波纹巴非蛤(Paphia undufata)体液和肌肉凝集素的初步研究

目的:研究波纹巴非蛤体液和肌肉凝集素对细胞的凝集性能及其理化性质,为开发新的凝集素来源提供基础材料。方法:利用10种动物及人的4种红细胞1、5种藻类细胞测定波纹巴非蛤的体液和肌肉凝集素的凝集活力,同时进行热稳定性、pH敏感性、糖抑制及金属离子影响试验。结果:体液和肌肉凝集素分别对家鸽、家兔血红细胞最为敏感,凝集效价最高,均为25。对藻类的凝集则具有某些专一性。体液凝集素有较高的温度耐受性,90℃处理10min仍能凝集兔血红细胞。肌肉凝集素对碱性环境较敏感,当pH≥8.0时,凝集活力消失。体液及肌肉凝集素在糖抑制及金属离子影响试验中也存在着差异。结论:波纹巴非蛤的体液与肌肉提取液均含凝集素,但所含凝集素类型不同。     

甘薯凝集素的提取及性质研究

抗蔓割病甘薯的叶片组织浸取液,经硫酸铵分级沉淀,甲壳素柱层析及葡聚糖凝胶过滤得到一种在PAGE或SDS－PAGE上均呈现单一蛋白带的甘薯凝集素。该凝集素没有血型专一性及被测动物红细胞专一性,其凝集活性可被N－乙酰葡萄糖胺或岩藻糖所抑制。甘薯凝集素在75℃加热10min,即丧失全部凝集活性,其凝集活性依赖于Ca^2 和Mg^2 ,Mn^2 则无作用。经Sephadex G-100和SDS－PAGE测定,凝集素相对分子质量为63000,中性糖含量为6.21%,该凝集素对蔓割病菌有抑制作用,是一种酸性糖蛋白。     

狗脊蕨凝集素的分离纯化与部分性质

狗脊蕨叶组织经磷酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose(fast flow)离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析,获得具有凝集活性的狗脊蕨凝集素.用PAGE和SDS-PAGE检测均显示1条蛋白带,提示狗脊蕨凝集素分子只有一个亚基.Sephadex G-100层析和SDS-PAGE测得其相对分子质量在20 kD左右.该凝集素对红细胞有种属专一性,其凝集活性可被木糖、卵粘蛋白所抑制.狗脊蕨凝集素对热相当稳定,以100℃温度加热10 min仍保存部分凝集活性.凝集活性不依赖于金属离子Mg2 、Ca2 、Mn2 .它的中性糖含量为3.1%,Phe含量较高,His含量较低,不含Tyr和Pro.     

厚果鸡血藤凝集素的纯化及性质

从厚果鸡血藤（ＭｉｌｅｔｉａｐａｃｈｙｃａｒｐａＢｅｎｔｈ．）的种子中分离纯化出一种具强凝集活性和强促有丝分裂原的凝集素。种子经磨粉、浸取、硫酸铵分级、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳＰＡＧＥ上均呈现单一蛋白染色带的凝集素纯品,分子筛层析测得分子量为４０７００,ＳＤＳＰＡＧＥ测得亚基分子量为１９８００;含有１７８％的中性糖。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ和Ｌｅｕ,同时含有４个Ｔｒｐ,当凝集素浓度为０．４８μｇ／ｍＬ时,即可凝集兔红细胞;对人Ａ、Ｂ和Ｏ型血细胞都能发生凝集,故无血型专一性;其凝集兔红细胞的凝集活性,不能被常见糖类抑制,但可被甲状腺球蛋白、胃粘蛋白和卵粘蛋白所抑制;其凝集活性强烈地依赖于Ｃａ２＋的存在,但Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋对其凝集活性全无促进作用;该凝集素是一种强促有丝分裂原,对人外围血中淋巴细胞的转化率高达８４３％,细胞分裂比率可达７８％。     

