植物细胞大规模培养技术产业化浅谈

植物细胞培养技术诞生于20世纪初,随着研究的不断进步,逐步发展出植物组织培养、植物器官培养、原生质体培养、细胞培养、冠瘿瘤培养以及不定根或毛状根培养等技术.20世纪80年代前后,利用植物细胞培养生产植物次生代谢产物的研究成为热点.比如1977年Noguchi等就利用20吨发酵罐进行了烟草细胞培养生产尼古丁实验.1977年Alfernmann等利用毛地黄培养细胞把甲基洋地黄毒苷转化为甲基地戈辛,证明植物细胞的生物转化能力.1985年日本的三井石油化学公司利用紫草细胞大规模培养生产紫草宁,并且投放市场,首次将植物细胞培养技术实现了产业化.     

国产生物反应器大规模高密度培养Vero细胞

本文考察了在2．5LcelliGen细胞培养器和国产20LcellCul-20细胞培养生物反应器中采用微载体技术培养细胞的情况。分析了用cellcul-20细胞培养生物反应器进行大规模培养时细胞的生长、代谢规律,研究了从2．5L扩大到20L规模的细胞转移条件。采用微载体球间直接转移技术。提高了接种效率,减少了接种步骤和污染机会。当国产GT一25微载体用量为5g／L,采用连续灌注工艺培养vero细胞,在国产20L cellCul—20细胞培养生物反应器中,连续培养5天,细胞数增加7倍,细胞密度超过1．0×10⁷ cells／m】。本文开发的细胞培养工艺,对于中试及工业规模的动物细胞大量培养具有一定的指导意义。     

水生无脊椎动物细胞培养

目前水生无脊椎动物的细胞培养研究远远落后于哺乳动物和昆虫的培养研究,其培养方法基本仍是套用哺乳动物或昆虫的细胞培养模式。尽管在几十年中进行了一些探索,而且原代培养也取得了一些进展,但到目前为止除了淡水蜗牛胚胎BGE细胞系外,其他动物都还没有成功的建立长时间持续传代的细胞系。现对水生无脊椎动物细胞培养的研究进行综述,并对所面临的主要困难进行了总结,对水生无脊椎动物细胞培养的前景提出了一些看法。     

植物细胞培养生物反应器的种类特点及展望

生物反应器技术应用于植物细胞培养既可以打破环境条件的限制,又有助于生产过程的人为调控,为植物细胞大规模培养或工厂化直接生产植物细胞有用代谢产物创造了条件,是当前植物细胞培养工作的研究热点。在介绍植物细胞培养特点的基础上,对适用于植物细胞培养的各类生物反应器(搅拌式生物反应器、非搅拌式生物反应器、用于植物细胞固定化培养的生物反应器、光生物反应器以及一次性培养生物反应器)的原理、优缺点等进行比较分析,最后提出了植物细胞培养生物反应器研究的发展方向,以期为植物细胞培养生物反应器的选择及改良提供参考。     

麻疹疫苗生产用毒株沪191增殖的动力学研究

通过延长麻疹病毒生产中感染的基质细胞培养时间并连续收获病毒,获得麻疹病毒生产的动力学曲线;通过工艺放大阶段的病毒增殖动力学研究,提高麻疹病毒产量。采用直接接种和间接接种法,接种不同感染量(MOI)的病毒,将转瓶培养单次收获改为转瓶培养多次收获,滴定整个培养期间每次收获液的病毒滴度,观察感染的细胞培养维持状况并计算病毒产量。结果表明,直接接种病毒培养期为20~25d,共收获病毒14~17次;间接接种病毒培养期24d,共收获病毒29次。通过延长感染细胞培养时间和连续收获病毒,获得病毒繁殖的动力学曲线。通过麻疹毒株的增殖动力学研究获得了麻疹疫苗生产毒株沪191增殖动力学相关参数。     

五、轮状病毒的细胞培养

<正>近10年来发现的与人急性胃肠炎有关的病毒的共同特征之一就是难于在细胞培养或器官培养中生长。这些病毒包括轮状病毒、副轮状病毒、Norwalk病毒群、腺病毒、冠状病毒及其它小圆病毒如星状病毒、萼状病毒等。ECHO病毒和Coxsackie病毒虽较容易分离培养,但它们与急性腹泻关系不大。因此,细胞培养法在腹泻病毒研究方面没有发挥更大的作用。腹泻病毒的分类鉴定主要是靠电镜法。     

