双重响应二硫化钼纳米载药体系的制备及其性能研究

摘要 目的：制备肿瘤微环境响应释放的靶向二硫化钼纳米载药体系,并评价其载药量和释药性能。方法：以水热法合成的MoS₂纳米片为基底,利用MoS₂纳米片上的S空缺位点连接硫辛酸聚乙二醇羧酸,然后通过酰胺反应连接精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）靶向分子,再连接上交联剂3-(2-吡啶二硫代)丙酸N-琥珀酰亚胺酯（SPDP）,得到药物载体MoS2-PEG-RGD-SPDP（MPRS）,MPRS进一步与巯基化的阿霉素（DOX）反应,形成MPRS-DOX纳米载药体系。通过透射电子显微镜（TEM）,X-射线光电子能谱仪（XPS）以及纳米粒度电位仪对合成的材料进行表征;利用紫外可见分光光度计测试MPRS的载药性能,采用荧光分光光度计考察MPRS-DOX的释药性能。结果：成功合成MPRS-DOX纳米载药体系,其粒径大小在200 nm左右,Zeta电位为+28.2 mV;其载药效率为86.8%,载药量为53.5%。体外释药实验表明,在10 mM 谷胱甘肽（GSH）和pH=5.5的条件下DOX释放量最多。结论：成功制备了粒径合适的MPRS-DOX纳米载药体系,MPRS-DOX具有GSH和pH双重响应性,可实现预期的模拟肿瘤微环境内控制释放药物。这种GSH和pH双重响应的纳米载药体系为新一代刺激响应型纳米载药系统的构建提供了新的思路。     

内镜黏膜下剥离术治疗胃间质瘤的临床疗效及术后出血的危险因素分析

摘要 目的：探讨内镜黏膜下剥离术（ESD）治疗胃间质瘤的临床疗效及术后出血的危险因素。方法：选取2018年2月至2020年3月我院诊治的135例胃间质瘤患者作为研究对象,统计其ESD治疗后的各项临床指标,比较治疗前后患者的细胞免疫功能和胃肠激素变化,根据患者ESD治疗后是否发生出血将其进一步分为术后出血组12例和术后未出血组123例,分析胃间质瘤患者ESD术后出血的危险因素。结果：135例患者平均手术时间为（45.89±8.79）min,平均术后进食时间为（3.05±0.98）d,平均住院时间为（6.11±0.95）d,完整切除率为96.30%,术后出血发生率为8.89%,术后穿孔发生率为5.19%,术后感染发生率为9.63%。经单因素分析发现,ESD治疗胃间质瘤术后出血与高血压、糖尿病、血小板（PLT）、血清降钙素原（PCT）和C反应蛋白（CRP）有关（P<0.05）。与治疗前相比,患者治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、血清胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）和生长激素释放肽(Ghrelin)水平明显下降,而CD8⁺明显升高（P<0.05）。进一步多因素Logistic回归分析表明,胃间质瘤患者ESD术后出血的危险因素包括高血压、糖尿病、PCT＞2.73 ng/mL以及CRP＞62.19 ng/mL（P<0.05）,而保护因素则为PLT＞151.38×109/L（P<0.05）。结论：ESD治疗胃间质瘤患者的疗效确切,安全性较好,但其会引起胃间质瘤患者的细胞免疫功能和胃肠激素分泌下降。同时,高血压、糖尿病、PCT＞2.73 ng/mL和CRP＞62.19 ng/mL是胃间质瘤患者ESD术后出血的危险因素。     