南鹤虱凝集素的研究

本文对伞形科16种植物(药用部分)是否存在凝集素进行了筛选。发现野胡萝卜果实与芹菜果实中有凝集素。野胡萝卜果实(中药名称南鹤虱)抽提液的凝血活性较芹菜强。 采用CM-纤维素及DEAE-纤维素对南鹤虱凝集素进行分离纯化。用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定亚基分子量为32600。 此凝集素对热及酸较稳定,对碱略差。对人的A、B、O血型无专一性。能凝集兎、小鼠、牛及鸡的血,但不凝集蟾蜍的血。 此凝集素的凝血活性能被D-木糖及N-乙酰葡萄糖胺轻微地抑制。 经shiff试剂检测表明南鹤虱凝集素为一糖蛋白。糖含量为3.4％。此凝集素分子中的谷氨酸门冬氨酸、精氨酸及絲氨酸的含量较高。     

斑玉蕈Hypsizygus marmoreus凝集素的部分性质和细胞凝集活性分析

斑玉蕈子实体经生理盐水抽提、30%~60%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和SephadexG-100柱层析纯化得到斑玉蕈凝集素(HypsizygusmarmoreusLectin,简称HML)。HML经PAGE显示单一条带,SDS-PAGE测得亚基相对分子质量为34.2kD,SephadexG-100凝胶过滤测得相对分子质量为35kD,中性糖含量为7.2%,含有17种氨基酸,IEF-PAGE测得其等电点为8.15。该凝集素能凝集多种动物红细胞和人的A、B、AB和O血型红细胞,对兔红细胞的凝集作用可被甘露糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺和岩藻糖所抑制。HML对热较敏感,经50℃处理10min,凝集活性下降明显,但对酸碱具有一定的稳定性,在pH5.0~8.0范围内较稳定。Β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。     

斑玉蕈Hypsizygus marmoreus凝集素的部分性质和细胞凝集活性分析

斑玉蕈子实体经生理盐水抽提、30%~60%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和SephadexG-100柱层析纯化得到斑玉蕈凝集素(HypsizygusmarmoreusLectin,简称HML)。HML经PAGE显示单一条带,SDS-PAGE测得亚基相对分子质量为34.2kD,SephadexG-100凝胶过滤测得相对分子质量为35kD,中性糖含量为7.2%,含有17种氨基酸,IEF-PAGE测得其等电点为8.15。该凝集素能凝集多种动物红细胞和人的A、B、AB和O血型红细胞,对兔红细胞的凝集作用可被甘露糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺和岩藻糖所抑制。HML对热较敏感,经50℃处理10min,凝集活性下降明显,但对酸碱具有一定的稳定性,在pH5.0~8.0范围内较稳定。β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。     

番茄凝集素的分离纯化及某些性质的研究

番茄成熟果实经抽提上鸡卵类粘蛋白(OM)-Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化制得番茄凝集素。制品在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条带,表观分子量为205,000。Sephadex G200凝胶过滤行为呈单一吸收峰,分子量为180,000。等电聚焦测得等电点为7.6和9.4。它能使人和多种动物红细胞,以及某些培养细胞凝集,但效价不同。N—乙酰葡萄糖胺寡聚糖是其专一性结合糖。     

野花生豆凝集素的纯化和性质

用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,可从野花生豆(Crotalarta mucronata)的种子中分离纯化出对人类A型血专一凝集的凝集素。该凝集素可用pH30.,Gly-HCl-1mol/L NaCl溶液解吸附。纯化的凝集素在PAGE或SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,表明凝集素分子内只有一种亚基。用SDS-PAGE测得其亚基分子量为49,000。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含甘氨酸和谷氨酸,不合甲硫氮酸。纯化的野花生豆凝集素(简称CML)含有4.11％的中性糖。它对人A型血细胞有强烈凝集作用,对AB型血有弱凝集作用,但对B型和O型血均不凝集。其对A型血细胞的凝集作用可被N-乙酰半乳糖胺抑制,但对AB型血则无抑制作用。CML是一个促有絲分裂原,对人外周血中淋巴细胞有促有絲分裂作用。     

