离子交换法纯化α-淀粉酶抑制剂

采用离子交换法,利用弱碱性阴离子交换树脂D315吸附小麦粉初提液中的α-淀粉酶抑制剂,对其静态吸附以及洗杂洗脱条件进行研究。通过对静态吸附条件的摸索,得出静态下的最佳工艺条件:上样料液的蛋白质量浓度ρ0=2.5~3.5 mg/mL、pH=8.5~9.5、温度t=30℃、转速150 r/min。最佳洗脱条件:0.1 mol/L NaCl洗杂,0.5mol/L NaCl洗脱。在该条件下,α-淀粉酶抑制剂纯化倍数为4.25倍,收率为64.58%。     

肝素纯化工艺中离子交换树脂的选择与应用研究

研究比较了5种树脂对肝素的吸附能力,从中选出S5428阴离子交换树脂来纯化肝素。通过对各因素的研究,确定了树脂对肝素的静态、动态吸附以及解吸的最佳条件。结果表明:静态吸附的温度45℃,pH 8.0的条件下吸附2 h,肝素的吸附率为90.5%;层析柱的动态吸附温度45℃,肝素溶液进样浓度1.0 mg/mL,进样速度1.5 mL/min,树脂柱能处理1.5 BV肝素液而不发生泄露,吸附量为3.05 mg/mL,达到饱和吸附时可处理4BV的料液,吸附量为9.18 mg/mL;采用2.0 mol/L NaCl洗脱,洗脱流速1.5 mL/min,肝素解吸率可达95.8%,肝素效价可达150 U/mg,效价回收率98%。     

小鼠肠道菌群HPLC分析中色谱分离条件的优化

研究了在小鼠肠道菌群的高效离子交换色谱（HPLC）分析中,不同色谱分离条件对分离效果的影响,确立了最佳色谱条件：样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液（pH8.0）平衡,洗脱盐浓度为1.0mol/L NaCl,洗脱梯度为0.1-0.5mol/L NaCl线性梯度洗脱80min,再经0.5-0.75mol/L NaCl线性梯度洗脱25min,流速1mL/min,进样量为1mL。小鼠肠道菌群HPLC分析方法的建立,为深入研究小鼠肠道菌群的组成和动态变化奠定了基础。     

离子交换法提取大枣中环磷酸腺苷(cAMP)的工艺研究

环磷酸腺苷(cAMP)作为第二信使参与多种生理生化过程的调节,是人体内重要的生理活性物质。本文采用水浸提和6 000 Da超滤膜过滤方法对大枣进行预处理,从5种树脂中选型最合适的树脂,并对提取工艺进行确定。结果表明,大枣在小颗粒状(0.3 cm)捣碎状态下,60℃水浸提12 h,cAMP提取效果最好。通过考察SD5、SD8、D01、D05和D13五种型号离子交换树脂,发现D13型树脂提取大枣中cAMP效果最佳。选用的洗脱剂为0.05 mol/L HCl,流速为1.5 mL/min。得到产品产率为65.0%,其中cAMP含量37.5%。     

桑椹中黄酮类物质的大孔树脂纯化工艺

以桑椹中黄酮类物质的吸附量和解吸率为指标,对比分析HZ-801、HZ-816、HZ-818等12种大孔吸附树脂对桑椹提取液的分离纯化效果,优选出最佳树脂HZ-801并通过对上样液pH、上样液质量浓度、上样量、吸附流速、洗脱剂质量浓度、洗脱剂用量、洗脱流速等影响因素的考察,确定最优工艺:吸附阶段上样液pH=4,上样液质量浓度0.45mg/mL,上样量420mL,吸附流速120mL/h,动态吸附量(干树脂)25.34mg/g,吸附率84.25%;洗脱阶段的洗脱剂体积分数为60%乙醇,洗脱剂用量270mL,洗脱流速120mL/h。此优化工艺条件下的洗脱率为85.78%,总黄酮纯度从23.64%提高到82.36%。     

凝胶层析在发酵液中分离提纯透明质酸中的应用

采用葡聚糖凝胶G-100,以0.1 mol/L氯化钠溶液为洗脱剂,在优化的凝胶层析条件(层析柱高度30 cm、进样量2 ml、洗脱流速1 ml/4 min)下,对透明质酸发酵液进行分离纯化,得到了高纯度的透明质酸.HA提取率达到79.85%,蛋白质去除率为84.93%.     

