桑寄生凝集素的纯化及部分性质研究

利用DEAE一纤维素柱盐离子浓度梯度洗脱,再经猪胃粘蛋白-Sepharose 4 B亲和柱可以从中药桑寄生中分离纯化出桑寄生凝集素。经pH8.9,Tris-EDTAN_2a-borate的PACE和SDS-PAGE测定均呈现单一蛋白带,测得其分子量为67 500,中性糖含量为14.6％,DNS法测得N-末端氨基酸为缬氨酸。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含酸性氨基酸,而碱性氨基酸含量较少,不含精氨酸。当凝集素浓度为15.6μg/mL时,即可凝集兔红细胞,而对人的A、B、O型血细胞,凝集素浓度高达1000μg/mL,也不发生凝集反应。Gal、GalNAc、山梨糖、岩藻糖和松三糖对凝集兔红细胞的能力有抑制作用。桑寄生凝集素是一种促有丝分裂原,对猪血淋巴细胞的转化率达78％,细胞分裂比率为11.2％。     

野花生豆凝集素的纯化和性质

用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,可从野花生豆(Crotalarta mucronata)的种子中分离纯化出对人类A型血专一凝集的凝集素。该凝集素可用pH30.,Gly-HCl-1mol/L NaCl溶液解吸附。纯化的凝集素在PAGE或SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,表明凝集素分子内只有一种亚基。用SDS-PAGE测得其亚基分子量为49,000。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含甘氨酸和谷氨酸,不合甲硫氮酸。纯化的野花生豆凝集素(简称CML)含有4.11％的中性糖。它对人A型血细胞有强烈凝集作用,对AB型血有弱凝集作用,但对B型和O型血均不凝集。其对A型血细胞的凝集作用可被N-乙酰半乳糖胺抑制,但对AB型血则无抑制作用。CML是一个促有絲分裂原,对人外周血中淋巴细胞有促有絲分裂作用。     

蛋白核小球藻凝集素的分离纯化及部分性质研究

蛋白核小球藻藻粉的PBS抽提液经硫酸铵二步分级沉淀 ,再经DEAE Sepharose和SephadexG 10 0层析 ,从中分离纯化得到蛋白核小球藻凝集素 (CPL)。经测定 ,该凝集素为单个亚基的蛋白质 ,相对亚基分子量为 1 4× 10 4 — 1 5× 10 4 ,分子中不含糖。在氨基酸组成中 ,苯丙氨酸 (Phe)的含量最高 ,其次是天冬氨酸 (Asp)和谷氨酸 (Glu) ,不含组氨酸 (His)。CPL能够凝集兔、绵羊及鸽子红细胞 ,其中对兔红细胞的凝集活性最大 ,最低浓度为 6 88μg/mL ,对鸡、鸭及人红细胞 (A型、O型及B型 )无凝集活性。卵黏蛋白和 7种单糖对CPL的凝血活性具有抑制作用。CPL具有很好的热稳定性 ,在 90℃处理 10min不失活。     

鸡凝集素的分离纯化与性质研究

鸡菌丝体浸取液依次经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析3个主要步骤纯化得到一种凝集素(Termitomyces albu-minosus lectin,简称TAL)。纯化的TAL在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白质着色带。TAL的分子量为89.4kD,亚基分子量为38kD和51kD,提示TAL分子由两个不同亚基组成。TAL具有供血动物种属专一性,使Wistar大鼠红细胞凝集所需TAL最低的浓度为0.49μg/ml。糖抑制试验表明,鸡卵粘蛋白明显抑制TAL的凝血活性。TAL对热不稳定,60℃保温15min活力完全丧失。钙、镁或锰离子对TAL无激活作用。TAL不含不性糖,Glu和Asp含量较高,His和Met含量较低。     