重组人表皮生长因子凝胶联合赛肤润对慢性伤口患者疼痛评分及不良反应的影响

摘要 目的：探讨重组人表皮生长因子(Recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)凝胶联合赛肤润对慢性伤口患者疗效及对疼痛评分与不良反应的影响。方法：2017年3月-2019年9月选择在本院进行诊治的胃肠外科术后慢性伤口患者108例,根据治疗方法分为联合组与对照组各54例。对照组给予赛肤润治疗,联合组在对照组治疗的基础上给予rhEGF凝胶治疗,两组都持续给药观察14 d,记录患者疼痛与不良反应情况。结果：联合组治疗第3 d、第7 d、第14 d的疼痛VAS评分都低于对照组(P<0.05)。联合组治疗期间的皮肤坏死、伤口感染、发热等不良反应发生率为3.7 %,低于对照18.5 %(P<0.05)。联合组治疗后第3 d伤口愈合率为83.3 %,高于对照组的59.3 %(P<0.05),治疗后第7 d、第14 d的联合组伤口愈合率稍高于对照组,对比无统计学意义（P>0.05）。两组治疗后的血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量高于治疗前(P<0.05),联合组高于对照组(P<0.05)。结论：rhEGF凝胶联合赛肤润在慢性伤口患者的应用能促进缓解疼痛评分,减少不良反应的发生,促进VEGF的表达,从而加快伤口愈合。     

微流控法制备载卵母细胞水凝胶微球及其玻璃化保存

目的 通过微流控法制备载卵母细胞海藻酸钠微球,在低浓度保护剂下实现卵母细胞玻璃化保存。方法 采用流动聚焦型微流控芯片,通过调整芯片结构、海藻酸钠溶液浓度和流速比,制备大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球。在低浓度低温保护剂下将微球玻璃化保存,复温后检测存活率,采用细胞松弛素B和氯化锶孤雌激活卵母细胞,与Cryotop玻璃化法对比卵母细胞存活率和卵裂率、囊胚率。结果 制备的海藻酸钠微球在冷冻复温前后的体积稳定且结构完整,在将卵母细胞包封在海藻酸钠水凝胶中后,空包率低,存活率、卵裂率和囊胚率与新鲜组相比无显著差异。在低浓度低温保护剂10% DMSO+10%乙二醇（EG）+0.5 mol/L海藻糖中玻璃化冻存后卵母细胞的存活率达到92.48%,卵裂率70.80%,囊胚率20.42%,与高浓度保护剂15% DMSO+15% EG+0.5 mol/L海藻糖中Cryotop玻璃化法相比无显著性差异。结论 本文设计制作了三通道内部交联芯片并用于卵母细胞玻璃化保存的微流控系统,可生成大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球,在低浓度保护剂下实现玻璃化保存,为卵母细胞玻璃化保存方法提供新思路。     

双模态纳米诊疗一体药物在肝癌动物模型中的应用

摘要 目的：构建一种肿瘤诊断和治疗一体化药物，并利用肝癌动物模型开展诊疗效能评价。方法：利用多孔金属有机骨架材料ZIF-8，通过配位作用同时对化疗药物阿霉素（DOX）和近红外荧光染料IR-820进行负载。而后，利用超声的方法在ZIF-8-IR-820-DOX表面修饰了红细胞膜以提高载药体系的生物安全性和稳定性，得到具有生物伪装特性的pH响应型ZIF-8-IR-820-DOX@RM纳米颗粒。最后，通过对该药物体系的粒径、表面电位、形貌等理化性质进行表征，并利用肝癌动物模型验证该药物的诊断和治疗效能。结果：成功构建了一款红细胞伪装的金属框架纳米诊疗一体试剂，该试剂具有较好的pH相应性，在肿瘤pH 5.5 条件下，药物的释放率达到98.4 %，而在机体正常pH 7.4条件下，释放率仅为15.3 %。在小鼠肝癌动物模型的诊疗过程中，能通过近红外荧光较好的识别肿瘤的位置和大小，且对小鼠肿瘤具有较好的治疗效果。结论：本研究所构建的ZIF-8-IR-820-DOX @RM能通过肿瘤处增强的渗透性和保留（EPR）效应，精准的到达肿瘤部位，并利用pH响应性，在肿瘤酸性环境中精准释放携带的抗肿瘤药物和近红外荧光成像试剂，实现对肿瘤的诊断和治疗一体化设计。为肿瘤治疗的相关研究提供了一种思路和借鉴。     

