结核感染T细胞斑点试验对肺外结核诊断价值探讨

目的评价结核感染T细胞斑点试验（T—SPOT．TB）在肺外结核中的诊断价值。方法采用T—SPOT．TB试剂盒对疑诊或待排结核患者外周血中特异性T淋巴细胞进行检测。结果结核感染T细胞斑点试验的对结核病的敏感度、特异度分别为76．7％、84．3％。肺外结核组与肺结核组阳性率分别为92．0％和78．2％,差异有统计学意义（P〈0．05）。该数据显著高于结核菌素试验的31．4％和结核分枝杆菌培养的19．3％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论结核感染T细胞斑点试验是诊断肺外结核的快速敏感方法,值得在临床中推广使用。     

PPD试验和结核抗体检测在儿童结核感染中的应用价值

目的探讨PPD试验和结核抗体检测在儿童结核感染中的诊断价值。方法选取73例诊断明确的住院儿童结核病患儿，38例非结核患儿的PPD试验和结核抗体结果进行回顾性分析。结果PPD试验阳性率84．9％，结核抗体阳性率27．4％，联合检测的阳性率95．9％。结论PPD试验、结核抗体在诊断儿童结核方面有自己的特异性，联合检测具有较高的临床诊断价值。     

T细胞斑点试验反应强度在诊断活动性结核病中的价值

目的探讨结核感染T细胞免疫斑点试验的反应强度与活动性结核病的关系。方法选取2012年6月1日至2014年12月31日期间在重庆医科大学附属第一医院呼吸科342例的住院患者,所有住院患者均进行了结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)。分析T-SPOT.TB对结核病诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值;同时比较在活动性肺内结核病组、活动性肺外结核病组及陈旧性结核病组的T-SPOT.TB的免疫强度。结果 T-SPOT.TB检测结核病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:87.67%,79.19%,64.00%,93.84%。在活动性肺内结核病组中T-SPOT.TB免疫斑点数为抗原A(10,36),抗原B(11,50),在活动性肺外结核病组中为抗原A(15,50),抗原B(15,40);在陈旧性结核病组中为抗原A(6,20),抗原B(6,30)。比较活动性肺内结核病组、肺外结核病组及陈旧性结核病组T-SPOT.TB的免疫斑点数,发现活动性肺内结核病组与活动性肺外结核病组免疫强度强于陈旧性结核病组(H_A=0.015,H_B=0.012,P0.05;H_A=0.006,H_B=0.006,P0.05)。结论 T-SPOT.TB对结核病的诊断有较高的灵敏度和特异性,T-SPOT.TB阴性时可有效的排除结核分枝杆菌的感染,阳性时有利于辅助诊断活动性结核病。     

复治肺结核患者结核分枝杆菌L型培养结果分析

目的：了解复治肺结核患者的结核分枝杆菌L型培养情况,探讨结核分枝杆菌L型阳性与耐多药的关系。方法：选择180例肺结核患者的痰标本进行结核分枝杆菌培养和结核分枝杆菌L型培养,同时对110例复治组中培养阳性的标本行耐药监测。结果：复治组的L型阳性率为43．6％,初治组的L型阳性率为15．7％,复治组显著高于初治组（P〈0．01）;菌阳复治组的L型阳性率50％,菌阴复治组的L型阳性率39．4％,菌阳组明显高于菌阴组（P〈0．05）;L型菌阳性患者的耐药率显著高于L型菌阴性组（P〈0．05）。结论：结核分枝杆菌L型阳性是引起结核病复发、耐药的重要原因;MDR-TB与结核分枝杆菌L型感染有关。     