扇叶铁线蕨凝集素的糖蛋白特性

扇叶铁线蕨叶片组织经磷酸盐缓冲液浸提,硫酸铵沉淀,再经过DEAE-Sepharose—FF和Sephadex G-100层析纯化,得到扇叶铁线蕨凝集素(AFL)。其凝集活性依赖于Ca^2 和Mn^2 ,经测定AFL,是一种分子质量为22000—22500的糖蛋白,分子中含有4．0％的中性糖,具有很高的耐热性,浓度为37．5μg ml^-1的AFL凝血活性可被甘露糖抑制,卵粘蛋白可完全抑制AFL的凝血活性。浓度为2．34μg ml^-1时引起兔血细胞凝集,并能凝集人的A、B或O型血细胞,对鳖的血细胞没有凝集作用。AFL能凝集藻类细胞、酿酒酵母细胞及经过热处理的枯草芽孢杆菌。在AFL的氨基酸组成中不含Tyr。研究结果表明,该凝集素具有糖蛋白的特性。     

雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素的亲和层析纯化与其部分性质

 用猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,可对雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素进行亲和层析纯化。纯化后的凝集素在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质带。Sephadex G-100凝胶层析法测得分子量为65,000道尔顿,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该凝集素分子仅有一个分子量为65,000道尔顿的亚基,酚-硫酸法测得总糖含量为4.6％,氨基酸组成分析表明雪山豆凝集素富含门冬氨酸,而甲硫氨酸含量甚少。该凝集素是强促有丝分裂原,对人外周血中淋巴细胞的转化率大于90％,细胞分裂比率达12％。雪山豆凝集素不仅能凝集多种动物红细胞,还能凝集人精细胞。经体外实验表明,雪山豆凝集素对人肝癌细胞有抑制作用。     

岩豆(Millettia dielsiana Harms ex Diels)凝集素的分离纯化和性质研究

用猪甲状腺球蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,再经Sephadex G-100凝胶过滤,可以从岩豆种子中纯化出岩豆凝集素(MDL)。该凝集素可以凝集人类A、B、O型血细胞和兔红细胞,纯化的MDL凝集兔红细胞的能力可被D-松三糖、邻硝基-苯酚-D-半乳糖和N-乙酰半乳糖胺抑制,甘露糖也有弱的抑制作用。纯化的MDL在PAGE和SDS-PAGE上均显现单一蛋白质染色带,经Schiff’s试剂染色证明为糖蛋白;以酚-硫酸法测得其中性糖含量为6.0％;SDS-PAGE测得亚基分子量为32 000;Sephadex G-100分子筛柱测得其分子量为63 800;等电聚焦电泳显示其等电点为5.1;氨基酸组成分析表明其中Asp、Glu、Phe含量较高,但不含有Pro、Tyr。MDL也是一个强促有丝分裂原,对人外周血淋巴细胞转化率可达81.2％,细胞分裂比率达14.8％。     

南鹤虱凝集素的研究

本文对伞形科16种植物(药用部分)是否存在凝集素进行了筛选。发现野胡萝卜果实与芹菜果实中有凝集素。野胡萝卜果实(中药名称南鹤虱)抽提液的凝血活性较芹菜强。 采用CM-纤维素及DEAE-纤维素对南鹤虱凝集素进行分离纯化。用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定亚基分子量为32600。 此凝集素对热及酸较稳定,对碱略差。对人的A、B、O血型无专一性。能凝集兎、小鼠、牛及鸡的血,但不凝集蟾蜍的血。 此凝集素的凝血活性能被D-木糖及N-乙酰葡萄糖胺轻微地抑制。 经shiff试剂检测表明南鹤虱凝集素为一糖蛋白。糖含量为3.4％。此凝集素分子中的谷氨酸门冬氨酸、精氨酸及絲氨酸的含量较高。     