大孔吸附树脂提取7-木糖-10-去乙酰紫杉醇酶解产物10-去乙酰紫杉醇

本研究利用大孔树脂富集7-木糖10-去乙酰紫杉醇的酶解产物10-去乙酰紫杉醇.首先以10-去乙酰紫杉醇(10-DAT)绝对含量为指标,通过HPLC测定比较HP20、XAD4、XAD16、XAD1600四种大孔树脂对10-去乙酰紫杉醇的吸附与解吸性能力,筛选出最佳树脂XAD1600进行实验.最佳的吸附解吸条件为:树脂柱高径比10:1,吸附流速20 mL/min,吸附量23.85 mg/mL,以6倍柱床体积的90%乙醇为洗脱液,洗脱流速20 mL/min.经XAD1600型树脂富集后10-去乙酰紫杉醇回收率达96.5%,含量20.5%.且树脂柱重复使用3次后,其吸附能力仅降低5%.     

吸附柱层析法制备纯化茶多酚中EGCG单体

以茶多酚为原料,采用吸附树脂柱层析法制备表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体。考察树脂对儿茶素的吸附容量、吸附率、解吸率及吸附选择因数,选择LX-8树脂初步纯化后采用HP-20树脂二次纯化。经LX-8两步柱层析,1.5 BV/h流速洗脱,25%乙醇洗脱组分上柱后经40%乙醇洗脱5 BV可得到纯度为73.06%的EGCG产品。以20 mg/mL浓度的LX-8柱40%乙醇产品上HP-20柱,1.5 BV/h洗脱,5%乙醇洗3 BV,15%乙醇洗6 BV,80%乙醇洗3 BV后,可制得纯度为93.16%,总收率为49.50%的EGCG产品。     

大孔吸附树脂吸附链霉菌702抗真菌活性物质工艺

研究大孔吸附树脂吸附链霉菌702抗真菌活性物质的工艺条件。采用5种不同大孔吸附树脂吸附链霉菌702发酵液提取液中抗真菌活性物质,选择吸附效果较佳树脂进行吸附条件优化,以桔青霉为指示菌,纳他霉素为对照抗生素．采用“管碟法”测定抗真菌活性物质含量。结果发现,XAD18树脂吸附效果较好,获得优化吸附条件：上样液pH6,NaCl质量浓度10g/L,上样量22．63mg／g湿树脂,吸附流速2．5mL／min,水洗体积180mL,洗脱流速1．5mL／min,洗脱剂为体积分数10％、50％和90％的甲醇,洗脱方式为梯度洗脱。在确定的工艺条件下XAD18对链霉菌702抗真菌活性物质的吸附率可达90％,洗脱率可达75％,回收率可达80％。     

离子交换法分离发酵液中鸟苷和肌苷

乌苷发酵液中乌苷与副产物肌苷的分离对乌苷工业有重要的意义。对乌苷和肌苷的分离条件进行研究,得到了最佳分离条件：采用Hd-8树脂,树脂床高度为4cm,前120mL采用0．05mol／L盐酸洗脱收集肌苷,120mL至240mL采用0．74mol／L pH5．0醋酸钠缓冲液洗脱收集乌苷,可以获得很好的效果。     

沼泽生红冬孢酵母生长及产类胡萝卜素培养条件的研究

通过单因素实验和正交实验对沼泽生红冬孢酵母生长和产类胡萝卜素的培养条件进行研究,最适培养条件为葡萄糖40 g/L,牛肉膏10 g/L,酵母膏10 g/L,NaCl 10 g/L,MgSO4.7H2O 0.1 g/L,K2HPO4 2 g/L,KH2PO4 2 g/L,初始pH 6.3,装液量为50 mL/250 mL,摇床转速170 r/min,培养温度为28℃,接种量为10%。在此发酵条件下,培养72 h后,沼泽生红冬孢酵母生物量和类胡萝卜素产量分别达到11.72 g/L和3.55 mg/L。     

酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶的诱导、提纯和性质

在YEPD培养基中添加NaCl,可以诱导酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞内3-磷酸甘油脱氢酶的形成,当NaCl浓度达5％时,酶比活从0.05U/mg提高0.5U/mg;若再限制培养墓中葡萄糖浓度在100mg/L以下,酶比活可达到0.89U/mg。酶比活与培养基中的NaCl浓度的函数关系式为:Sa=0.129C~3-0.038C~2+0.034C+0.063(0≤C≤5％)。粗酶液经Sephadex G-25凝胶过滤,Blue Sepharose亲和层析以及Mono Q离子交换等步骤,提纯123.6倍,得纯酶液。经SDS-凝胶电泳测得分子量为45000±2000。酶的最适温度为51℃,最适pH值为6.8。保温30分钟的半失活温度(t_(1/2))为41℃。NADH和DHAP的Km(mmol/L)值分别为:0.017和0.134。     

人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达优化

考察了在大肠杆菌中自诱导表达人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白的可行性,并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化,以提高蛋白产量。实验结果表明,最优培养基成分为蛋白胨19.17g/L,酵母膏9.59g/L,Na2HPO45.72g/L,KH2PO45.48g/L,(NH4)2SO42.66g/L,NaCl3.33g/L,甘油2%(V/V),葡萄糖0.68g/L,乳糖6.33g/L,MgSO40.24g/L。在温度33°C、接种量1%、pH7、装瓶量20mL/100mL培养条件下,用该最优培养基自诱导表达人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白的产量可达348.6mg/L。     