上海口岸2014-2015年入境人员肺结核筛查情况

为了解上海口岸入境人员肺结核的筛查情况及后续处理,防止结核病通过口岸跨境传播,本研究于2014年1月—2015年12月对所有在上海口岸办理入境体检的14岁以上人员进行结核病筛查,通过病史、体格检查和胸部X线摄影筛查疑似肺结核患者;对疑似肺结核患者进行痰细菌学检测、T‐SPOT ．TB和 Xpert MTB／RIF检测。结果显示,2014—2015年上海口岸入境人员共检出疑似肺结核患者215例,总检出率为229．76／10万;确诊肺结核患者33例,总检出率为35．27／10万,确诊率为15．3％。对210例疑似肺结核患者进行痰细菌学检测,结果显示结核分枝杆菌培阳率为14．3％,非结核分枝杆菌培阳率为17．1％。有95例和78例疑似肺结核患者分别接受 T‐SPOT ．TB和 Xpert MTB／RIF 检测,以痰细菌学检测为“金标准”,T‐SPOT ．TB的灵敏度为100％,特异度为49．4％;Xpert MTB／RIF的灵敏度为87．5％,特异度为96．8％。33例确诊肺结核患者中,25例（75．8％）离境,15例（45．5％）在离境前接受抗结核治疗,8例（24．2％）失访。本研究显示,上海口岸入境人员中肺结核确诊率仍有待提高。筛查与诊断中,T‐SPOT ．TB具备较高灵敏度, Xpert MTB／RIF具备较高特异度,两种方法均有较高应用价值,两者联用可提高检出率,缩短检出时间。对确诊病例或未确诊的可疑病例应加强后续监管。     

γ干扰素释放试验与结核菌素皮肤试验筛查预测活动性结核病的比较

为评估γ干扰素释放试验（T-SPOT ．TB）和结核菌素皮肤试验（TST ）在我国活动性肺结核病患者的家庭接触者中预测活动性结核病的能力,选取157例家庭接触者行T-SPOT ．TB和TST筛查,并前瞻性随访6年。将121例参与随访的家庭接触者纳入分析,T-SPOT ．TB阳性率为49．6％,与年龄﹝ OR＝1．03（95％CI 1．00～1．05）,P＝0．032﹞和接触菌阳患者﹝ OR＝2．13（95％ CI为1．01～4．51）,P＝0．048﹞呈正相关。TST≥5 mm和TST≥10 mm的接触者分别占57．5％和37．2％,其中TST≥10 mm与接触菌阳患者呈正相关﹝ OR＝2．30（95％ CI为1．05～5．06）,P＝0．038﹞。共随访626人年,7例发展为活动性结核病,发病率为11．0／1000人年。T-SPOT ．TB的阳性预测值（PPV）为8．3％,阴性预测值（NPV）为96．7％。TST≥5 mm和TST≥10 mm的PPV分别为7．7％和9．5％,NPV均为95．8％。总之,活动性肺结核病患者的家庭接触者发展为活动性结核病的风险高于一般人群,而T-SPOT ．TB与TST对活动性结核病的预测能力相当。     

7例影像学表现为弥漫肺间质性病变的肺结核报道及文献复习

目的:通过对7例高分辨CT(High Resolution Computed Tomography,HRCT)表现为弥漫肺间质性病变的肺结核患者的相关资料进行分析,结合相关文献,提高对该类肺结核的认识。方法:分析本院2012.2~2015.3确诊的7例HRCT表现为弥漫肺间质性病变的肺结核的临床症状、体征、影像学资料及痰抗酸杆菌、结核菌素纯蛋白衍生物(Purified Protein Derivative,PPD)试验、T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、抗结核抗体、血常规、血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR)等实验室检查、病理检查等资料。结果:6例经2次以上痰涂片阳性确诊为肺结核,1例抗结核治疗有效诊断为肺结核;弥漫肺间质性病变的肺结核患者HRCT上间质性病变的范围与抗酸杆菌的检出及发热症状的出现有关联;与盗汗、乏力、咯血等结核中毒症状及PPD、结核抗体、ESR等指标无明显相关关系。结论:弥漫肺间质性病变也可为肺结核的一种特殊表现,极易误诊为其他间质病变。当患者临床表现及实验室检查无特殊发现时,需考虑肺结核的可能并进行结核病相关检查,尤其是抗酸杆菌及肺组织病理检查,以尽早明确诊断。     

