一期梅毒实验室诊断差异性研究

目的通过梅毒螺旋体初筛试验、确认试验和鉴别诊断试验,探讨一期梅毒实验室诊断差异性,最大限度减少漏诊与误诊,为深入研发新型早期梅毒诊断试剂奠定基础。方法依据2000年中国卫生部防疫司颁布的性病诊断标准,临床筛选一期梅毒患者86例（研究组）和非梅毒患者100例（对照组）,对患者血清进行甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）初筛和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）确认。筛选临床体征、TRUST法和TPPA法三者结果有差异的患者进一步鉴别诊断,鉴别诊断主要应用荧光定量PCR（FQ-PCR）法、免疫PCR法与自身抗体检测等试验。结果初筛TRUST法灵敏度和特异性分别为62．8％、93．0％;确认TPPA法灵敏度与特异性分别为66．3％、100％。TRUST法和TPPA法两者结果差异占12．8％;临床体征诊断、TRUST法和TPPA法三者结果差异占41．9％。TPPA法与TRUST法两者均阴性的一期梅毒患者中,FQ-PCR阳性率达88．0％,免疫PCR阳性率占40．0％。TPPA法阳性、TRUST法阴性的一期梅毒患者免疫PCR法与TPPA法结果一致;TPPA法阴性、TRUST法阳性11例患者中结核抗体阳性2例,类风湿因子阳性3例与抗Sm抗体结果阳性6例。结论一期梅毒患者实验室诊断结果差异性较大,漏诊与误诊的比例较高,有待研发新型的诊断试剂和提高诊断水平。     

Immuno-PCR法诊断早期梅毒的方法学建立及其应用

目的建立Immuno-PCR法诊断早期梅毒的方法学,评价其灵敏度、特异性、重复性及其临床应用。方法利用基因重组TpN47抗原免疫新西兰兔,制备抗体并用Weston blotting检测;利用抗TpN47抗体作为捕获抗体与血清中TpN47抗原结合,通过链霉亲和素、生物素化抗体、生物素化DNA和PCR扩增等建立Immuno-PCR法检测梅毒螺旋体抗原TpN47体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;收集200例临床标本通过Immuno-PCR法、ELISA、TPPA和TURST法进行临床应用比较。结果 Weston blotting结果显示TpN47抗体阳性;Immuno-PCR比ELISA法敏感性强103倍,比TPPA、TURST强105倍;特异性高,重复性好。临床标本中Immuno-PCR法敏感性和特异性分别为86.00%（P〈0.05）和100.00%,ELISA法为71.00%和98.00%,TPPA法为65.00%和100.00%,TRUST法为68.00%和95.00%。结论 Immuno-PCR法检测梅毒螺旋体TpN47抗原敏感性高,特异性强,重复性好,可作为梅毒螺旋体感染的早期诊断方法 。     

梅毒螺旋体重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的应用

目的：克隆、表达梅毒螺旋体（Treponema pallidum, Tp）膜蛋白TpN47、TpN17、TpN44.5和TpN15,建立双抗原夹心ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法：应用聚合酶链反应法（PCR）从Tp全基因组中扩增4个目的片段,克隆到载体pET-HT-JKM中,在BL21(DE3)plysS菌中诱导表达,Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,辣根过氧化物酶标记,双抗原夹心酶联免疫吸附法检测人血清中的特异性IgM和IgG抗体。结果：成功表达了4种重组蛋白用作ELISA包被和酶标抗原检测国家Tp参比血清,特异性和灵敏度均为100％;检测385份临床血清样本,结果与TPPA法相比符合率达到99％（P＜0.01）,灵敏度和特异性分别为98.2%（162/165）和99.5%（219/220）。结论：表达的4种重组抗原具有很好的生物活性,为理想的梅毒的血清学诊断用抗原。以这4种表达蛋白为基础建立的双抗原夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,而且方法简单,结果客观,易于自动化操作,值得临床大力推广。     

三种方法检测梅毒螺旋体抗体的比较

应用ELISA法、TRUST法和TPPA法分别检测梅毒患者血清标本中梅毒螺旋体IgG抗体,比较3种方法的敏感性和特异性,选择一种适合于梅毒螺旋体抗体检测的高敏感性和高特异性的血清学检测方法。     

现用梅毒血清试验临床应用价值评估

通过检测梅毒患者正规治疗前、后血清抗体变化,评价梅毒实验室各种血清学试验方法对梅毒的诊断和随访的临床意义.本文采用梅毒螺旋体(TP)暗视野显微镜检查、快速血浆反应素(RPR)试验、TP明胶凝集试验(TPPA)和TP-IgM酶联免疫吸附试验(TP-IgM ELISA)等方法对135例梅毒患者正规治疗前、后的血清进行检测....     

