火龙果茎基因组DNA提取方法改良

火龙果(Hylocereus undulatus)是近年发展起来的一种新兴热带水果, 其茎富含多糖、多酚及其它次生代谢物, 黏性极大, 很难从中提取高质量的DNA。特别是一年生以上的老茎, 目前尚未有较好的DNA提取方法。为了解决这一难题, 该研究对CTAB+Tris-HCl洗涤法进行了3种方式的改良。结果表明, “改进三”方法可不受取样时期和取样部位的限制, 从一年生以上火龙果茎中提取的DNA质量最好且不含黏性物质, 可用于酶切与分子标记等生化和分子生物学实验。该研究探索了一条较为理想的火龙果茎DNA提取方法, 值得推广应用。     

一种鱼类DNA的非损伤检测方法

为了减少和改变对濒危野生鱼类的大量伤害性取样,本文探索了从非损伤性取样的鱼类体表粘液样品中提取鱼类基因组DNA的方法,并用常用的两种分子标记(Cyt b和D-Loop)检测了分离到的粘液DNA。结果表明,从非损伤性取样的鱼类粘液样品中能够分离到高质量的鱼类基因组DNA,可用于后续的研究工作。鱼类体表粘液的非损伤性取样及其DNA提取,为濒危野生鱼类遗传学研究提供了一种新的非损伤性DNA检测技术。     

石斛干品基因组DNA的提取与RAPD分析

市场中药干品的药性差异一直是影响中药标准化的瓶颈,而检测技术相对落后是导致这一现象的主要原因。DNA分子水平检测的困难是药材干品的基因组DNA难以提取。本文以铁皮石斛(Dendrobium candidum)干茎为材料,采用了四种方法从干品石斛中提取基因组DNA。结果表明,采用改良的CTAB法可从石斛干品尤其是干茎皮中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23kb,以此DNA为模板进行不同引物的PCR扩增可获得清晰的RAPD条带。该研究初步建立了石斛干品合适的RAPD技术体系。     

对影响哺乳动物粪便DNA提取相关因素的探讨

从动物粪便中提取DNA是一种优秀的非损伤性取样方法,然而在实际操作中成功提取高质量粪便DNA却是一件不太容易的事情.粪便DNA的获取不仅与提取方法有关,还受到样品采集、保存、二次取样、预处理等相关环节的影响,对其中任一环节的忽视都会导致试验达不到理想效果.综合国内外具有代表性的哺乳动物粪便DNA提取技术,对有关环节进行了详细的评述,并对PCR扩增中的常见问题进行了分析和讨论.     

响应面法优化火龙果茎甾醇的提取及纯化工艺研究

以火龙果茎为原料,研究火龙果茎甾醇的提取及精制工艺.利用响应面分析法对火龙果茎甾醇超声提取工艺进行优化.结果表明:超声波辅助提取火龙果茎甾醇的最佳工艺条件为提取时间57 min、超声功率143 W、液料比12∶1 (mL/g)、温度53℃,甾醇得率为2.693％‰.通过正交试验确定火龙果茎甾醇精制的最佳条件为:液料比为4∶1(mL/mg),结晶初始温度为55℃,养品时间为18h,此条件下火龙果茎甾醇的纯度达到87.6％.     

应用非伤害性取样提取番鸭毛囊组织总RNA

目的:寻求一种从番鸭毛囊组织中高效提取总RNA的方法。方法:探讨了伤害性取样(剪切皮肤毛囊)、非伤害性取样(直接拔取毛囊)2种不同毛囊取样法对总RNA提取质量的影响,并对常用RNA提取方法TRIzol法中研磨和组织匀浆步骤细节稍加改进,琼脂糖电泳检测总RNA质量。结果:2种毛囊取样方法均能提取出高质量的总RNA,其28S、18S和5S条带清晰可见,无DNA污染。结论:非伤害性取样法可作为番鸭毛囊组织总RNA提取的适用取样方法。     