SiO2NPs通过诱导氧化应激激活Fas/FasL通路促进TM4细胞凋亡

目的 探讨纳米二氧化硅（silicon dioxide nanoparticles,SiO₂NPs）对小鼠睾丸支持细胞（TM4）的毒性作用及其分子机制。方法 将TM4细胞暴露于不同浓度的SiO₂NPs（0、1、10、100 mg/L）培养液24 h,处理结束后,采用光学显微镜和CCK-8法检测小鼠睾丸支持细胞的形态和活性。利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧（ROS）水平,MDA和SOD试剂盒检测细胞内的丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。利用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒分析TM4细胞的凋亡水平,免疫印迹法检测Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、Bax和Bcl-2等细胞凋亡信号分子的蛋白质表达水平。结果 研究发现,SiO₂NPs呈剂量依赖性地抑制TM4细胞增殖,降低细胞存活率和数量,并影响细胞的形态结构。此外,SiO₂NPs诱导TM4细胞产生过量ROS,引起脂质过氧化产物MDA含量以及抗氧化酶SOD活性增加导致氧化应激。进一步研究显示,SiO₂NPs显著增加TM4细胞凋亡水平,并激活Fas/FasL死亡受体介导的细胞凋亡信号通路。有意思的是,抗氧化剂NAC可以通过降低氧化应激水平有效缓解SiO₂NPs引起的TM4细胞损伤和细胞凋亡。结论 综上,SiO₂NPs通过诱导氧化应激激活Fas/FasL信号通路促进TM4细胞凋亡。     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶联合耳内镜下软骨-软骨膜修补术治疗鼓膜大穿孔的临床研究

摘要 目的：探讨重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）外用凝胶联合耳内镜下软骨-软骨膜修补术治疗鼓膜大穿孔的临床疗效。方法：选择2021年1月-2022年11月在中国人民解放军联勤保障部队第九八一医院接受诊治的鼓膜大穿孔患者120例。将患者根据随机数字表法分为对照组和研究组,各60例。对照组接受耳内镜下软骨-软骨膜修补术,研究组接受重组牛bFGF外用凝胶联合耳内镜下软骨-软骨膜修补术。对比两组愈合情况、听力情况[骨导听阈、气导听阈、气骨导差（A-B gap）]、炎症因子[肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）]和并发症发生情况。结果：研究组的愈合例数高于对照组,平均愈合天数短于对照组（P<0.05）。研究组术后6个月骨导听阈、气导听阈、A-B gap低于对照组（P<0.05）。研究组术后3dTNF-α、IL-1β、IL-6低于对照组（P<0.05）。研究组的并发症发生率低于对照组（P<0.05）。结论：重组牛bFGF外用凝胶联合耳内镜下软骨-软骨膜修补术治疗鼓膜大穿孔,可缩短鼓膜愈合时间,改善患者听力,减轻炎症反应,安全性较好。     

壳聚糖基温敏水凝胶的研究进展

壳聚糖是一种由甲壳素脱乙酰化得到的氨基多糖,具有生物相容性、低细胞毒性和可生物降解性等特点。壳聚糖/β-甘油磷酸钠溶液温敏水凝胶在组织工程、药物缓释等领域多有报道,其成胶性能取决于凝胶的组分和浓度。针对单纯壳聚糖水凝胶强度较低、降解较快、药物突释等缺陷,通常对壳聚糖进行改性或引入新材料共混,获得更符合实际需要的壳聚糖基温敏水凝胶。对近年来壳聚糖基水凝胶的研究进展进行综述,包括改性壳聚糖、共混体系等,概述了其在组织工程(软骨、血管、神经修复)、药物缓释(癌症药物缓释、糖尿病治疗)领域中研究和应用的新进展,以期为后续温敏水凝胶的进一步研究提供参考。     