西门子ADVIA Centaur XP化学发光免疫分析仪检测梅毒螺旋体特异性抗体的测量阈值建立及结果比较

本研究旨在探讨西门子ADVIA Centaur XP梅毒血清学试验化学发光免疫分析法 (CLIA) 检测梅毒螺旋体特异性抗体的测量阈值,并与化学发光微粒子免疫分析法 (CMIA)、梅毒螺旋体免疫印迹法 (TP-WB) 及梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验 (TPPA) 法检测结果进行比较,为CLIA方法的规范应用提供参考。收集河北燕达医院2018年7月至2019年7月雅培ARCHITECT i2000 CMIA法检测梅毒螺旋体特异性抗体筛查样本30 887例,选取CMIA法筛查梅毒特异性抗体中样品吸光度与临界值的比值 (S/CO) 为1–9的153例患者为研究对象,采用梅毒血清学检测逆序流程,并分别以TP-WB及TPPA法为确认方法,运用MedCalc对结果进行受试者工作特征曲线 (ROC曲线) 分析,获得截断值,采用卡方检验进行计数资料的差异显著性检验。采用不同方法对同一批血清样本梅毒螺旋体特异性抗体的检测结果存在差异,CLIA法与TPPA法差异不显著,与TP-WB法及CMIA法差异显著;分别以TPPA检测结果和TP-WB检测结果为金标准,ROC曲线分析发现,CLIA法的最佳诊断截断值分别为4.01和16.06,曲线下面积分别为0.961和0.838。采用不同梅毒血清学试验方法作为金标准时,CLIA法建议截断值差异较大,因此,CLIA测定梅毒抗体S/CO为1.00–16.06时,实验室血清学检测应推荐首选TP-WB方法学进行复核确证,避免临床误诊发生。     

基因重组抗原检测梅毒螺旋体抗体研究

梅毒是一种传染性很强的性传播疾病,早期诊断是防止其传播及治疗的关键。采用基因重组的梅毒螺旋体P47和P15抗原对289份临床标本进行梅毒螺旋体抗体的检测,并与常规方法进行了比较,结果表明：重组抗原ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并能对梅毒进行早期诊断,可以代替常规方法检测梅毒螺旋体抗体。186份现患和已治愈梅毒患者标本,重组抗原ELISA法、TPHA法和RPR法均为阳性;60份健康献血员标本,重组抗原ELISA法和TPHA法、RPR法均为阴性;17份与梅毒患者有性接触者的标本,重组抗原ELISA法有2份阳性,而TPHA法、RPR法均为阴性,1个月后复查这2份血清TPHA和RPR均为阳性;6份RPR和类风湿因子均为阳性的血清,重组抗原ELISA法和TPHA法均为阴性,;20份肝硬化患者血清,3种方法检测均为阴性。     

免疫-PCR法检测梅毒螺旋体特异性抗体

以梅毒螺旋体重组蛋白为抗原,应用免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体抗体,并同常规ELISA法进行比较,探讨免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体特异性抗体的可行性。结果免疫-PCR法敏感性是常规ELISA法的104倍,阳性检出率高于ELISA法;对照血清标本梅毒螺旋体抗体检测为阴性。表明免疫-PCR方法具有较高敏感性和特异性,有一定的临床推广价值,对梅毒患者的早期诊断及时治疗等具有重要意义。     

化学发光法在梅毒实验诊断中的应用价值

目的:探讨化学发光法在梅毒实验诊断中的应用价值。方法:采用化学发光法、RPR法、TPPA法分别检测150例梅毒患者及125例非梅毒患者血清。结果:化学发光法、RPR法、TPPA法对150例梅毒血清标本和125例非梅毒血清标本对照组的敏感性分别为98.0%、75.3%和97.3%,特异性分别为98.3%、81.6%和97.5%。化学发光法、TPPA法敏感性和特异性明显高于RPR法,差异有统计学意义(P<0.05);化学发光法和TPPA法相比,敏感性和特异性差别不大,差异没有统计学意义(P>0.05);联合3种方法检测,梅毒诊断阳性率可提高到100%。结论:梅毒的化学发光检测法具有极高的敏感性和特异性,是一种自动化、定量检测方法,能够用于梅毒的准确诊断和疗效观察,与传统方法联检可防止误诊、漏诊,具有较大的临床应用价值。     