三种免疫学方法在矽肺合并肺结核诊断中的价值研究

目的:探讨T淋巴细胞酶联斑点实验(T-SPOT)、结核菌素皮肤试验(tuberculin test,TST)以及结核抗体(tuberculosis antibody)在矽肺合并肺结核(pulmonary silicosis complicated with tuberculosis)诊断中的应用价值。方法:收集2015年8月7日至2016年5月20日确诊为矽肺结核感染患者41例、非矽肺结核患者90例、健康体检学生对照组40例,对三组人群经以上免疫学方法检测的结果进行统计分析。结果:1)矽肺结核、非矽肺结核及健康人群中T-SPOT阳性率分别为73.17%、93.33%、15%,三者两两比较差异有统计学意义;矽肺结核、非矽肺结核及健康人群中TST阳性率分别为58.54%、88.89%、32.5%,非矽肺结核患者与健康人群及矽肺结核患者之间,差异均有统计学意义,但矽肺结核患者与健康人群之间,差异无统计学意义;矽肺结核、非矽肺结核及健康人群中结核抗体阳性率分别为36.58%、42.22%、52.5%,三者两两比较差异均无统计学意义。2)三种检测方法在矽肺结核患者中的敏感性分别为73.17%、58.54%、36.58%,差异有统计学意义,其中T-SPOT及TST的敏感性均高于结核抗体方法(P0.05);特异性分别为85%、67.5%、47.5%,其中T-SPOT的特异性高于结核抗体方法(P0.05);阳性预测值分别为83.33%、64.86%、41.67%,阴性预测值分别为75.56%、61.36%、42.22%,三种方法的阳性及阴性预测值存在差异,均有统计学意义。3)T-SPOT在I、II、III期矽肺结核检测的阳性率分别为52.38%、94.12%、100%,I期与II期或III期的阳性率之间差异有统计学意义,II期与III期之间阳性率差异无统计学意义。结论:T-SPOT方法具有较高的敏感性及特异性,对矽肺结核辅助诊断及临床分期具有较好的应用价值。     

γ干扰素释放试验在儿童肺结核诊断中的价值

为研究2种γ干扰素释放试验(IGRA)试剂盒在结核病高发、卡介苗(BCG)高接种地区用于诊断儿童肺结核的价值,共入组临床怀疑肺结核患儿114例,其中45例行QuantiFERON-Gold In-Tube(QFT-GIT)检测,69例行T-SPOT.TB检测,收集临床资料,比较2种方法的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)。结果显示,QFT-GIT在儿童肺结核诊断中的灵敏度为84.6%、特异度为81.3%、PPV为91.7%、NPV为76.5%。T-SPOT.TB的灵敏度为72.3%、特异度为93.7%、PPV为97.1%、NPV为53.6%。与未治疗患儿相比,激素治疗患儿QFT-GIT和T-SPOT.TB的阳性率显著下降。研究提示,QFT-GIT和TSPOT.TB较少受潜伏性结核感染的影响,用于中国儿童肺结核的诊断具有较高的PPV。     

应用T细胞酶联免疫斑点法诊断人类免疫缺陷病毒感染合并结核潜伏感染的实验研究

目的探讨T细胞酶联免疫斑点法(TSPOT)在我国人类免疫缺陷病毒(HIV)感染人群中用于诊断结核潜伏感染的应用价值。方法应用TSPOT-TB试剂盒对68例明确诊断的HIV感染者血液标本进行结核分枝杆菌(Mtb)特异性T细胞的检测,同时对所有病例做结核菌素纯蛋白生物(PPD)试验。结果在HIV感染者总体、CD4<200/μl和CD4>200/μl各组中,TSPOT检测阳性率分别为67.65%、44.44%和70.69%,PPD试验阳性率分别为41.18%、11.11%和46.55%,其中在HIV感染者总体及CD4>200/μl组中TSPOT检测阳性率均高于PPD试验,差异有统计学意义(P均<0.005)。TSPOT检测在CD4<200/μl组中的阳性率低于CD4>200/μl组,但差异无统计学意义(P>0.05);PPD试验在CD4<200/μl组中的阳性率远低于CD4>200/μl组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TSPOT检测在我国HIV感染合并结核潜伏感染的早期快速诊断中有较大应用价值,尤其是在CD4细胞计数>200/μl的HIV感染人群中,阳性率高于目前常用的PPD试验。PPD试验阳性率受CD4细胞计数水平的显著影响,而T SPOT检测不首次此因素影响。     

Interferon-gamma release assay performance in pulmonary and extrapulmonary tuberculosis

Background

The diagnosis of tuberculosis remains difficult. This study aimed to assess performance of interferon-gamma release assay (IGRA) in diagnosis of active tuberculosis (ATB) with pulmonary and extrapulmonary involvements, and to determine the diagnostic role of IGRA (T-SPOT.TB) and tuberculin skin test (TST) in BCG-vaccinated population.