植物细胞的大规模培养

从1902年德国学者Haberlandt首先进行植物细胞培养的探索以来,经过八十多年的发展,目前植物细胞培养技术已经成为一门精细的实验科学,从选材消毒,接种培养,诱变筛选,继代保存到分离鉴定均已建立了标准的操作程序。八十年代以来,植物细胞培养作为生物技术的一个组成部分,正在发展成为一门新兴的科研产业体系。培养方法的不断改进为植物产品(如植     

细胞培养技术在植物抗性生理研究领域中的应用

本文综述了近10年来有关利用细胞培养技术所进行的抗性生理领域的研究成果,包括在培养过程中植物细胞对外界胁迫的反应、有关利用细胞培养技术研究植物的抗逆性反应,以及植物抗逆性的理论在实际中的应用。大量的实验证明,细胞培养技术在植物抗逆性研究领域具有广阔的应用前景。     

昆虫细胞的大规模培养

昆虫细胞的大规模培养李文青,肖成祖（北京军事医学科学院生物工程研究所,）昆虫细胞培养的鼻祖是德国人ｆｏｒｈａｒｄＢｅｎｄｉｃｔ（１８７８—１９５８）［１］,他在１９１５年发表了有关昆虫细胞培养的第一篇文章［２］。早期,昆虫细胞的培养是为了进行昆虫的生...     

动物细胞生物工程 第1卷

包括的内容有:一,绪论:1.引言 二、细胞培养系统的基本组成部分:2.细胞生物学——基本概念;3.细胞生物——实验;4.细胞生长培养基;5.设备消毒;6.空气消毒;。三、大量细胞培养;7.动物细胞的大批培养和产物;8.动物细胞在连续活动培养基中培养;9.单层细胞生长系统——增殖过程;10.单层细胞生长系统——异型单一过程;     

转染及培养条件对外源性钙离子ATP酶SERCA1a表达的影响

目的评估不同转染及培养条件下COS1细胞过表达钙离子ATP酶SERCA1a的量及活性,探讨影响真核细胞目标蛋白质表达量及活性的因素。方法应用常规的全量或者半量DNA、lipofactamin和plus reagent转染COS1细胞,37℃、34℃或31℃培养2至5d。提取微粒体蛋白后定量并测定SERCA1a的ATP酶活性。结果微粒体蛋白量在细胞培养3至4d达到高峰,改变转染及细胞培养条件,未见明显变化;降低细胞培养温度及提高DNA转染用量,可增加SERCA1a表达量;SERCA1a表达量在8μg DNA转染细胞31℃培养3d达到最高,然而降低细胞培养温度后,SERCA1a的ATP酶活性及EP生成量也随之下降;31℃表达的SERCA1a,其ATP酶活性降低比EP生成量减少的幅度更大,并且ATP酶活性及EP生成量随着细胞培养时间延长而增加。结论应用常规的半量转染试剂、全量DNA瞬时转染COS1细胞,37℃培养3-4d可获得最大量具有正常酶活性的SERCA1a蛋白。降低培养温度虽然可以提高外源性SERCA1a的表达,但却可能影响细胞内蛋白质的准确折叠及正常降解。     

细胞培养技术在植物抗性生理研究领域中的应用

本文综述了近10年来有关利用细胞培养技术所进行的抗性生理领域的研究成果,包括在培养过程中植物细胞对外界胁迫的反应、有关利用细胞培养技术研究植物的抗逆性反应,以及植物抗逆性的理论在实际中的应用。大量的实验证明,细胞培养技术在植物抗逆性研究领域具有广阔的应用前景。     

两液相培养中有机溶剂对细胞毒性的研究进展

在生物化学工程中 ,细胞培养 -分离耦合过程的研究越来越引起人们的重视[1] ,其主要原因一是为了减少代谢产物的反馈作用 ,提高代谢产物产率 ,促进更多的细胞培养工业化进程 ;二是为了协调上游和下游加工过程 ,使整个过程的研究得到优化 ,以提高生产效率 ,降低生成成本。因此近十年细胞培养 -分离耦合过程的研究有了较大的发展。可以说几乎所有主要的生化分离技术都有用在细胞培养 -分离耦合过程的研究上。但研究较多的是细胞培养与萃取分离耦合 ,即两液相培养 ,并证明这是一项很有用的技术。两液相培养研究所涉及的内容很多 ,但最重要的是…     

