猫外侧膝状体神经元HRP示踪结合生长抑素的免疫组织化学研究

本文采用HRP逆行示踪的方法,在猫视皮质的17区多点微量注射30％HRP,逆行标记外侧膝状体核（LGN）至视皮质的中继神经元,继用免疫金银法作生长抑素（SS）免疫组织化学,试图双标记LGN的中断神经元。结果显示：光镜下HRP标记细胞与SS是性细胞清晰可辨,HRP标记细胞内为较粗的棕色颗粒,分布于胞浆和树突基部;而SS免疫阳性细胞内的颗粒为银染黑色颗粒;HRP和SS双标记神经元内,上述两种颗粒共存,警备LGN的A、A1和C板层均有SS免疫阳性凶的分布;HRP标记细胞分布于A和A1板层;双标记神经元位于A和A1板层;C板层未见。本文结合以前的研究认为,SS在LGN至视皮质传导通路中的作用,可能与视觉信息的传递和调制有关。     

扬子鳄梨状皮质NOS、AChE阳性神经元的分布

目的观察扬子鳄梨状皮质内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcho-linesterase,AChE)阳性神经元的形态和分布,为扬子鳄脑的比较解剖学积累资料,为其机能研究提供形态学依据。方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法和亚铁氰化酮法观察扬子鳄梨状皮质内NOS和AChE阳性神经元的分布和特征。结果扬子鳄梨状皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布,为大、中、小型细胞,以中小型细胞为主,胞体呈圆形、椭圆形、三角形和梭形。结论扬子鳄梨状皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布。     

扬子鳄纹状体AChE、SOMmRNA阳性神经元的分布

目的 观察扬子鳄纹状体内乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）和生长抑素信使核糖核酸（somatostatin messenger ribonucleic acid,SOMmRNA）阳性神经元的形态和分布.方法 采用亚铁氰化酮法和原位杂交法观察扬子鳄纹状体内AChE和SOMmRNA阳性神经元的分布和特征.结果 扬子鳄纹状体内有AChE和SOMmRNA阳性神经元分布,两种神经元均有大、中、小型细胞,以中、小型细胞为主,神经元胞体呈圆形、椭圆形、三角形、梭形和多角形.结论 扬子鳄纹状体内有AChE和SOMmRNA阳性神经元分布.     

猫外侧膝状体年龄相关性形态学变化

目的比较青年猫与老年猫外侧膝状体(lateral geniculate nucleus,LGN)神经元及γ-氨基丁酸(gama-aminobutyric acid,GABA)能神经元的年龄相关性变化,探讨老年个体视觉功能衰退的相关神经机理。方法Nissl染色示猫外侧膝状体分层结构(A、A1、C3层)及神经元,免疫组织化学法示GABA免疫阳性神经元。光镜下观察、拍照,Nissl染色切片测量外侧膝状体各层厚度、神经元胞体直径并计数神经元数量;免疫组化染色切片测量外侧膝状体各层中GABA阳性神经元胞体直径并计数GABA阳性神经元数量。结果青年猫及老年猫外侧膝状体各层厚度、神经元数量及胞体直径无明显改变(P>0.05);与青年猫相比,老年猫外侧膝状体各层中GABA阳性神经元数量及胞体直径均有不同程度的显著下降(P<0.01),且GABA免疫阳性反应减弱。结论在动物个体衰老进程中,外侧膝状体总体神经元保持相对稳定可能对老年个体维持视觉功能具有一定意义;老年个体外侧膝状体GABA能神经元对视觉信息传递及整合过程的抑制性调节功能削弱,可能是外侧膝状体水平上导致老年个体视觉功能衰退的原因之一。     

成年哺乳动物皮质区神经发生的研究进展

神经发生是神经干细胞在适当的条件下分化成功能性整合神经元的过程,主要包括细胞的增殖、迁移、分化和存活。成年神经发生区以前脑室管膜下区(Subventricular zones,SVZ)和海马齿状回颗粒层下区(Subgranular zones,SGZ)为主,但皮质作为神经元和神经胶质细胞数量最多、分布最广,同时也是哺乳动物高度发展的脑区,是否有成年神经元新生,已成为近年来神经科学领域的研究热点[1,2]。现本文就未成熟神经元在皮质区的研究方法、分布、来源与转归、病理生理功能影响等方面探讨成年哺乳动物皮质神经发生现象。     