半夏凝集素的糖类结合专一性

半夏是一种多用途的中草药。从其块茎鲜汁中分得的结晶蛋白——半夏蛋白——能凝集兔红细胞,很可能是对某种糖专一结合的凝集素。为此我们采用了琼脂糖双扩散以及亲和层析等技术对半夏中血凝活性成分和各种糖类结合的专一性进行了探讨。     

粘虫幼虫血淋巴中的凝集素

粘虫Mythlmna separata Walker幼虫血淋巴中含有凝集某些脊椎动物红细胞的凝集素,凝集活性可被乳糖、岩藻糖或神经氨酸抑制.用CNBr-sepharose 4B 进行亲和层析从血淋巴中分离的凝集素成分比较复杂,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示三条区带,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳出现6个亚基,亚基分子量分别为71000、65000、56000、35000、33000及31000道尔顿.     

药用和观赏植物常山产地适宜性分析和定量评价

为了解常山(Dichroa febrifuga Lour.)现有产区分布并预测新的产区,本文利用中药材产地适宜性分析地理信息系统TCMGIS(Geographic Information System for Traditional Chinese Medicine)对426个常山样品信息进行了适宜生态因子生长范围确认,分析了常山适宜产地空间分布状况。结果显示,常山主要分布于我国温暖湿润的东部季风区,生态相似系数100%区域分布较为集中,总面积达760 640.1 km2,共829个县区,其中广西、云南、广东、湖南分布较多。本研究结果对常山的野生资源保护、人工规范化种植和资源可持续利用具有重要意义。     

基于DNA条形码鉴定植物药常山及其混伪品

虎耳草科（Saxifragaceae）常山属（Dichroa）植物常山（Dichroa febrifuga Lour.）是我国著名的抗疟药物。但目前全国各地使用较为混乱,代用品、混淆品多,鉴定困难。本研究收集常山及其混伪品6种,共64份样品,利用DNA条形码和二维DNA条形码技术进行物种鉴定研究。研究结果表明,DNA条形码技术可准确鉴定常山及其混伪品,20%的常山样品存在混伪现象,混伪品主要为阔叶十大功劳（Mahonia bealei（Fort.） Carr.）。常山ITS2序列长度为230 bp,种内K2P遗传距离为0~0.0253,常山及其混伪品种间K2P遗传距离为0.152~0.748。基于ITS2序列构建的NJ树显示,常山及其混伪品能够明显区分,可为临床安全用药提供科学依据。成功构建常山的二维DNA条形码鉴定体系,实现“互联网+”的跨平台信息交换,可为二维DNA条形码技术在流通监管领域的实践应用提供理论基础。     

Purification and some characteristics of a beta-galactoside binding soluble lectin from amphibian ovary

Soluble extracts of Bufo ovaries agglutinate sialidase-treated rabbit erythrocytes. Unlike other amphibian lectins this agglutination activity does not require the presence of calcium ions. It is specifically inhibited by D-galactose and its derivatives. Thiodi-D-galactoside is the most potent saccharide inhibitor followed by lactose and methyl-beta-D-galactoside, respectively. D-Fucose, D-glucose and D-mannose do not inhibit the activity at concentrations at or above 100 mM. The lectin has been purified 500-fold to apparent homogeneity from the ovaries by salt extraction and affinity chromatography on lactose-aminophenyl-agarose, with a yield of about 0.2%. The molecular mass determined by gel filtration under native conditions was 30 kDa; polyacrylamide gel electrophoresis in SDS gave a molecular mass of 15 kDa, suggesting that the lectin is a dimer. The lectin has an isoelectric point of 40 and contains a high proportion of acidic amino acids.     