研究报告: 组织蛋白酶B介导NLRP3小体在砷致小胶质细胞炎症激活中的作用

目的 探究组织蛋白酶B（CTSB）介导NLRP3小体在砷致小胶质细胞（BV-2）炎症激活中的作用。方法 取处于对数生长期的BV-2细胞，分别暴露于终浓度为0、2、4、8 μmol/L亚砷酸钠（NaAsO₂）溶液培养24 h，检测细胞活性，测定各组细胞内CTSB和细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β的表达水平。流式细胞仪检测胞内溶酶体膜稳定性。基于实验结果，增设CTSB抑制剂组（5 μmol/L CA074-Me +8 μmol/L NaAsO₂、10 μmol/L CA074-Me+8 μmol/L NaAsO₂），检测两组细胞内炎症相关蛋白NLRP3、Caspase-1和IL-1β、IL-18的表达水平。结果 与对照组比较，各染砷组细胞抑制率增高，呈现剂量效应关系，溶酶体膜稳定性下降，差异有统计学意义（P<0.01），胞内CTSB、NLRP3、IL-1β、IL-18、Caspase-1表达增高，差异有统计学意义（P<0.01）；与对照组（8 μmol/L NaAsO₂）比较，抑制剂组BV-2细胞胞内CTSB、NLRP3、IL-1β、IL-18、Caspase-1水平均降低，差异有统计学差异（P<0.01）。结论 NaAsO₂通过诱导小胶质细胞内CTSB水平的上升，介导NLRP3炎症小体激活小胶质细胞，促其释放炎性因子，致神经系统损伤。     

分析胃肠ESD治疗早期胃癌疗效、随访情况及血清胃蛋白酶原、癌胚抗原表达水平

摘要 目的：分析予以早期胃癌患者胃肠内镜下黏膜剥离术（ESD）治疗的效果，为此类患者治疗提供参考。方法：于我院诊治的早期胃癌患者中筛选60例为主体，以电脑随机法将患者分成常规组（30例）、实验组（30例）。予以常规组外科切除术治疗，予以实验组胃肠ESD治疗，完成治疗后对比各组临床疗效、手术指标、血清肿瘤标志物、PG水平（PGⅠ、PGⅡ）、随访情况，病例选取时间为2019年11月-2021年11月。结果：实验组患者治疗总有效率与常规组对比无差异（P>0.05）；治疗前两组患者的CEA、CA199、CA125水无差异（P＞0.05），治疗后两组患者的CEA、CA199、CA125水平均降低，并且实验组患者降低幅度大于常规组（P＜0.05）；实验组患者的手术时间、出血量、住院时间、输血率少于或小于常规组患者相应指标（P＜0.05）；治疗前两组患者的PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ水平无差异（P＞0.05），治疗后两组患者的PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ水平均升高，PGⅡ水平降低，实验组患者变化幅度大于常规组（P＜0.05）；实验组复发率与常规组比较无差异（P＜0.05）。结论：胃肠ESD治疗早期胃癌患者的效果较为理想，可有效改善血清蛋白酶原及肿瘤标志物水平，具有出血量少、手术时间短等优势，同时还可降低并发风险，可在此类疾病治疗中应用并推广。     

A Unique Protease Cleavage Site Predicted in the Spike Protein of the Novel Pneumonia Coronavirus (2019-nCoV) Potentially Related to Viral Transmissibility

正Dear Editor,In December 2019, a novel human coronavirus caused an epidemic of severe pneumonia(Coronavirus Disease 2019,COVID-19) in Wuhan, Hubei, China(Wu et al. 2020; Zhu et al. 2020). So far, this virus has spread to all areas of China and even to other countries. The epidemic has caused 67,102 confirmed infections with 1526 fatal cases     

Curcuminoids as inhibitors of thioredoxin reductase: A receptor based pharmacophore study with distance mapping of the active site

Curcumin is the yellow pigment of turmeric that interacts irreversibly forming an adduct with thioredoxin reductase (TrxR), an enzyme responsible for redox control of cell and defence against oxidative stress. Docking at both the active sites of TrxR was performed to compare the potency of three naturally occurring curcuminoids, namely curcumin, demethoxy curcumin and bis-demethoxy curcumin. Results show that active sites of TrxR occur at the junction of E and F chains. Volume and area of both cavities is predicted. It has been concluded by distance mapping of the most active conformations that Se atom of catalytic residue SeCYS498, is at a distance of 3.56 from C13 of demethoxy curcumin at the E chain active site, whereas C13 carbon atom forms adduct with Se atom of SeCys 498. We report that at least one methoxy group in curcuminoids is necessary for interation with catalytic residues of thioredoxin. Pharmacophore of both active sites of the TrxR receptor for curcumin and demethoxy curcumin molecules has been drawn and proposed for design and synthesis of most probable potent antiproliferative synthetic drugs.     