梅毒实验室检测方法的研究进展

梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种严重危害人类健康的性传播疾病,选择敏感性高、特异性强的检测方法对于梅毒的确证和临床指导应用均具有很重要的意义。当前,有多种梅毒实验室检测方法,其中直接检测法在近十年的临床诊断中仍被经常使用,血清学检测法仍然是目前梅毒实验室诊断的主要方法,以各类PCR技术为代表的梅毒分子生物学检测方法因其具有高度的特异性和敏感性已被广泛应用于临床检验。对梅毒实验室检测技术中直接法、血清学检测法及PCR检测法三类方法的研究进展进行了综述。     

检测梅毒螺旋体抗体的纤维膜条方法的建立及其在诊断中的应用

目的：建立以纤维膜为载体的检测梅毒螺旋体抗体的方法,检查病人血清中对梅毒螺旋体多种抗原的抗体,用于梅毒感染的诊断。方法：将基因工程表达及纯化的梅毒螺旋体蛋白tp15、tp17、tp42和tp47分别结合在纤维膜上,用载抗原的纤维膜条检查血清中的抗体,抗体阳性者在相应抗原位置显示出特异条带。结果：梅毒螺旋体感染者血清中存在特异性抗体,在检查的460份临床诊断的患者血清中,对tp15、tp17、tp42和tp47抗原的抗体检出率分别为41.3%、100%、98.7%和51.7%;134份献血员血清抗体阴性。结论：建立的检测梅毒螺旋体感染的方法可同时检查对多种抗原的抗体,以纤维膜条作为诊断条检测血清抗体方法简便,用于临床诊断更特异、更敏感。     

神经梅毒5例临床分析

目的：探讨梅毒感染后致神经系统损害的临床特征,加强对神经梅毒的认识。方法：回顾性分析5例神经梅毒患者的临床特点、血清学变化、影像学资料。结果：5例梅毒血清学检查、脑脊液梅毒检查均阳性,5例头核磁检查存在特异性改变（4例冠状住可见海马异常信号）,临床特征缺乏特异性。结论：神经梅毒好发于中年男性,梅毒全身症状可不明显,其临床表现多样,容易误诊和漏诊,临床应重视对患者临床特征识别,尤其对患者脑脊液及影像学检查结果识别,对神经梅毒患者的诊治有重要的现实意义。     

PET/CT和超声弹性成像在乳腺癌诊断中的价值对比分析

目的:探讨PET/CT和超声弹性成像(UE)在乳腺癌诊断中的价值。方法:回顾性分析2011年1月至2012年5月在我院确诊的173例乳腺患者的临床资料,所有患者均行PET/CT和UE检查。依据病理组织活检和临床随访分别评价PET/CT和UE对乳腺癌诊断的灵敏性、特异性、准确性,并比较两者的结果。结果:PET/CT和UE诊断乳腺癌的灵敏性分别为98.8%和81.3%;特异性分别为84.3%和97.2%;准确性分别为90.7%和90.2%;两种方法联合检测诊断乳腺癌的灵敏性、特异性、准确性分别为98.8%、98.1%、98.4%,UE检测乳腺癌的敏感性明显低于PET/CT及PET/CT+UE,PET/CT检测乳腺癌的特异性明显低于UE及PET/CT+UE,PET/CT+UE诊断乳腺癌的准确性显著提高(P0.05)。结论:PET/CT和超声弹性成像在乳腺癌诊断中均有较高的应用价值,各有优缺点,二者联合检测可提高乳腺癌诊断的准确率。     