前脑生长抑素样神经元对大鼠颈部食管前运动神经元的支配——PRV和SOM荧光双标记法研究

用ＰＲＶ和ＳＯＭ免疫荧光双标记法研究了前脑中ＳＯＭ样神经元对孤束核中食管前运动神经元的支配。当ＰＲＶ注射于大鼠颈部食管后,在大脑皮质前部嗅沟背侧的无颗粒型岛叶皮质后部和嗅沟腹侧的梨状前皮质前部可见较多ＰＲＶ和ＳＯＭ双标记细胞。在终纹床核、内侧视前区、外侧视前区和正中视前区、终板血管器、穹隆下器、以及嗅结节等处也可见少量ＰＲＶ和ＳＯＭ双标记细胞。本文推测脑对颈部食管运动的调节是由广泛的中枢神经系统结构来完成的     

Gas7在大鼠梨状皮质发育过程中的表达

目的研究生长休止蛋白(Growth arrest-specific protein 7,Gas7)在大鼠梨状皮质发育过程中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测Gas7核酸与蛋白在SD大鼠胚胎第18.5天(E18.5)、E20.5、出生当天(P0)、生后第7天(P7)、P14、P21和成年(Adult)各时期梨状皮质中的表达。结果 RT-PCR结果显示Gas7核酸在大鼠梨状皮质各发育时期均有表达,在P14时表达最强;免疫组织化学方法显示梨状皮质在E18.5时即出现Gas7免疫阳性产物,至P7时出现清晰的Gas7免疫阳性细胞,至P14时细胞数达到峰值,免疫阳性反应最强,P21细胞数少于P14(P0.05),Adult细胞数少于P21(P0.05)。结论 Gas7在梨状皮质的表达具有时间上的差异性,提示Gas7可能在梨状皮质结构形成和功能成熟方面起着重要的调控作用。     

小脑皮质结构年龄相关变化的研究进展

衰老过程中小脑皮质出现明显的形态学变化,包括体积萎缩、重量减轻、皮层厚度下降、神经元数量减少,树突丢失、细胞超微结构改变、神经递质紊乱以及胶质细胞增生等。神经元数量丢失与结构退变以及神经递质改变可能会导致老年小脑皮质神经环路破坏和信息传输紊乱,与老年个体运动调节功能及运动学习能力下降有关;神经胶质活动增强对维持老年小脑皮质的形态和功能可能起保护作用。     

大鼠视皮质—外侧膝状体HRP示踪结合谷氨酸及GABA免疫组化研究

采用HRP逆行追踪观察了大鼠视皮质锥体细胞至外侧膝状体背核的投射,结合谷氨酸及GABA免疫组化方法探测了该类细胞的化学递质。光镜下HRP标记细胞与谷氨酸和GABA免疫阳性细胞清晰可辨。谷氨酸免疫阳性神经元主要分布在视皮质第Ⅱ～Ⅵ层。在第Ⅵ层可见HRP和谷氨酸双标记的锥体细胞,双标细胞的数量约占HRP标记细胞总数的42.7％。GABA免疫阳性神经元分布在皮质各层。但未见有GABA和HRP的双标记神经元。因而有充分理由推测:谷氨酸可能是视皮质投射至外侧膝状体背核的锥体细胞的神经递质之一。     

扬子鳄新皮质NOS、AChE阳性神经元的分布

目的 观察扬子鳄新皮质内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)阳性神经元的形态和分布,为扬子鳄脑的比较解剖学积累资料,为其机能研究提供形态学依据.方法 采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法和亚铁氰化酮法观察扬子鳄新皮质内NOS和AChE阳性神经元的分布和特征.结果 扬子鳄新皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布,为大、中、小型细胞,以中小型细胞为主,胞体呈圆形、椭圆形、三角形和梭形.结论 扬子鳄新皮质内有NOS和AChE阳性神经元分布.     

磷酸化的p44/42MAPK在成年猫端脑和间脑内的分布

为研究丝裂原激活的蛋白激酶（p44/42mitogen-activated protein kinase,缩写为p44/42MAPK)在正常动物脑内的功能,用免疫组织化学方法对正常家猫端脑和间脑内,磷酸化p44/42MAPK的分布进行了研究,结果表明在正常猫端脑和间脑内,磷酸化p44/42MAPK的存在范围比较广泛,嗅球,岛叶,梨状皮质,外侧隔区,海马锥体细胞层,下丘脑腹内侧核及弓状核内均有较多的阳性神经元,杏仁核存在中等量的阳性神经元,另外,新皮质Ⅱ层,内侧隔区,齿状回,纹状体,后脑室旁核和外侧缰核,下丘脑室旁核有散在分布的阳性神经元,外侧膝状体和丘脑腹后核有许多胶质细胞呈免疫阳性染色。咱束内有浓密的阳性纤维。本研究结果表明p44/42MAPK存在于与嗅觉,情绪,内分泌和记忆活动等功能有关的脑区和核团,提示其参与这些功能过程,本文还提示p44/42MAPK既与神经细胞,也与神经胶质细胞的信号转导有关。     