Comparative morphology of the carpel in the Liliaceae: Hewardieae, Petrosavieae, and Tricyrteae

The young pistils in the melanthioid tribes, Hewardieae, Petrosavieae and Tricyrteae, are uniformly tricarpellate and syncarpous. They lack raphide idioblasts. All are multiovulate, with bitegmic ovules. The Petrosavieae are marked by the presence of septal glands and incomplete syncarpy. Tepals and stamens adhere to the ovary in the Hewardieae and the Petrosavieae but not in the Tricyrteae. Two vascular bundles occur in the stamens of the Hewartlieae and Tricyrtis latifolia. Ventral bundles in the upper part of the ovary of the Hewardieae are continuous with compound septal bundles and placental bundles in the lower part. Putative ventral bundles occur in the alternate position in the Tricyrteae and putative placental bundles in the opposite. position in the Petrosavieae. The dichtomously branched stigma in each carpel of the Tricyrteae is supplied by a bifurcated dorsal bundle.     

Enterovirus 71 3C proteolytically processes the histone H3 N-terminal tail during infection

Highlights
1. The N-terminal tail of histone H3 is specifically cleaved during EV71 infection.
2. Viral protease 3C is identified as a protease responsible for proteolytically processing the N-terminal H3 tail.
3. Our finding reveals a new epigenetic regulatory mechanism for Enterovirus 71 in virus-host interactions.     

Detection of EBV and HHV6 in the Brain Tissue of Patients with Rasmussen’s Encephalitis

Rasmussen’s encephalitis (RE) is a rare pediatric neurological disorder, and the exact etiology is not clear. Viral infection may be involved in the pathogenesis of RE, but conflicting results have reported. In this study, we evaluated the expression of both Epstein-Barr virus (EBV) and human herpes virus (HHV) 6 antigens in brain sections from 30 patients with RE and 16 control individuals by immunohistochemistry. In the RE group, EBV and HHV6 antigens were detected in 56.7% (17/30) and 50% (15/30) of individuals, respectively. In contrast, no detectable EBV and HHV6 antigen expression was found in brain tissues of the control group. The co-expression of EBV and HHV6 was detected in 20.0% (6/30) of individuals. In particular, a 4-year-old boy had a typical clinical course, including a medical history of viral encephalitis, intractable epilepsy, and hemispheric atrophy. The co-expression of EBV and HHV6 was detected in neurons and astrocytes in the brain tissue, accompanied by a high frequency of CD8⁺ T cells. Our results suggest that EBV and HHV6 infection and the activation of CD8⁺ T cells are involved in the pathogenesis of RE.     

Perinatal Vertical Transmission of Chikungunya Virus in Ruili,a Town on the Border between China and Myanmar

正Dear Editor,Chikungunya virus (CHIKV), an arbovirus in the family of Togaviridae, genus Alphavirus, is transmitted by the A.aegyptii or A. albopictus mosquito, and causes disease in humans characterized by fever, rash, and arthralgia (Silva and Dermody 2017; Suhrbier 2019). It was first reported in 1953 in Tanzania, and caused only a few outbreaks and sporadic cases in Africa and Asia in last century. However, in the epidemic in 2004, CHIKV acquired mutations that conferred enhanced transmission by the A. albopictus mosquito(Schuffenecker et al. 2006). Since then, it has successively caused outbreaks in Africa, the Indian Ocean, South East Asia, the South America, and Europe (Zeller et al. 2016).     

Development of a Novel Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification Method for Rapid Detection of SARS-CoV-2

In conclusion, the novel visual RT-LAMP assay is a simple, rapid, and sensitive approach for detection of SARS-CoV-2, and it is ready for application in primary care and community hospitals or health care centers, and even patients' own houses in response to the current SARS-CoV-2 epidemic because the assay does not require sophisticated equipment and skilled personnel. Furthermore, it is also ready to be used in fields for screening samples from wild animals and environments to facilitate the identification of potential intermediate hosts that mediate the cross-species transmission of SARS-CoV-2 from bats to humans.