induced cathepsin B-dependent AA release could be dissociated from the cathepsin B-independent cell death in MCF-7S1 cells, whereas both events required cathepsin B activity in other cell lines tested. These data suggest that cathepsin B inhibitors may prove useful not only in the direct control of cell death but also in limiting the damage-associated inflammation.     

上皮细胞黏附分子增强细胞间紧密连接促进乳腺癌细胞耐药

乳腺癌是致死率很高的恶性肿瘤,由ABCG2 (ATP-binding cassette G2)介导的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致其化疗失败的重要原因,探讨ABCG2介导的耐药机制并探寻其关键分子是当前亟待解决的难题。上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)参与多种肿瘤耐药,且与乳腺癌MDR密切相关,但它在ABCG2介导的乳腺癌耐药中的作用尚未阐明。本研究目的在于探究EpCAM对于ABCG2介导的乳腺癌细胞的多药耐药的调节作用及其机制。CCK8细胞毒性结果证实,相对于人乳腺癌药物敏感株MCF-7,耐药株MCF-7/MX对米托蒽醌(mitoxantrone,MX)的耐药性显著增强;Western 印迹结果显示,与MCF-7相比,MCF-7/MX细胞中ABCG2高表达,EpCAM表达上调。siRNA法敲低MCF-7/MX细胞中EpCAM可下调其ABCG2表达,并恢复对MX的敏感性。倒置显微镜观察细胞形态,发现敲低EpCAM可减少MCF-7/MX细胞间连接。免疫荧光双染法观察到EpCAM与密封蛋白1(claudin 1)在MCF-7/MX细胞共定位;进一步Western 印迹结果表明,敲低EpCAM减少MCF-7/MX细胞中密封蛋白1表达。综上所述,EpCAM可能通过与密封蛋白1相互作用,增强细胞间紧密连接,促进ABCG2介导的乳腺癌多药耐药。     

Interaction of vitamin D analogs with signaling pathways leading to active cell death in breast cancer cells

Induction of apoptosis is a feature of the anti-tumor effects of certain vitamin D analogs. The aim of this study was to identify if common effectors are involved in cell death mediated by serum starvation, vitamin D analogs and tumor necrosis factor (TNF) alpha in 3 human breast cancer cell lines: MCF-7, T47-D and Hs578T. Incubation of cells in serum-free medium induced apoptosis as assessed by loss of cell viability and increased DNA fragmentation. Addition of IGF-I (30 ng/ml) protected against loss of cell viability in MCF-7 cells and co-treatment with two synthetic analogs (CB1093 and EB1089, 50 nM for 4 days) prevented these anti-apoptotic effects of IGF-I. Pretreatment of MCF-7 and Hs578T cells with the vitamin D analogs substantially potentiated the cytotoxic effects of TNFalpha. This cytokine was not cytotoxic for T47-D cells but co-incubation with CB1093 led to loss of cell viability. Potentiation by CB1093 of TNFalpha-induced apoptosis in MCF-7 cells was accompanied by increased activation of cytosolic phospholipase A2 and arachidonic acid release, which was partially inhibited by AACOCF3, a specific cPLA2 inhibitor. The broad-spectrum caspase inhibitor z-VAD-fmk prevented TNFalpha but not CB1093 mediated cell death and activation of cPLA2. Serum starvation induced apoptosis was accompanied by cPLA2 activation, which was inhibited by IGF-I and by z-VAD-fmk. However, the ability of these agents to suppress cPLA2 activation was abrogated by co-treatment with CB1093, suggesting a role for arachidonic acid release in the caspase-independent mechanism by which vitamin D analogs prevent the protective effects of IGF-I on breast cancer cell survival.     

sPLA(2) cooperates with cPLA(2)alpha to regulate prostacyclin synthesis in human endothelial cells

The first step in prostacyclin (PGI(2)) synthesis involves the generation of arachidonic acid (AA) from membrane phospholipids mediated by the 85 kDa cytosolic phospholipase A(2) (cPLA(2)alpha). The current study examined the effects of secretory PLA(2)s (sPLA(2)s) on PGI(2) production by human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). We demonstrate that exposure of HUVEC to sPLA(2) dose- and time-dependently enhances AA release and PGI(2) generation. sPLA(2)-stimulated AA mobilisation was blocked by AACOCF(3), an inhibitor of cPLA(2)alpha, suggesting cross-talk between the two classes of PLA(2). sPLA(2) induced the phosphorylation of cPLA(2)alpha and enhanced the phosphorylation states of p42/44(mapk), p38(mapk), and JNK, concomitant with elevated AA and PGI(2) release. The MEK inhibitor PD98059 attenuated sPLA(2)-stimulated cPLA(2)alpha phosphorylation and PGI(2) release. These data show that sPLA(2) cooperates with cPLA(2)alpha in a MAPK-dependent manner to regulate PGI(2) generation and suggests that cross-talk between sPLA(2) and cPLA(2)alpha is a physiologically important mechanism for enhancing prostanoid production in endothelial cells.     