友鼠外侧膝状体中继神经元HRP示踪结合谷氨酸免疫组织化学研究

采用 HRP逆行追踪结合谷氨酸免疫组织化学方法观察大鼠外侧膝状体背侧核 (d L GN)中继神经元的化学递质。光镜下 HRP标记细胞与谷氨酸免疫阳性细胞清晰可辩。HRP单标记细胞位于外侧膝状体背侧核内 ,胞浆及树突基部充满棕色颗粒。免疫金银法 (IGSS)单标记的谷氨酸免疫阳性神经元分布于外侧膝状体背侧核与腹侧核 ,胞体内充满黑色银颗粒。在外侧膝状体背侧核内可见 HRP和谷氨酸双标记细胞 ,其数目占 HRP标记细胞总数的 70 .9± 6 .4%。本文提示 ,谷氨酸可能是外侧膝状体背侧核投射至视皮质的中继神经元的神经递质之一。     

GnRH-a对大鼠海马和皮质部位parvalbumin表达的影响

目的:研究促性腺激素释放激素类似物(gonadotropin releasing hormone analogue,GnRH-a)对大鼠海马、皮质部位小白蛋白(parvalbumin,PV)表达的影响.方法:采用酶联免疫吸附试验测定血清激素水平,免疫组织化学和图像分析观察大鼠海马、皮质部位PV的表达.结果:①GnRH-a组大鼠血清雌二醇(estradiol,E2)、LH及FSH水平较正常对照组下降,差异有统计学意义(P<0.05);与OVX组比较LH、FSH较低,差异有统计学意义(P<0.05),但E2差异不显著.②正常情况下,大鼠海马、皮质部位可观察到PV神经元及纤维分布.③GnRH-a组PV细胞数及灰度值低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),与去卵巢组大鼠组相似;GnRH-a+E2联合用药后,PV细胞数及灰度值与正常对照组相似.结论:GnRH-a降低大鼠海马、皮质部位神经元中PV的表达,从而影响神经元的功能,这可能与其用药后神经精神副反应有一定关系.     

哺乳动物成体神经元的再生:内、外环境因子的作用

哺乳动物成体神经元的再生现象是最近三十年才被科学家们所认识并逐渐接受的。随着科研方法与实验技术的发展,在成年哺乳动物的一些特定脑区,比如海马齿状回(Dentate gyrus of the hippocampus)、室下区(Subventricular zone)和杏仁核(Amygdala)中发现了新生细胞。研究表明,内外环境因子可影响成体神经元的再生。具体表现在环境多样性、自主活动、有益社会交往、短日光照、化学刺激以及诸如5—羟色胺和脑源性神经营养因子等神经递质水平的增加,都会促进新生细胞的增生或存活。而负面社会交往及应激激素皮质酮对成体神经元的再生有抑制和降低作用。研究还表明,根据种和性别的差异,类脂醇激素对成体神经元的再生起到促进或抑制作用。最新的实验证实新生细胞在成体中具有显著功能[动物学报49(2)：151—162,2003]。     

大鼠大脑皮质星形胶质细胞条件培养液促进小脑皮质神经元的生长

本研究从大鼠大脑皮质分离、纯化星形胶质细胞,再经培养后收集星形胶质细胞的无血清条件培养液。用盖玻片培养法与快速自动比色微量分析法研究了星形胶质细胞条件培养液对小脑皮质神经元生存以及神经元活力的影响。发现星形胶质细胞条件培养液能够明显提高小脑皮质神经元的体外存活率,增强神经元的活力。表明星形胶质细胞具有神经营养性作用。     

果蝇胶质细胞在神经系统的功能研究进展

胶质细胞是一类广泛存在于神经系统的细胞,但其在神经系统的功能作用尚不太清楚。果蝇神经系统中也存在多种的胶质细胞,包括表面胶质细胞(Surface glia)、皮质胶质细胞(Cortex glia)、类星形胶质细胞(Astrocyte-like glia)、神经节包裹型胶质细胞(Ensheathing glia)和轴突包裹型胶质细胞(Wrapping glia)。本综述介绍果蝇胶质细胞研究的近期进展,研究表明果蝇胶质细胞能激活神经干细胞分裂,维持神经干细胞的存活,促进视叶神经上皮细胞的增殖。胶质细胞还能维持神经元的存活,以及促进轴突的形成、聚束和正常的投射。此外,胶质细胞还具有清除凋亡神经细胞的作用。     