Methods and Findings

Two hundred twenty-six ATB suspects were recruited and examined with T-SPOT.TB. Among them, fifty-two and seventy-six subjects were simultaneously tested by TST with 5TU or 1TU of purified protein derivative (PPD). The sensitivity of T-SPOT.TB was 94.7% (71/75), comparable in pulmonary and extrapulmonary disease groups (95.6% vs. 93.3%, P>0.05), while the specificity was 84.10% (90/107) but differed in two groups (69.2% vs. 88.9%, P = 0.02). Compared to T-SPOT.TB, TST with 5TU-PPD showed less sensitivity (92.3% vs. 56.4%) and specificity (84.6% vs. 61.5%) (both P<0.01); the sensitivity of TST with 1TU-PPD was 27.8%, and despite its specificity identical to T-SPOT.TB (both 82.8%) positive predictive value (PPV) was only 33.3%. By combining T-SPOT.TB with TST (1TU), the specificity rose to 95%, but the PPV stayed unchanged.

Conclusions

IGRA could function as a powerful immunodiagnostic test to explore pulmonary and extrapulmonary TB, while TST failed to play a reliable or auxiliary role in identifying TB disease and infection in the BCG-vaccinated population.     

Xpert MTB/RIF在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病患者中诊断结核病的价值

为探讨利福平耐药结核分枝杆菌实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mycobacterium tuberculosis/rifampicin,Xpert MTB/RIF)在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病(human immunodeficiency virus infection/acquired immunodeficiency syndrome,HIV/AIDS)患者中诊断结核病的价值,本研究回顾性分析了2018年1月1日—2020年12月31日复旦大学附属公共卫生临床中心感染与免疫科收治的801例HIV/AIDS合并疑似结核病患者的临床资料。801例患者中,657例进行了Xpert MTB/RIF、外周血结核感染T细胞斑点试验(tuberculosis T cell spot test,T-SPOT.TB)、抗酸染色涂片镜检和BACTEC MGIT 960液体培养等检测。以液体培养及菌型鉴定结果作为结核病诊断的“金标准”,确诊结核病92例,Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB、抗酸染色涂片镜检在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)的灵敏度分别为72.8%、55.4%和69.6%,特异度分别为96.8%、90.3%和84.4%,与“金标准”行一致性检验,Kappa值分别为0.719 (P<0.01)、0.430(P<0.01)和0.424(P<0.01)。Xpert MTB/RIF检测502份呼吸道样本,结果显示其诊断肺结核的灵敏度和特异度分别为66.7%和96.0%;在痰涂片阳性和阴性的患者中,Xpert MTB/RIF诊断肺结核的灵敏度分别为77.4%和35.2%,特异度分别为87.7%和 97.8%。采用Xpert MTB/RIF检测343份肺外标本,结果显示其诊断肺外结核的灵敏度和特异度分别为63.3%和95.2%。以上结果提示,Xpert MTB/RIF在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)具有较高的灵敏度和特异度,诊断肺结核的灵敏度高于肺外结核,因此推荐将其作为HIV/AIDS患者疑似结核病的首选检测方法。     

Diagnostic Performance of Interferon-Gamma Releasing Assay in HIV-Infected Patients in China

Background

Active tuberculosis infection represents a very common and significant threat to HIV-infected patients. But measures to accurately detect it are limited.

Objective

To compare and analyze the diagnostic efficacy of T-SPOT.TB alone and in combination with TST in HIV-infected patients in China.

Method

TST (tuberculin skin test) and T-SPOT.TB were performed on 131 HIV-infected patients admitted in Beijing You’an Hospital and Beijing Ditan Hospital between Oct, 2010 and Jul, 2012, who were initially diagnosed as suspected ATB (active TB). The patients were further categorized into ATB and Not ATB based on clinical and cultural evidences. The performance of TST and T-SPOT.TB were analyzed and compared.

Results

The sensitivity and specificity of T-SPOT.TB were 41.3% and 94.6%, respectively, both higher than TST (12.9% and 91.8%). By combining T-SPOT.TB and TST, the sensitivity did not increase, but specificity was elevated to 100%. TST, T-SPOT.TB and their combinations all performed better in patients with extra-pulmonary diseases than with pulmonary disorders. False-positive T-SPOT.TB results were found to be associated with history of prior TB. In addition, concomitant bacterial infections and low CD4 counts were associated with increased ATB risk.

