DKK-1通过上调nm23表达抑制乳腺癌细胞迁移

Dickkopf-1(DKK-1)作为Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)经典信号传导通路的拮抗剂而受到关注.为了进一步阐明DKK-1在乳腺癌细胞迁移中的作用及其分子机制,应用我们建立的乳腺癌细胞MCF-7高转移倾向亚克隆LM-MCF-7细胞株,比较了DKK-1在不同转移能力的乳腺癌细胞株中表达水平及其与细胞迁移能力的关系.结果显示,DKK-1在LM-MCF-7细胞中表达明显下调;"伤口愈合"实验结果表明,在MCF-7细胞中,RNA干扰DKK-1可导致细胞迁移能力增强;相反,在LM-MCF-7细胞中过表达DKK-1则可抑制细胞的迁移.进一步研究结果显示,DKK-1为肿瘤转移抑制因子nm23的上游激活因子.因此,我们的研究结果表明,DKK-1表达水平下调导致nm23表达水平下调,解除了对乳腺癌细胞迁移的抑制作用,是LM-MCF-7乳腺癌细胞具有高迁移能力的原因之一;反之,与LM-MCF-7相比,DKK-1在MCF-7细胞中高表达,其通过上调nm23可抑制乳腺癌细胞迁移.这一发现对进一步揭示乳腺癌细胞转移的分子机制具有的重要意义.     

三例氨基糖甙类抗生素致聋患者的线粒体DNA测序分析

应用PCR扩增产物直接对3名氨基糖甙类抗生素致聋患者的线粒体DNA进行序 列分析, 结果表明,他们的线粒体DNA均存在第1555位核苷酸A-G的突变。因此认为该突 变是人体对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的分子基础,与氨基糖甙类抗生素共同作用造成耳聋。 Abstract:The mitochondria DNAs(mtDNAs)of three patients with AAID were analysed using the method of direct sequencing of their PCR products.The results showed that all their mtDNAs had an A-G mutation at nucleotides 1555.It is considered that this mutation is the molecular basis causing human susceptibility to Aminoglycoside Antibiotics toxicity which in cooperation with Aminoglycoside Antibiotics results in deafness.     

植被不同退化状态下尕海湿地土壤氮含量及酶活性特征

土壤中氮素的吸收、转化及含量的变化是影响植被生长的关键因素。为探讨湿地植被不同退化状态对土壤氮组分含量和相关酶活性的影响，以及土壤氮组分含量与相关酶活性之间的关系，以甘南尕海湿地不同植被退化状态样地（未退化CK、轻度退化SD、中度退化MD和重度退化HD）为研究对象，采用野外采样与室内实验相结合的方法，分析了植被不同退化状态下不同形态氮组分（全氮、铵态氮、硝态氮和微生物量氮）含量的变化特征，以及土壤氮转化酶（蛋白酶、脲酶、硝酸还原酶和亚硝酸还原酶）活性之间的相关关系。结果表明：（1）在植被退化状态下，土壤含水量逐渐减小，土壤温度呈先减小后增大的趋势；（2）随着植被退化程度的加剧，硝态氮含量呈增加趋势，而全氮、铵态氮和微生物量氮含量均随退化程度加剧呈减小趋势；土壤蛋白酶活性随退化程度的加剧而减小，脲酶活性呈先减小后增大的趋势，重度退化活性最高，轻度退化最低；硝酸还原酶活性随退化程度的加剧而增加，亚硝酸还原酶活性表现为"升-降-升"的变化趋势，即轻度退化活性最高，未退化和中度退化较低；（3）土壤蛋白酶活性与全氮、铵态氮和微生物量氮呈极显著正相关关系（P < 0.01），与硝态氮含量呈显著负相关关系（P < 0.05）；硝酸还原酶活性与蛋白酶活性恰好相反；脲酶活性与微生物量氮含量呈极显著正相关关系（P < 0.01），与全氮含量呈显著正相关关系（P < 0.05）；亚硝酸还原酶活性与全氮和铵态氮含量呈极显著正相关关系（P < 0.01），与硝态氮含量呈显著负相关关系（P < 0.05）。综上，在尕海湿地植被退化条件下，土壤氮组分含量增加可以有效提高相关酶活性。     

