高水分、富含淀粉植物组织的扫描电镜制备技术优化

应用常规高真空扫描电子显微镜观察生物样品必须经过脱水和干燥处理,但无论采用临界点干燥还是冷冻干燥方法,都存在样品表面不同程度失真的问题。植物高水分、富含淀粉组织样品经处理后,容易出现淀粉流失、细胞壁变形等现象,从而造成扫描图像粗糙,无法获得真实的细胞内部结构。本文通过对CO_2临界点干燥、化学固定样品冷冻干燥和新鲜样品冷冻干燥3种扫描电镜样品制备技术中后期制样进行机械断裂和液氮脆断改进,优化出两种植物高水分、富含淀粉组织的扫描电镜样品制备方法:(1)样品首先进行FAA化学固定,经冷冻干燥后用液氮脆断,对断面喷金镀膜和扫描电镜观察。利用该方法所得细胞结构完整,细胞壁整齐,淀粉粒和蛋白轮廓明确,可用于分析淀粉粒和蛋白颗粒在细胞内的分布。(2)新鲜样品直接进行冷冻干燥,经液氮脆断后对断面喷金镀膜和扫描电镜观察。利用该方法所得细胞壁整齐,淀粉粒轮廓更清晰,并且无蛋白颗粒干扰,用于分析淀粉粒在细胞内的分布更加理想。     

一种快速、简易的扫描电镜植物样品干燥新方法

扫描电子显微镜是观察植物样品表面超微结构的有效方法,大部分新鲜植物样品需经过干燥处理才可以进行扫描电镜观察。该研究在传统叔丁醇冷冻干燥法的基础上,建立了叔丁醇一步冷冻干燥法,省略了固定、脱水、置换等步骤,简便易行,干燥后的样品形态饱满,最大程度保持了样品原貌。用叔丁醇一步冷冻干燥法干燥的样品可以与CO_2临界点干燥法和常规叔丁醇冷冻干燥法的效果相媲美。通过对不同的样品进行干燥处理,结果证明,该方法具有广泛适用性。     

如何防止花粉流失

植物花粉肉眼难以看到,在按扫描电镜常规方法制备样品很容易流失。如果在取材时将花药整体采取一起固定,操作时不碰破花药囊,花粉就不会流失。这样可按扫描电镜常规方法处理样品(双固定时间可延长到12小时以上,固定时需抽真空),待临界点干燥做完之后,再用镊子把花药轻轻夹到贴有双面胶纸的样品座上,捣碎花药囊花粉就会从囊中落出而粘在胶纸上,喷金后即可进行电镜观察。注:实验样品由林志华同志供给,蔡继炯同志拍摄电镜照片.     

扫描电镜生物样品的快速制备方法研究

本文通过改进菌类和纤毛等娇嫩样品在临界点干燥前的制备程序和适当的缩短梯度脱水的时间,使采用戊二醛单固处理的样品达到双固定的效果,提高了部分生物样品的制备质量,为制备娇嫩的扫描电镜样品提供了一条简易而快速的制备方法。     

观察真菌孢子的微结构的简便方法

真菌的形态、大小、表面结构是真菌分类中的重要依据。如何能用较简单的方法,得到较满意的照片呢?目前广泛应用扫描电镜来达到上述目的(A.Kaarik等,1983)。他们认为,在制片时,不同类群真菌的孢子用不同的固定方法。接合菌亚门、粘菌门和担子菌亚门的孢子用1％高锰酸钾固定1.5小时,用丙酮脱水,临界点干燥,真空镀金。半知菌亚门的孢子用1％锇酸(OsO_4)固定1.5小时,在丙酮中脱水,临界点干燥并镀金。子囊菌亚门的孢子是在室温下干燥,镀金即可。     

扫描电子显微镜植物材料的一种化学干燥技术

扫描电镜新鲜生物材料的制备,一般都要经过干燥处理,其目的主要是使样品不产生收缩畸变,以使样品的形态结构保持在生活状态,如此获得的样品图像才自然真实。现代广为应用的扫描电镜生物样品的干燥方法是临界点干燥(CPD)法。另外还有莰烯干燥法、乙腈干燥法和叔丁醇干燥法等。Jemes(1983)应用化学试剂六甲基二硅胺烷(nexamthyl disilazane,简称 HMDS),分子式[(CH_3)_3Si]_2对昆虫组织进行干燥处理并     