前边缘皮质生长激素抑制素神经元在吗啡引起的行为学改变中的作用

药物成瘾是一种由药物滥用所引起的慢性、复发性的精神疾病,主要特征是不计后果的强迫性用药。药物成瘾涉及多个脑区的神经可塑性改变。前边缘皮质(prelimbic cortex, PrL)是背内侧前额叶皮质的主要区域,有大量的锥体神经元,其兴奋性神经投射可以促进可卡因觅药行为。PrL还存在少量GABA能中间神经元,对PrL的兴奋性神经元功能、信息整合和传递起到重要的调控作用,而这一部分神经元在药物成瘾过程中的作用并不清楚。小清蛋白(parvalbumin, PV)和生长激素抑制素(somatostatin, SST)神经元是前额叶皮质中分布广泛的两类主要的抑制性GABA能中间神经元。本研究利用PV-Cre和SSTCre的转基因小鼠,结合化学遗传学的方法探究PrL中间神经元在吗啡引起的行为学改变中的作用。结果显示,特异性抑制PrL脑区SST神经元可以显著增加小鼠的焦虑水平,但不影响小鼠的运动能力;抑制PrL脑区SST神经元降低小鼠吗啡诱导的活动性增强及条件位置偏爱;而抑制PrL脑区PV神经元则对小鼠的运动能力、焦虑水平及吗啡引起的行为学改变均没有显著影响。本研究通过对PrL脑区PV及SST中间神经元在吗啡诱导的行为学改变中作用的研究,为成瘾药物作用的细胞及神经基础提供了依据。     

大鼠躯体感觉皮质即早基因c-fos表达的研究

选择性地对大鼠单根触须刺激后,通过原位杂交组织化学检测相应的躯体感觉皮质内即早基因c-fos的表达、局部定位以及与刺激强度的关系。结果表明,触须的刺激导致了相应皮质内即早基因c－fos表达增加。脑皮质第4层基因表达最明显。且基因表达量与刺激强度成正比。从脑皮质细胞组成方面证实了c-fos表达主要在皮质第4层的星形细胞;在最强的刺激后,星形细胞邻近的神经元也被标记上了。结果提示：感觉输入可影响即早基因c-fos的表达,即早基因的表达受神经元活动的调节,这种基因调节是神经元整体功能所必需的一部分。     

雌激素在脑缺血诱导的大鼠齿状回神经再生中的作用

为研究雌激素对成年动物局灶性脑缺血诱导成年动物海马齿状回神经元再生的影响,将雄性SD大鼠分为假手术 雌激素组(SE)、假手术 生理盐水替代组(SN)、缺血 雌激素组(ME)和缺血 生理盐水替代组(MN),右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)建立脑缺血模型。在缺血90min后恢复供血再灌注,分别于再灌注后1、3、12、24和28h处死老鼠并检测各组大鼠脑梗死体积、细胞凋亡以及脑缺血诱导的成年动物海马齿状回神经元再生的情况。在5个时间点的检测中,ME组脑梗死体积显著小于SE组(P<0.05);在MCAO大鼠中,海马齿状回区域并未发现有神经元丢失及凋亡的现象。同时,MN组与SN组相比较,损伤侧齿状回新生神经元数目明显增多(P<0.05),说明这种缺血诱导的神经元再生并不依赖于齿状回区域神经细胞的死亡;ME组与MN组相比较,损伤侧新生神经元数目显著增多(P<0.05);SE与SN组相比较,手术侧和对侧的新生神经元数目都显著增加(P<0.05)。结果提示雌激素对局灶性脑缺血后海马齿状回神经元再生具有促进作用,且这种促进作用与海马缺血损伤程度无关。     

P物质受体在大鼠纹状体边缘区内的表达

我们以前的工作观察到纹状体边缘区内有密集的P物质纤维及终末分布,本用原位杂交和免疫组织化学方法研究了大鼠纹状体边缘区内P物质受体（SPR）的表达及分布,原位杂交结果发现P物质mRNA阳性杂交信号在纹状体内的分布不均匀,尾壳核内只有少量中等大小的阳性胞体,苍白球内只有少量较大的阳性胸体,而在尾壳核和苍白球之间的边缘区部位则可见许多中等大小的梭形阳性神经元胞体,并呈现密集的带关分布。免疫组织化学结果观察到P物质阳性神经元胞体在纹状体内的分布与原位杂交结果一致。推测大鼠纹体边缘区内可以合成P物质受体,具有接受和整合P物质神经递质的功能,推测边缘区内SPR神经元可能对SP递质的接受、调节有重要作用。