病毒学研究中常用的细胞系和细胞株一览表

<正> 病毒必须依赖宿主细胞的酶和代谢系统才能生存和进行复制。组织培养法由于其本身的许多优点已成为理想的病毒培养系统。组织培养技术的发展为病毒学提供了很好的工具和方法,它已广泛应用于病毒性疾病的诊断、疫苗生产、抗病毒药物的研究以及病毒学基础理论的研究,如病毒复制过程、病毒免疫和病毒生物化学等。 从培养类型来看,组织培养可分为组织块培养、原代细胞培养、次代细胞培养、传代细胞系、传代细胞株和器管培养等。     

国产生物反应器及其在病毒培养中的应用

本文简要介绍了华东化工学院研制的CellCuI-20细胞培养生物反应器,报道了此反应器用于细胞和病毒培养的情况。经严格的无菌试验和一年多的培养表明：CellCul－20反应器具有优良的抗污染性能,其主要参数的控制完全满足细胞培养的要求,并能根据培养过程的实际情况,随时对参数进行修正。用所开发的培养工艺进行Vero细胞和乙脑病毒培养,细胞在较短时间内达到高密度,乙脑病毒滴度和抗原效价均取得了较为满意的结果。在国际上第一次成功地应用Vero细胞大规模培养乙脑病毒原制苗。     

小牛皮提取的胶原－微载体用于贴壁细胞大规模培养

由于胶原蛋白具有与含牛血清培养基中纤粘素(Fibronectin)一类物质相结合的特点,因而胶原是一类来源广泛的可用作制备细胞培养介质的优良基质。经过各种形式的细胞培养试验,以变性胶原为材料合成得到的GT一2微载体可成功地用于Vero,CHO、Bowes以及鱼类细胞的贴壁培养。培养规模包括不同容积的静置培养,滚瓶培养以及1．5L和20L进口和国产生物反应器的大规模细胞培养。     

新生BALB/c小鼠大脑皮质神经元细胞培养方法的建立

目的:经改良和优化,建立高纯度BALB/c小鼠大脑皮质神经元培养的方法.方法:采用L-多聚赖氨酸包被细胞培养板,取新生BALB/c小鼠(出生24 h内)大脑皮质组织,经0.25%胰酶消化后吹打成单个细胞,按1×106/孔接种于35 mm的六孔板中,用神经元细胞培养种植液培养6 h后换神经元细胞培养饲养液,培养40 h时...     

表达重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞灌流培养基的筛选

目的筛选重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞株培养和连续灌流表达用培养基,以提高抗体表达量。方法通过调整原有批培养用培养基中谷氨酰胺和植物水解蛋白,获得5种培养基配比。使用模拟灌注方式进行细胞培养,分析细胞密度、活细胞比率和目标蛋白表达,筛选连续灌流细胞培养和表达用培养基。最后在7 L反应器中采用灌注培养方式对筛选获得的培养基进行验证。结果使用50 mL细胞培养管进行模拟灌注培养时,活细胞比率较高,达到90%以上;CHO细胞在添加谷氨酰胺至4.0 mmol/L和植物水解蛋白至5.0 g/L的批培养用培养基中生长速度最快;在基础培养基中抗体表达量比优化前高15%。20 d培养周期内,优化的培养基在7 L反应器中可以维持CHO细胞密度在(2 727±253)万个/mL,活细胞比率在95%以上。结论通过模拟灌注培养,筛选获得了一种在7 L反应器灌流培养中适宜于重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞表达的培养基。     

长春花细胞培养与吲哚生物碱的生产

本文简要介绍长春花细胞培养与吲哚生物碱生产的研究概况,包括培养方法、培养系统、分析方法、培养条件的影响、高产细胞系的筛选和保存、生物碱的生物合成等方面。以求对我国的细胞培养工业化生产药用成分的研究有所借鉴。     

细胞培养的支原体污染

<正>运用细胞培养进行病毒繁殖时,支原体污染是经常遇到的而且是非常严重的问题之一。这些污染对培养细胞产生各种各样的恶果:改变各种代谢活动致使不能进行培养细胞的正常生化研究;细胞生长速度减缓,迫使二倍体细胞系过早衰老,染色体发生畸变,并引起细胞形态的永久改变。事实表明:支原体污染虽会降低细胞培养中病毒的合成,但有时也能促进病毒的繁殖,这可能是支原体对干扰素产生的抑制。