ILP-2-ECM1(P85)促进乳腺癌细胞的生长

凋亡抑制蛋白-2（inhibitor of apoptosis protein-like protein-2, ILP-2）是新发现的凋亡抑制蛋白质,其抑制肿瘤细胞凋亡促进其生长的分子机制有待阐明,而细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1, ECM1)所介导的信号通路与肿瘤细胞的生长密切相关。本研究通过免疫共沉淀法,检测到乳腺癌MCF-7细胞中ILP-2与ECM1（P85）存在相互作用。分别用化学合成的ILP-2-siRNA及ECM1-siRNA干扰处理MCF-7细胞。以未转染的MCF-7细胞和转染阴性对照siRNA的细胞分别作为空白和阴性对照,利用蛋白质印迹法,检测ILP-2-siRNA干扰后ECM1、FAK、Akt蛋白的表达,以及ECM1-siRNA干扰后ILP-2蛋白的表达。其结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5 (0.32 ± 0.095)及ECM1-siRNA-1 (0.42 ± 0.024)干扰效率较高(均P<0.001);ILP-2-siRNA-5组待测蛋白质的相对表达量均显著下调 (ECM1, 0.19 ± 0.013, P<0.001), FAK (0.64 ± 0.069, P<0.01), Akt (0.35 ± 0.120, P<0.01)),ECM1-siRNA-1组ILP-2 (0.48 ± 0.060) 蛋白表达也显著下调,表明ILP-2与ECM1-mTOR信号通路联系密切。分别在ILP-2-siRNA和ECM1-siRNA转染24、48和72 h时,使用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖,并用TUNEL标记荧光法和吖啶橙/溴化乙啶双荧光染色法(AO/EB)检测其凋亡。结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5组和ECM1-siRNA-1组的存活率均显著下降（P<0.001）,凋亡率均明显升高（P<0.001）。利用共转染技术同时敲低ILP-2和ECM1表达,检测细胞的凋亡情况。结果显示,在干扰处理后24 h（0.55±0.122）,48 h（0.80 ± 0.107）和72h（0.73 ± 0.091）的凋亡率显著均高于阴性对照组（P＜0.05）。但与只敲低ILP-2或ECM1相比,无显著性差异（P＞0.05）。表明ILP-2可能是通过与ECM1作用激活FAK-mTOR信号通路,影响MCF-7细胞的增殖和凋亡,对乳腺癌细胞MCF-7的生长发挥了积极的作用。     

应用基因表达谱芯片从不同转移能力的 乳腺癌细胞中筛选转移相关基因

人乳腺癌细胞系 MCF-7 及其转移亚克隆 LM-MCF-7 为肿瘤转移分子机制的研究提供了细胞模型 . 应用基因芯片技术比较两种具有不同转移能力细胞系基因表达谱的差异,寻找乳腺癌转移相关基因 . 提取两种细胞总 RNA ,分别用 Cy5-dCTP 、 Cy3-dCTP 标记 LM-MCF-7 和 MCF-7 的 cDNA ,并与含有 21 329 个基因的芯片进行杂交并扫描,利用 GenePix Pro 4.0 图像分析软件处理数据判断基因是否在两个细胞中存在表达差异 . 经互换荧光标记物重复两次实验,共筛选出差异表达基因 67 个,其中 41 个在 LM-MCF-7 细胞中表达上调, 26 个在 LM-MCF-7 细胞中表达下调 . 应用实时定量 RT-PCR 对 7 个表达差异明显的基因进行了验证 . 生物信息学分析结果提示,上述发现的差异基因编码产物与细胞内信号转导、转录调节、应激反应、新陈代谢、发育、细胞运动、细胞凋亡和细胞粘连等功能有关 . 据文献报道,这些差异表达的基因中有 35 个与肿瘤有关,其中 9 个与乳腺癌转移有关, 6 个可能参与肿瘤浸润和转移过程 . 根据基因芯片检测的结果,从功能上对 LM-MCF-7 细胞和 MCF-7 细胞与细胞凋亡的关系进行了研究,发现具有高转移倾向的 LM-MCF-7 细胞与 MCF-7 细胞相比,抗凋亡能力较强 . 上述与肿瘤转移相关基因在肿瘤转移中的作用及其分子机理有待深入研究 .