扫描电镜研究节肢动物形态的简便方法

<正> 近年来,扫描电镜在研究动物形态时广泛应用。但是,供扫描电镜观察的生物样品的制备比较复杂,需要经过预处理,如临界点干燥,金属喷镀等。一些体表柔软的动物体经过这些处理,受抽真空及热辐射等影响,使样品损伤、变形,或由于镀膜有一定厚度(100—200A),小于此厚度的细节则不能分辨。同时,标本经喷镀后再不能继续保存供其他观察用,故扫描电镜技术的运用受到一定限制。 Howden等(1973)曾探索改进扫描电镜,降低加速电压(1.5—2.5KV),用来观察未喷镀的     

一种制备植物扫描电镜样品的新干燥法：叔丁醇冻结干燥法

叔丁醇冻结干燥法用于植物材料,获得了良好的效果。经常规固定的样品完成脱水以后浸泡在叔丁醇中,然后将含醇样品放入电冰箱中冷冻,待叔丁醇凝固后再转移到真空镀膜机的钟罩里,用机械泵抽真空,冻结的醇在低真空中升华后样品得到了干燥。SEM 镜检表明,样品的表面和细胞断裂面及其深层(可见到内质网的双层膜、线粒体的嵴、高尔基体潴泡叠层、核糖体颗粒等细胞器)的三维图象均优于用临界点干燥法所得到的样品图象,叔丁醇冻结干燥法用于植物 SEM 样品制备,是一种操作简单,干燥质量可靠、值得推广的方法。     

应用临界点干燥法在扫描电镜上观察链霉菌孢子形态

孢子的表面结构是鉴定链霉菌的重要依据。其电镜图片,能真实、准确地反映出这一特征。但在制备扫描电镜生物样品时,细胞常常会在脱水干燥过程中产生凹陷、皱缩,以至不能反映出细胞原有的形态。为了解决这个问题,几年来我们采用了临界点干燥法制备样品,其原理是利用二氧化碳在临界状态时,相界面     

幼龄猪囊虫的形态及活力观察

最近我们对幼龄猪囊虫的形态学及活力作了一些观察,简报如下。一、幼龄猪襄虫形态学观察细心剥离新鲜的含小型囊虫的“米猪肉”,取囊虫置入生理盐水中肉眼观察后,把囊虫置入40%胆汁生理盐水中42℃孵育2h,头颈部孵出后以生理盐水洗涤数次,随意取囊虫20个在光学显微镜下观察。部分孵育后的囊虫(含未能孵出头颈部的囊虫)按常规制成染色玻片标本,取20个于光镜下观察形态,对小钩做计数和测量。另将若干孵育后囊虫经2.5%戊二醛前固定,0.2M Molloning缓冲液冲洗,1%锇酸后固定,梯度酒精脱水,临界点干燥,扫描电镜(SEM)观察其形态。肉眼及光镜所见:…     

利用国产氟利昂22作置换剂的临界点干燥技术

临界点干燥(CPD)技术在我国是近几年引入的一种生物材料制样技术,特别广泛地应用于扫描电镜观察。在CPD技术中,我国一直使用液态CO_2作为临界点干燥剂,但由于有些市售品含残余杂质过多,有时效果很差。我们采用氟利昂13或氟利昂22代替CO_2作临界点干燥剂,取得了较理想的效果。     

牛肾细胞染色体中染色质纤维的包装及RNP的分布

应用培养的牛肾（ＢＫ）细胞及分离的ＢＫ细胞染色体做常规透射电镜样品,经表面舒展技术和临界点干燥制备ＢＫ细胞染色体的扫描电镜样品,并结合电镜细胞化学研究了ＢＫ染色质纤维的包装及核糖核蛋白（ＲＮＰ）的分布。观察到ＢＫ染色体具有多级双股螺旋结构。在染色体横切面中,可见染色体中央有一低电子密度的无染色质区,该区内有大量ＲＮＰ物质。在染色质区ＲＮＰ较少,分布在染色质纤维间,与中央轴区的ＲＮＰ相连续,表明ＲＮＰ在染色体中呈不均匀分布。     