中国大鲵非损害性DNA取样及提取方法的比较研究

基于DNA 分子的研究方法在物种分类及系统学、生态遗传学、保护生物学等领域中被广泛运用,但针对动物DNA取样方法的比较研究整体上较为缺乏。动物DNA取样要在对实验对象造成最小化影响和获得满足研究需要的DNA之间保持平衡,这需要不断探索取样方法的优缺点和适用性。本研究以人工繁育的水生有尾两栖动物中国大鲵（Andrias davidianus）为研究对象,比较口腔拭子、皮肤拭子、皮肤脱落物和尾静脉采血4种取样方式对DNA质量的影响。另外,基于其中皮肤拭子样品,进一步比较试剂盒法、高盐法、苯酚氯仿法和磁珠法对DNA提取效果的影响。结果表明,4种非损害性取样方法均能获取目标物种的DNA,且均未对取样对象的行为或适合度产生明显影响,但在DNA质量和浓度方面存在一定差异,其中,相对最好的为尾静脉采血,其次是口腔拭子和皮肤拭子,最差的为皮肤脱落物样品。而基于皮肤拭子样品采用4种不同DNA提取方法所获得的DNA效果整体差异不大。本研究通过以中国大鲵作为水生和非皮毛类动物的代表类群,研究并总结了不同DNA取样方法和提取方式的优缺点和注意事项,可为未来中国大鲵或其他珍稀濒危动物的非损害性取样方法及相关分子生态学研究提供借鉴。     

一种从雉类孵化卵壳中提取DNA的方法

从鸟类已孵化的卵壳中提取DNA属于一种非损伤性取样技术,在鸟类分子生态学研究中具有广阔的应用前景。本实验以河南董寨自然保护区白冠长尾雉(Syrmaticus reevesii)和环颈雉(Phasianuscolchicus)已孵化的卵壳为材料,利用红细胞破碎液、蛋白酶K及RNA酶等试剂,对卵壳膜内的总DNA进行了提取,建立了一种提取高质量DNA的新方法。琼脂糖凝胶电泳检测显示,采用新改进的方法提取出的DNA条带清晰。同时,利用聚合酶链式反应(PCR)技术成功地从总DNA中扩增出两种雉类的线粒体DNA控制区(CR)片段,测序后与GenBank中同一物种的CR序列进行比对,结果证实了PCR产物的真实性。文中利用卵壳膜提取出的DNA,对一窝环颈雉的雏鸟进行了性别鉴定,其结果与根据形态特征进行鉴定的结果完全一致,均为3雄4雌,从而证实了从卵壳膜中提取DNA的真实性。该种DNA提取方法在雉类研究中将具有广泛的应用。     

湿地土壤微生物DNA提取及其脱腐技术

DNA分子生物学技术的广泛应用,为全面了解微生物群落提供了有力的工具。本文建立了一种新的从湿地土壤中提取微生物总DNA的方法,即氯化钙-SDS-酶法。在直接提取DNA过程中采用氯化钙去除腐殖酸,DNA提取缓冲液中不使用EDTA螯合剂,提取过程用时4h左右。与其他两种方法相比,该方法高效去除湿地土壤腐殖酸,纯度较高,满足PCR扩增,为微生物生态学研究提供了一种高效的湿地土壤微生物总DNA提取和纯化技术。     

一种改良的植物基因组DNA通用提取方法

高质量的基因组DNA是分子生物学研究的基础,而从富含糖类和次生代谢物且异质性强的植物材料中分离DNA相对困难。本方法在CTAB法和商业DNA提取试剂盒的基础上,在裂解细胞之前,对植物材料进行预处理．去除干扰DNA提取的代谢物,并在后续步骤中进行了一些优化。该方法适于多种不同的植物种类,所提取的基因组DNA质量较好,能满足下一步基因操作的要求,是一种通用的植物基因组DNA提取方法。     

短尾猴陈旧粪便中DNA的提取

分子粪便学（Molecular scatology）是一门将传统粪便分析方法与分子生物学技术相结合,以动物粪便为实验材料进行多领域研究的学科（魏辅等,2001）。虽然该方法已在野生濒危动物保护遗传学和分子生态学研究中发挥了很大作用（Kohnand Wayne,1997）,但目前大多数分子粪便学研究中使用的材料是新鲜粪便,从保存时间很长的陈旧粪便中很难提取到高质量的DNA用于PCR扩增以及序列分析,严重制约了分子粪便学的广泛应用（Wasser et al．,1997;Constable et al．,2001;Murphy et al．．2002）。     

一种从鸟类剥制标本提取DNA的改进方法

应用非损伤性取样的方法,收集鸟类剥制标本的皮肤组织和羽毛,用无水乙醇、浸泡液预处理的方法抽提DNA,结果两者都可提取DNA供PCR扩增。将PCR产物经序列测定和比对分析,证明提取的DNA为目的DNA,表明本试验方法可行。鸟类剥制标本的皮肤组织和羽毛可以作为研究种群遗传学的资源。     