黑色菜豆(Phaseolus sp.)凝集素的纯化和性质

黑色菜豆(phaseolussp.)种子中含有对人A型血专一凝集的凝集素。用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂和Sephadex G-200凝胶过滤,可以纯化这种凝集素。纯化的凝集素在pH8.9,Tris-EDTANa_2-borate缓冲液的PAGE中,呈现单一蛋白带;酚-硫酸法测得总糖含量为3.22％。在SDS-PAGE中发现其分子由两种亚基所组成,亚基分子量分别为38,000和35,000。当凝集素浓度分别为0.98μg/ml和1.95μg/ml时能强烈地凝集人A型和AB型血细胞。在凝集素浓度高达500μg/ml时,B型血细胞能发生弱凝集反应,但对O型血和兔红细胞则完全不发生凝集反应。其凝集活性可被GalNAC、L-Fuc、猪甲状腺球蛋白和卵粘蛋白所抑制。该凝集素对人外周血中淋巴细胞的转化率达80％,细胞分裂比率高达37.1％;氨基组成分析表明,凝集素分子中Asp和Glu含量较高,而cys和Met含量很低。     

黄精凝集素Ⅱ的纯化及部分性质研究

囊丝黄精（ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｃｙｒｔｏｎｅｍａＨｕａ．）的根状茎,经浸取、用硫酸铵分级沉淀、猪甲状腺球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤,可以分离纯化出黄精凝集素Ⅱ（ＰＣＬⅡ）．纯化的ＰＣＬⅡ在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白染色带;在快速高效液相色谱中亦为单一蛋白峰,经分子筛层析测得分子量为１５．９ｋＤ,最大紫外吸收值在２７８ｎｍ,ＰＣＬⅡ只凝集兔红细胞,当浓度为０．２５μｇ／ｍｌ时,即可发生凝集反应,此凝集兔红细胞的能力可被Ｄ－甘露糖和猪甲状腺球蛋白所抑制．氨基酸组成分析表明ＰＣＬⅡ分子中富含酸性氨基酸,Ｎ末端为丙氨酸．经测定ＰＣＬⅡ分子中含有３个色氨酸和２．４％的中性糖．原子发射光谱分析表明,该凝集素分子中含有Ｍｇ和Ｃａ两种金属元素．     

Isolation and properties of a lectin from the seeds ofMimosa invisa L.

A lectin has been purified from the seeds ofMimosa invisa L. by gel filtration and preparative Polyacrylamide gel electrophoresis. The purified lectin was homogeneous as judged by analytical Polyacrylamide gel electrophoresis, immunodiffusion and Immunoelectrophoresis. The apparent molecular weight is 100,000; the protein is a tetramer with two types of subunits (molecular weight 35,000 and 15,000). The lectin is a glycoprotein with approximately 21% carbohydrate and interacts with Sephadex and concanavalin A-Sepharose. It agglutinates erthrocytes non-specifically, does not agglutinate leucocytes and is not mitogenic, agglutinates Mimosa-nodulatingRhizobium and is a panagglutinin; the agglutination is not inhibited by several simple sugars. It is thermo-stable and has no metal ions.     

Purification and Characterization of the Acidic Lectin from Winged Bean Seeds

Winged bean acidic lectin was purified by DEAE-Sephadex A-50 and affinity chromatography on N-acetylgalactosamine-agarose gel. The purified lectin was a glycoprotein homogeneous on polyacrylamide gel electrophoresis, isoelectric focusing, and gel filtration. The molecular weight of the lectin was 52,000 by gel filtration, and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis gave a single component of molecular weight of 27,000. Its isoelectric point was 5.5. The acidic lectin was rich in acidic amino acids, and contained 2mol of methionine but no cystine. It also agglutinated both trypsinized and untreated human erythrocytes (types A, B, AB and O), but not rabbit erythrocytes. The hemagglutination was inhibited by d-galactose and related sugars. Modification of the acidic lectin with N-bromosuccinimide caused a concomitant loss of the hemagglutinating activity with oxidation of tryptophan residue. The acidic lectin was immunologically different from the purified winged bean basic lectin by double immunodiffusion using antiserum raised against the basic lectin.