结核感染T细胞斑点试验对肺结核病的临床诊断价值研究

目的：评价结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）对肺结核病的临床诊断价值。方法：选择2012年2月～8月湘雅医院呼吸科住院病人中92例可疑肺结核患者进行T—SPOT．TB检测、结核菌素试验（PPD试验）、结核抗体、血沉及影像学检查及病史收集。分析和比较T．SPOT．TB与传统结核诊断方法的阳性率、特异度、灵敏度并对其检测结果进行相关性分析。结果：92例患者中,48例被确诊为肺结核,其中41例T．SPOT．TB结果阳性,44例非肺结核患者中5例T．SPOT．TB结果阳性。T—SPOT．TB检测的敏感度为85．4％,特异度为88．6％。T-SPOT．TB检测在结核组的阳性检出率（85．4％）显著高于传统检查方法PPD（37．5％,P〈0．01）、结核抗体（16．7％,P〈0．01）、血沉（66．7％,P〈0．05）,在非结核病组中的特异性（88．6％）显著高于血沉（36．6％,P〈0．0J）。PPD与T-SPOT．TB联合可提高诊断结核的阳性率（89．6％）。T．SPOT．TB检测仅与PPD试验的结果存在显著性差异（P〈0．05）。结论：T-SPOT．TB诊断肺结核的敏感性及特异性较传统的PPD实验、结核抗体更高,具有重要的I临床应用价值。     

血清降钙素原在鉴别细菌性感染与自身免疫性疾病活动期中的应用价值

目的：探讨血清降钙素原（procalcitonin,PCT）在鉴别诊断自身免疫性疾病活动期与细菌感染中的应用价值。方法：选择析深圳市保健办2011年1月-2012年3月收治的30例自身免疫性疾病活动期和34例细菌感染患者为研究对象,测定其血清c反应蛋白（C-reactive protein,CRP）和PCT的水平。结果：感染组患者CRP水平为（0．1162±0．0873）gm,PCT水平（2．37±7．02）±10^-3gm,自身免疫活动期患者CRP水平（0．0639±0．0687）gm,PCT浓度（0．09±0．08）×10^-3g／L。ROC曲线下面积（AUC）和95％可信区间（CI）分别为0．75和0186,0．61-0．83和0．74-0．94,差异具有统计学意义（P〈0．05）。CRP联合PCT水平预测的AUC为0．82．其与单独PCT水平相比没有显著性差别（P=0．74）。CRP的最佳临界值为0．0722g／L,灵敏度为73．5％,特异性为69．2％;PCT的最佳临界值为0．09×10^-3g/L,其灵敏度为82．1％,特异性为72．5％。结论：在鉴别活动期自身免疫疾病患者与细菌感染时,PCT的灵敏度与特异性比CRP高,但其联合CRP对此类诊断并无显著意义。     

185例儿童急性白血病流式细胞术免疫分型研究

目的：探讨儿童急性白血病流式细胞术免疫分型的意义。方法：采用流式细胞术三色荧光标记技术和CD45／SSC双参数散点图设门,检测185例儿童急性白血病的免疫表型,对抗原表达情况进行分析。结果：流式细胞术免疫分型和FAB分型的符合率为89．19％。185例儿童急性白血病中,ALL为121例,占AL的65．41％,B—ALL为113例,主要表达B系的CD19（99．12％）、CD22（98．13％）、CD79a（96．19％）、CD10（86．73％）。T—ALL占8例;主要表达CD5（100％）、CD7（100％）、cCD3（100％）、CD8（87．5％）。AML为47例,占25．41％,主要表达CD33（93．62％）、CD15（78．72％）、CD64（76．6％）、MPO（76．6％）、CD13（74．47％）。在B—ALL,AML,T—ALL中,敏感性最高的抗体分别是CD19,CD33,CD5和CD7,特异性最强的抗体分别是CD79a,MPO,cCD3。AMLL为17例,占9．19％,其中B／M为9例,T／B为5例,T／M为3例。My＋-ALL为54例,占ALL的44．63％,表达的髓系抗原为CD13、CD15、CD33、CD64。Ly＋-AML为18例,占AML的38．30％,表达的淋系抗原为CD19、CD4、CD7。系列非相关抗原CD34的表达率为67．57％,HLA—DR的表达率为85．41％,CD38的表达率为80．59％,TdT的表达率为62．59％。结论：流式细胞术免疫分型在白血病分型中起重要作用,是FAB分型的补充和修正,提高了儿童急性白血病诊断的准确率。有必要进一步加强流式细胞术免疫分型的标准化工作。