用准饱和CO_2干操法制备两种肿瘤细胞的扫描电镜试样

采用准饱和CO_2干燥法(QSCD)制备SGC-7901人体胃癌细胞株贴壁细胞和HAC小鼠腹水型肝癌游离细胞的扫描电镜试样,结果显示,细胞形貌与临界点干燥(CPD)对照组无明显差异,但收缩率较后者减小。QSCD法突破了传统的无表面张力干燥条件,操作顺序简单;一次可干燥较多试样;样品室压力不超过70大气压,较CPD法安全。     

新鲜生物样品扫描电镜低压观察技术

扫描电子显微镜在生物学上的应用已很普遍。用扫描电镜观察生物表面所揭示的细微结构、远比光学显微镜图象清晰、分辨率高,为生物学的研究提供了很好的工具。由于扫描电镜生物样品的常规制备比较烦琐,须经固定、脱水、干燥,表面喷镀金属膜等过程,不但样品制备周期较长,而且因操作环节繁多往往容易造成样品损伤和变形,使图象不够理想。而新鲜     

牛奶子花粉形态特征与生活力测定

采用两种扫描电镜样品制备技术制备牛奶子花粉,扫描电镜观察其形态,研究结果表明:经自然干燥法制样,牛奶子花粉外观变形严重;采用固定—脱水制样,花粉外形保持良好,牛奶子花粉近球形,极面观钝三角圆形,具3沟,表面具脑纹状雕纹。采用I2-KI染色法测定牛奶子花粉开花后不同时间的生活力,结果表明:牛奶子花粉生活力在开花初较高,并在开花后36h内维持在80%以上,之后迅速下降,但在花期末仍有部分花粉具有生活力。     

扫描电镜在天然食用色素研究中的应用

本文采用恒温干燥的方法制备出了不同状态的天然色素扫描电镜样品，用扫描电镜观察其超微结构并进行了对应比较，结果表明国内研制的β胡萝卜色素纯度较高，具有良好的开拓前景。     

一种用于观察纤毛虫表膜下结构的扫描电镜样品制备新方法

该实验摸索出通过扫描电镜观察纤毛虫表膜下三维结构的新方法:用适当浓度的KMnO_4作为固定剂,固定虫体细胞表膜,调整固定液的渗透压使细胞在低渗溶液中胀破、细胞质溶出,表膜剥落下来、内外翻转,经脱水、冷冻干燥、喷金后,在扫描电镜下对爽口虫(Climacostomumsp.)、尾草履虫(Paramecium caudatum)及拟尾柱虫(Paraurostyla weissei)的表膜下结构进行了观察。结果表明:利用此方法能够观察到表膜下层次分明而又清晰的三维立体构象。此方法可为纤毛虫表膜及其它细胞质膜的研究提供可借鉴的样品制备新方法。     

观察细胞有丝分裂的一点经验

我们在观察植物细胞有丝分裂的实验时,摸索出一点较简便的方法,现介绍如下: 洋葱根尖的培养我们采用沙盘法培养根尖.即盘中铺二寸左右厚的河沙,把选好的洋葱头并排埋入沙中约1/4,浇透水.夏天放在窗台上,冬天放在暖气旁或火炕上,两天就可取用.待根尖长到约一厘米长时进行固定为好(根过长时,根尖细胞分裂较慢).根尖固定最好在     

蛙类简单的染色体标本制备方法

进行染色体组型分析时,都要制备有丝分裂中期染色体标本。在实验工作中,我用蝌蚪尾部制备染色体标本,方法简便,且效果非常满意。现介绍如下: 1.前处理将刚出卵膜的小蝌蚪放在含有0.2％秋水仙碱的清水中,室温下(25℃左右)培养3小时。 2.低渗将前处理过的蝌蚪尾尖切下,放在蒸馏水或0.075molKCl溶液中30分钟。 3.固定将低渗处理过的尾尖置于固定液[甲醇(或乙醇):冰醋酸=3:1]中固定30分钟。 4.染色压片将经固定的尾尖放在载玻片上,加一     

扫描电镜技术在微晶纤维素的吸附性能研究中的应用

本文介绍了８１２树脂包埋微晶纤维素（ＭＣＣ）然后进行台面腐蚀的扫描电镜样品制备的方法，此方法制备了ＭＣＣ样品可在扫描电镜下观察到其内部的微观变化，是进行微晶纤维素吸附性能研究的理想方法。