P16基因与散发性食管癌的研究

本文对47例散发性食管癌中P16基因的第二外显子,先用外侧引物扩增进行缺失筛查,再用三对内侧引物扩增经首次外侧引物扩增所得的PCR的产物,进行套式PCR结合SSCP及PCR直接银染测序技术检测突变。结果检出食管癌中有2例缺失,5例突变。在检测出的食管癌的突变中,我们发现所有的突变均为125位密码子的错义突变,为CGG→CTG的颠换,使p16蛋白该位的碱性的精氨酸变为酸性的亮氨酸。这一结果提示P16基因可能与食管癌的发生密切相关。本文参考P16基因的结构功能区对所测突变进行了讨论,提出了进一步研究的设想。 Abstract:To elucidate the involvement of abnormalities of exon2 of P16 gene located at chromosomal region 9p21 in the development of upper disgective tract cancer,we analysed DNA from 47 patients with sporadic esophageal tumors using PCR,nested-PCR,SSCP,PCR-direct DNA sequencing.We detected allelic deletions in 2 samples(4.2％),missense mutations in 5 samples(10.6％).Furthermore these mutations were the CGG→CTG transversion at the same site of the codon 125,leading to the change from Arg→Leu,once transcribed.     

一个氨基糖苷类抗生素致聋家系线粒体DNA突变研究

应用PCR、PCR－SSCP和DNA序列分析等分子生物学技术,对一个有明确氨基糖苷类抗生素应用史的母系遗传耳聋家系共8人(包括聋人和听力正常者) 的线粒体DNA进行研究,结果显示,家系中有4份样品存在线粒体DNA 12S rRNA 1 555位点A→G的突变。提示线粒体DNA点突变是导致该家系致聋的主要因素之一。 Abstract:Blood samples were obtained from a pedigree with aminoglycoside antibiotic induced deafness.DNA was extracted from the isolated leukocytes.The mitochondrial DNA fragments were detected by PCR－SSCP and DNA sequencing.It was found that four individuals from the pedigree carried 1 555 A→G mutation.From our results,mitochondrial DNA mutation may be one of major factors in aminoglycoside antibiotic induced deafness.     

西藏温泉蛇血红蛋白高原低氧适应性分子机制研究

本文结合基因组学、分子进化以及计算生物学等分析方法,对西藏温泉蛇(Thermophis baileyi)血红蛋白(hemoglobin,Hb)基因家族成员、基因簇结构和蛋白质结构等进行研究,探索西藏温泉蛇对高原低氧环境适应的分子机制。结果显示,西藏温泉蛇基因组中包含2个α珠蛋白基因和2个β珠蛋白基因,其中β珠蛋白基因簇高度保守,α^A珠蛋白基因在有鳞目祖先分化及形成蛇类和蜥蜴类的过程中发生了基因转座事件,转座后在蛇类中的排列模式为(5′-RREB1,SSR1,α^A,RIOK1,DSP-3′)。西藏温泉蛇α^D和β²基因分别有2个和4个潜在的正选择位点,其中α^D亚基p.Arg9Lys和p.Val36Thr突变使得该亚基血红素口袋体积增大和亲水性升高,这有利于提高O₂的运输效率。β²亚基p.Ser53Asn突变导致血红素口袋的亲水性升高,p.Ile112Leu、 p.Thr135Cys和p.Ala139Ser突变使得β²...     