辅酶Q_(10)产生菌发酵条件的优化

对辅酶Q10生产菌株鞘氨醇单胞菌YZ0803的发酵条件进行优化,确定发酵时间为90 h,250 mL摇瓶装液量为30 mL。培养基组成(质量分数,下同):葡萄糖1.5%,淀粉2.5%,黄豆饼粉2.5%,(NH4)2SO40.5%,NaCl0.03%,K2HPO40.02%,MgSO40.005%。优化后的辅酶Q10产量达到192 mg/L,比采用基础培养基的产量(138mg/L)提高了39.13%。     

重组青霉素G酰化酶拆分制备（S）-邻氯苯甘氨酸

对产青霉素G酰化酶的重组枯草芽胞杆菌发酵产酶条件进行优化,确定优化后的发酵条件：可溶性淀粉10g/L、蛋白胨12g/L、酵母粉3g/L、NaCl10g,／L;pH7．5、培养温度37℃、装液量80mL（500mL三角瓶）、培养28h,青霉素G酰化酶的表达水平由最初的7．34U／mL提高至18．23U／mL。以表达青霉素G酰化酶的枯草芽胞杆菌发酵液为酶源,在水相中对映选择性催化N-苯乙酰-（R,S）-邻氯苯甘氨酸制备（S）-邻氯苯甘氨酸,当底物浓度为100mol／L时转化4h,转化率达44．2％。对底物浓度为80mmoL／L反应液中的（S）-邻氯苯甘氨酸进行分离,达到理论收率的94．29％（以N-苯乙酰-（R,S）-邻氯苯甘氨酸的0．5倍摩尔量为理论产率）,e．e．值大于99．9％。170℃条件下,N-苯乙酰-（R）-邻氯苯甘氨酸与苯乙酸共熔消旋为N-苯乙酰-（R,S）-邻氯苯甘氨酸可用于循环拆分。     

重组人BD3-BPI的内毒素中和活性及其在高盐环境中抗菌活性的稳定性

目的：验证重组人BD3-BPI（rhBD3-BPI）是否具有内毒素中和活性,研究其在高盐环境中是否能保持抗菌活性。方法：根据内毒素标准品绘制内毒素活性标准曲线,将100 μL梯度稀释的rhBD3-BPI-与100 μL 10EU／mL脂多糖（LPS）混匀,37℃水浴60min,同时设标准对照（只含10EU／mL LPS的标准品溶液）,并以无热源水作为空白对照,采用基质显色法进行鲎试验测定LPS的活性;将6×10^8 CFU／mL的革兰阳性和阴性标准菌株及临床分离的多药耐药菌株接种于含1mg／mL rhBD3-BPI和0～250mmol／L不同浓度NaCl的液体细菌培养基中,37℃培养3h后用10mmol／L磷酸钠按1：1～1：1000的比例稀释,铺LB培养基平板,37℃过夜培养,观察各平板菌落生长情况,计数并计算杀菌率。结果：在5EU／mL的标准内毒素体系中,当rhBD3-BPI的浓度高于4μg／mL时即开始表现出一定的内毒素中和活性,当rhBD3-BPI的浓度分别为16、32 μg／mL时,其内毒素中和率分别为23％和88％,随后rhBD3-BPI对内毒素的中和活性趋于平稳,50 μg／mL的rhBD3-BPI对所有受检菌均表现出100％的杀伤效应。当NaCl浓度低于150mmol／L时,rhBD3-BPI对各受检菌的杀菌活性均未受明显影响;NaCI浓度升高至150-200mmol/L,rhBD3-BPI对各受检菌的杀菌活性有所下降,但其杀伤率仍在90％以上;当NaCl浓度高于200mmol／L时,盐浓度对rhBD3-BPI杀菌活性的影响才较为明显,但即使NaCl浓度达到250mmol／L,rhBD3-BPI的杀菌活性仍保持在85％以上。结论：rh-BD3-BPI具有内毒素中和活性,在高盐环境中具有良好的抗菌活性稳定性。     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４－２产脂肪酶活力为５９６ｕ／ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ）为：糊精１０、黄豆饼粉３０、尿素１０、Ｋ２ＨＰＯ４０．５、ＭｇＳＯ４０．５、ＮａＣｌ１和ＡＥＯ９０．５,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９．５～１０．０,在２６℃培养４８ｈ。用ＰＶＡ橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９．８,最适温度３７℃,在ｐＨ８．６～１０．２于５℃存放２４ｈ,酶活力不变。０．１４ｍｏｌ／Ｌ的氯