油麻藤种子中凝集素的纯化及性质的研究

中药常春油麻藤种子中含有Ａ型血专一性的凝集素（ＭＳＬ）．该凝集素可经盐析、离子交换及凝胶过滤进行纯化,当其浓度为０．４９μｇ／ｍｌ时就能凝集人Ａ型血细胞,对人类Ｂ、Ｏ型及兔红细胞无作用．Ｇａｌ,ＧａｌＮＡｃ和胃粘蛋白对ＭＳＬ的凝血活性有强抑制作用．ＭＳＬ含中性糖５．７％,凝胶过滤测得分子量为１３１８００,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为６６０００和３３０００,表明ＭＳＬ可能由两个不同亚基组成．ＭＳＬ还是一种促有丝分裂原,对人外周血中淋巴细胞的转化率可达７６．２％．     

油麻藤种子中凝集素的纯化及性质的研究

中药常春油麻藤种子中含有Ａ型血专一性的凝集素（ＭＳＬ）。该凝集素可经盐析、离子交换及凝胶过滤进行纯化,当其浓度为０．４９μｇ／ｍｌ时就能凝集人Ａ型血细胞,对人类Ｂ、Ｏ型及兔红细胞无作用。Ｇａｌ,ＧａｌＮＡｃ和胃粘蛋白对ＭＳＬ的凝血活性有强抑制作用。ＭＳＬ含中性糖５．７％,凝胶过滤测得分子量为１３１８００,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为６６０００和３３０００,表明ＭＳＬ可能由两个不同亚基组成。ＭＳＬ还     

三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)凝集素的亲和层析纯化及其部分性质的研究

用Sephadex G-100或猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,均可从三齿草藤(Vicia Bungei Ohwi)的种子中分离纯化出三齿草藤凝集素。该凝集素经连续或不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳均显示出单一蛋白带;糖蛋白染色法证实为糖蛋白;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为24,600,凝集素浓度为1.95微克/毫升时就能凝集兔红细胞;但对人ABO型血细胞不发生凝集作用;其对兔红细胞的凝集作用可被D-Man、D-GlcNA和D-GIC所抑制;它也是一种促有丝分裂原。     

白茯苓凝集素的研究

以中药白茯苓为材料,采用盐析、离子交换及凝胶过滤可纯化出快速蛋白液相谱（ＦＰＬＣ）纯的白茯苓凝集素（ＳＬＬ）。当其浓度为０．２５μｇ／ｍＬ时就能凝集兔红细胞,对人类Ａ,Ｂ,Ｏ型血细胞无作用。甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和胃粘蛋白对ＳＬＬ的凝血活性有强抑制作用,而常见糖类对其无明显抑制作用。ＳＬＬ含中性糖１２．５％,凝胶过滤及ＦＰＬＣ测得分子量为３１０００,亚基分子量为８０００,表明ＳＬＬ可能由四个相同亚基组成。ＳＬＬ对酸、碱、热均有较高的耐受性,并且是一个强促有丝分裂原。     

格拉姆柱花草(Stylosanthes gracilis H.B.K.cv.Graham)凝集素的纯化与性质研究

为了探讨凝集素在豆科植物与根瘤菌的识别过程中的作用,用ＤＥＡＥ－３２离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤分离、纯化格拉姆柱花草种子凝集素（ＳＧＬ）,其分子量约为４５ｋＤ,由两个相同的亚基组成,等电点约ｐＨ５．８,它是一种糖蛋白,含糖量约为２．６％．ＳＧＬ的热稳定性强．ＳＧＬ的血凝活性能被甘露糖所抑制．ＳＧＬ对红细胞的凝集作用可能具有种属专一性;ＳＧＬ具有强的促有丝分裂作用;荧光标记实验显示：９株能与格拉姆柱花草植株结瘤的菌株有７株能与ＳＧＬ结合,６株不能与之结瘤的菌株,只有１株能与ＳＧＬ结合,这表明不同根瘤菌菌株对ＳＧＬ的结合能力,和它们在格拉姆柱花草上结瘤能力之间可能具有一定的生物学相关性．     