花生四烯酸诱导肌球蛋白磷酸化被抑制的平滑肌细胞 迁移的信号传导途径

在应用肌球蛋白轻链激酶特异抑制剂ML-7抑制了肌球蛋白轻链磷酸化后,花生四烯酸(arachidonic acid,AA)仍可诱导兔血管平滑肌细胞（SM3）发生迁移.为了进一步阐明其信号传导途径,应用多种信号抑制剂,采用免疫印迹、Boyden小室和提取细胞膜蛋白等实验方法,对上述迁移作用的信号传导途径进行了深入的研究.结果显示,PTX（Gi蛋白抑制剂）、U73122（PLC抑制剂）、staurosporine (PKC抑制剂)、PD98059（ERK1/2抑制剂）和SB203580（p38抑制剂）分别可拮抗上述AA诱导的SM3细胞迁移作用,而SP600125（JNK抑制剂）的作用较弱.免疫印迹结果显示,AA可提高SM3细胞中PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK信号的磷酸化水平,呈时间依赖性, PTX或U73122可抑制上述作用;staurosporine可抑制由AA 引起的ERK1/2和JNK的磷酸化水平增强,但对p38的磷酸化水平无影响.还发现AA可促进PLCβ2的细胞膜移位, PTX可抑制其作用.上述结果表明,当肌球蛋白轻链的磷酸化被抑制后, AA可通过Gi蛋白的活化促进PLCβ2向细胞膜移位,进而通过激活PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK等信号转导途径而诱导SM3细胞发生迁移     

液质连用分析重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂肽图

目的：建立高效液相系统肽图分析法,用于重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂（rExendin-4）的质量控制。方法：应用高效液相系统摸索最佳胰蛋白酶切和色谱条件,并采用液质联用系统分析肽段的精确相对分子量和氨基酸序列。结果：根据酶切条件摸索,确定酶切条件为：rExendin-4原液与胰蛋白酶按照质量比为100：1混匀,37℃酶切4小时,根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量及对其碰撞诱导解离质谱的解析结果,归属出肽图中各肽段所在的色谱峰,与理论值完全一致。结论：本法精确度高、重复性好、自动化程度高,能够用于rExendin-4原液肽图分析。     

兴隆山自然保护区种子植物的垂直分布格局研究

该研究通过对甘肃省兴隆山自然保护区进行野外实地调查和相关文献资料收集,依据海拔梯度将保护区划分为6个植被垂直带[草原带(1800~2000 m)、山地灌丛带(2000~2200 m)、亚高山针叶林带(2200~2900 m)、亚高山矮林带(2900~3000 m)、高山灌丛带(3000~3500 m)、高山草甸带(>3500 m)],在整理6个植被垂直带植物名录的基础上,以种子植物为研究对象,对各植被垂直带的种子植物丰富度、生活型、区系成分和系统发育结构进行分析,探讨植物多样性沿植被垂直带海拔升高的垂直变化规律,以揭示植物对环境的生态适应性,为山地植物多样性保护与开发利用提供理论依据。结果表明:(1)按最新的分类系统划分,兴隆山自然保护区种子植物隶属于87科387属889种,植物科、属、种丰富度随植被垂直带海拔升高呈单峰分布格局,在亚高山针叶林带达到峰值(81科304属661种);各植被垂直带间的Jaccard相似性系数呈中等不相似和极不相似水平,海拔越靠近的植被垂直带间相似性系数越高。(2)保护区内种子植物不同生活型的垂直变化格局存在差异,木本植物所占比例沿植被垂直带海拔升高呈先升后降的变化趋势,而草本植物呈相反的变化格局,且各植被垂直带中草本植物所占比例始终高于木本植物。(3)保护区植物在属水平上,热带成分所占比例随植被带海拔升高呈下降的变化趋势,而温带成分占比呈上升的变化趋势。(4)系统发育结构在中低海拔区域的亚高山针叶林带呈发散型,在高海拔区域(>2900 m)的3个植被带中呈聚集型,说明兴隆山自然保护区非随机分布格局在群落构建机制中发挥主要作用。     

酒泉花城湖国家湿地公园植物群落组成及其类型

采用踏查、样线及样方法调查花城湖国家湿地公园内植物种类和群落组成,分析研究其植物组成、地理区系、生活型成分及群落组成特征,为管理部门进行科学管理区域植被提供科学依据.方法:分析湿地植物区系地理成分、生活型成分及群落组成特征.结果表明:(1)花城湖国家湿地公园共有维管束植物35科79属93种,其中:蕨类植物1科1属1种,...