Conclusions

T-SPOT.TB is superior in screening ATB in HIV-infected patients in China over traditional TST. Additional TST would help to confirm a positive T-SPOT.TB result. Both tests work better for patients with extra-pulmonary conditions.     

结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B、Hsp16.3和ESAT6在血清学检测中的初步应用

目的：探讨结核分枝杆菌分泌蛋白Hsp16.3、Ag85B以及融合蛋白ESAT6-CFP10、Ag85B-Hsp16.3和Ag85B-ESAT6用于TB病人血清学检测的意义。方法：将已构建的含5种目的基因的表达载体（pProEXHTb-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B、pProEXHTb-ESAT6-CFP10、pProEXHTa-Ag85B-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6）,分别转入宿主菌E.coli DH5α中,诱导表达后分别获得Hsp16.3、Ag85B、ESAT6-CFP10、Ag85B-Hsp16.3和Ag85B-ESAT6五种蛋白,采用Ni2＋亲和层析柱进行纯化,并用透析方法进行目的蛋白的复性。将经过复性的5种蛋白分别作为抗原,采用间接ELISA方法检测待测的血清样本,经OPD显色,测定各孔OD490值并判定结果。结果：五种蛋白被成功纯化并复性,通过ELISA方法共检测了22例TB病人血清、10例非结核病人血清和6例正常对照血清,Hsp16.3、Ag85B、ESAT6-CFP10、Ag85B-Hsp16.3和Ag85B-ESAT6这5种抗原的灵敏度分别为36.4%、90.9%、77.3%、95.5%、100%,特异性分别为100%、75%、100%、93.8%、93.8%。统计分析显示,ESAT6-CFP10和Ag85B、Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6这三种蛋白ELISA检测的结果无差异,而与Hsp16.3和痰涂片检测结果有显著差异。结论：Ag85B-Hsp16.3和Ag85B-ESAT6可作为结核分枝杆菌ELISA检测的初选抗原。     

Interferon-Gamma Release Assay Performance of Pleural Fluid and Peripheral Blood in Pleural Tuberculosis

Background

The diagnosis of pleural tuberculosis (TB) remains to be difficult. Interferon-gamma release assay (IGRA) is a promising method for diagnosing TB in low TB burden countries. The release of interferon-gamma (IFN-γ) by T lymphocytes increases at a localized site of infection with Mycobacterium tuberculosis antigen. This study aimed to examine the clinical accuracy of T-SPOT.TB on pleural fluid and peripheral blood for the diagnosis of pleural TB in high TB burden country.

Methods

168 subjects with pleural effusion were enrolled prospectively and examined with T-SPOT.TB on pleural fluid and peripheral blood samples simultaneously.

Results

The receiver operating characteristic (ROC) curve and cut-off value of pleural fluid T-SPOT.TB was established according to spot forming cells (SFC) between culture/biopsy-confirmed pleural TB group and no pleural TB group. The sensitivity of pleural fluid T-SPOT.TB and peripheral blood T-SPOT.TB was similar (96.3% and 92.7%, respectively) (P= 0.691). In contrast, the specificity of pleural fluid T-SPOT.TB (94.5%) was significantly higher than that of peripheral blood T-SPOT.TB (76.1%) (P=0.002). 2% (2/98) of pleural fluid T-SPOT.TB results were indeterminate.

Conclusion

The diagnostic accuracy of peripheral blood T-SPOT.TB is low in high TB burden countries due to latent tuberculosis infection. Pleural fluid T-SPOT.TB is a relatively useful and supplementary test to explore pleural TB in high TB burden countries, but its diagnostic accuracy needs to be validated in further large scale research.     

结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片的制备

目的：利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法：将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗体的多靶点蛋白微阵列,建立免疫金银染色检测系统;使用该芯片对48例临床结核病患者血液样品进行检测,并与“金标准”痰涂片（48例）和痰培养（其中的29例）检测结果进行比较,分析其敏感性;对30名献血员血液样品进行检测,分析其特异性。结果：可视化抗体检测蛋白芯片的敏感性分别为98.5％和96.6％,而痰涂片和痰培养检测方法的敏感性分别为35.4％和48.3％;可视化抗体检测蛋白芯片的特异性为93.3％。结论：建立的结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片检测敏感性显著高于痰涂片和痰培养方法,可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检出率。