大瓶螺凝集素的分离纯化及部分性质研究

大瓶螺蛋白腺经磷酸盐缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ凝胶过滤,可获得在不连续ＰＡＧＥ（ｐＨ４．３和ｐＨ８．９）上显示单一蛋白质染色带的大瓶螺凝集素（ＡＧＬ）．该凝集素对人血红细胞无血型专一性,但对Ａ型血红细胞的凝集作用最强．ＡＧＬ的血凝活力可被乳糖或半乳糖所抑制．ＡＧＬ分子中的中性糖含量为０．２４ｍｇ／ｍｇ蛋白质．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其亚基分子量为１５０００,且只有一种亚基．ＡＧＬ中Ｃｙｓ和Ｐｈｅ的含量较高,并较耐热．     

常山凝集素的分离纯化及其性质研究

 本文采用分子筛层析和离子交换技术,从植物常山(Dichroa febrifuga Lour)的鲜叶中,分离纯化出一种新的凝集素,定名为常山凝集素(DFL)。并对其理化性质进行了鉴定:测得其亚基分子量为37,000道尔顿;等电点为4.2。DFL是一种糖蛋白,糖含量为2.8％。DNS-CI法测得其肽链的N-末端为L-缬氨酸。本文还对其糖专一性、不同动物红细胞的凝集专一性,以及对猪精子和某些肿瘤细胞的凝集活性等生物学性质进行了研究。     

一株产凝集素的三叶半夏内生真菌的研究

研究三叶半夏内生真菌及其凝集素,旨在为半夏内生真菌及其凝集素的开发利用提供依据。对三叶半夏块茎内生真菌分离、纯化,液体发酵培养代谢产物,无水乙醇提取总蛋白,兔血红细胞检测其凝集活性,筛选出菌株gs1,其总蛋白对兔血红细胞凝集活性显著。使用甘露聚糖-Sepharose 4B亲和层析柱纯化菌株gs1总蛋白,得到凝集素。Brandford法定量检测分析表明,1000 ml gs1发酵培养液中含有9.58 mg 凝集素。SDS-PAGE 电泳分析显示该凝集素为单一条带,分子量约为12 kDa。凝集活性实验表明,该凝集素对兔、大鼠和小鼠的血红细胞具有凝集作用,对兔血红细胞效果最显著;而对人（A＼B＼O＼AB型）和鸡的血红细胞无凝集作用。糖结合活性实验表明,甘露糖对该凝集素的凝集活性具有抑制作用。通过初步分类鉴定,菌株gs1为半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,丛梗孢科,曲霉属。     

A normal mucin-binding lectin from the sponge Craniella australiensis

A lectin, Craniella australiensis (CAL), was isolated from sponge C. australiensis by ion-exchange on DEAE-Sephacel and purified by gel filtration on Sephadex G-150 and HPLC on DEAE-5PW. The purified lectin was a trimeric protein as revealed by SDS-PAGE and MALDI-TOF analysis. SDS-PAGE showed that the CAL protein had a molecular mass of 54 kDa, and consisted of three 18 kDa subunits. Gel filtration of purified lectin on Sephadex G-200 indicates that it exists as a 54 kDa protein in its native state. The amino acid composition was rich in Thr and Glx. CAL was found to agglutinate native and trypsinized human A, B erythrocytes, and agglutinate native erythrocytes of mouse, sheep, rabbit and chicken, and trypsinized erythrocytes of sheep and rabbit. The hemagglutination activity was inhibited by glycoproteins such as PSM and asialo-PSM, but not by any of the monosaccharides tested. The activity was stable between 20 and 70 degrees C. Significant CAL activity was observed between pH 5 and 8. The lectin reaction is independent of the presence of divalent cations Ca2+ and Mg2+. The sequence of N-terminal residues of CAL was determined as TSSCQSIVVE. The lectin showed a potent mitogenic response towards BALB/c splenocytes.