改良的大鼠脑组织总RNA抽提方法

目的:建立一种简单方便、结果稳定的抽提大鼠脑组织总RNA的方法。方法:在传统一步法抽提动物组织总RNA的基础上,通过增加抽提步骤使总RNA与细胞DNA、蛋白质、细胞残片等干扰总RNA质量的杂质有效分离。结果:建立了可以快速、稳定地获得高纯度、未被降解的大鼠脑组织总RNA的方法。结论:采用改良的方法抽提到的总RNA比用传统的一步法得到的总RNA的完整性和均一性好,可直接应用于分子生物学操作。     

火龙果果皮中可溶性膳食纤维的提取方法

火龙果(Hylocereus undulatus)果皮可以作为一种优良的膳食纤维来源,且其膳食纤维具有良好的理化性能。为提高火龙果果皮的综合利用水平,该研究以火龙果果皮为原料,首先采用纤维素酶水解法对火龙果果皮中的可溶性膳食纤维进行提取,然后采用单因素试验和响应面法优化酶提取工艺。结果表明,纤维素酶法提取火龙果果皮中可溶性膳食纤维的优化工艺条件为:纤维素酶浓度0.54%,酶解温度50°C,pH5.2。在此条件下,可溶性膳食纤维的提取率可达19.81%;膳食纤维的持水力为31.25 g·g~(–1),溶胀性为29.11 m L·g~(–1)。     

A simple method of genomic DNA extraction suitable for analysis of bulk fungal strains

Aims: A simple and rapid method (designated thermolysis) for extracting genomic DNA from bulk fungal strains was described. Methods and Results: In the thermolysis method, a few mycelia or yeast cells were first rinsed with pure water to remove potential PCR inhibitors and then incubated in a lysis buffer at 85°C to break down cell walls and membranes. This method was used to extract genomic DNA from large numbers of fungal strains (more than 92 species, 35 genera of three phyla) isolated from different sections of natural Ophiocordyceps sinensis specimens. Regions of interest from high as well as single‐copy number genes were successfully amplified from the extracted DNA samples. The DNA samples obtained by this method can be stored at ?20°C for over 1 year. Conclusions: The method was effective, easy and fast and allowed batch DNA extraction from multiple fungal isolates. Significance and Impact of Study: Use of the thermolysis method will allow researchers to obtain DNA from fungi quickly for use in molecular assays. This method requires only minute quantities of starting material and is suitable for diverse fungal species.     

硫酸软骨素快速提取法研究

采用先高温蒸煮后加稀碱与酶解相结合 ,并用氯仿反萃取的方法提取硫酸软骨素 ,与其它提取方法相比较 ,缩短了一半工艺流程 ,同时提高了纯度和提取率 ,减轻了碱法提取所带来的环境污染。     

Nondestructive sampling of human skeletal remains yields ancient nuclear and mitochondrial DNA

Museum curators and living communities are sometimes reluctant to permit ancient DNA (aDNA) studies of human skeletal remains because the extraction of aDNA usually requires the destruction of at least some skeletal material. Whether these views stem from a desire to conserve precious materials or an objection to destroying ancestral remains, they limit the potential of aDNA research. To help address concerns about destructive analysis and to minimize damage to valuable specimens, we describe a nondestructive method for extracting DNA from ancient human remains. This method can be used with both teeth and bone, but it preserves the structural integrity of teeth much more effectively than that of bone. Using this method, we demonstrate that it is possible to extract both mitochondrial and nuclear DNA from human remains dating between 300 BC and 1600 AD. Importantly, the method does not expose the remains to hazardous chemicals, allowing them to be safely returned to curators, custodians, and/or owners of the samples. We successfully amplified mitochondrial DNA from 90% of the individuals tested, and we were able to analyze 1-9 nuclear loci in 70% of individuals. We also show that repeated nondestructive extractions from the same tooth can yield amplifiable mitochondrial and nuclear DNA. The high success rate of this method and its ability to yield DNA from samples spanning a wide geographic and temporal range without destroying the structural integrity of the sampled material may make possible the genetic study of skeletal collections that are not available for destructive analysis.     

棉花幼苗根总RNA提取的改进热酚法

获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物的不同而又有较大差异,棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此RNA提取难度较大,本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根RNA热酚提取法,该法可获得高质量棉根总RNA,并能成功进行反转录,制备cDNA。