近交系剑尾鱼的遗传生化标记研究

目的通过研究对RR-B、RW-H、BY-F三个近交系和非选育剑尾鱼的研究比较,建立近交系剑尾鱼的遗传生化标记检测技术。方法依照国标GB／T14927.1-2008的遗传操作规程优化实验条件,对三个近交品系及非选育群剑尾鱼的不同组织的6个遗传生化位点进行研究,以得到其遗传生化图谱。结果在6个生化位点中,同一品系剑尾鱼同工酶存在组织特异性,多数同工酶在肝中活性较强。同一生化位点在不同品系间存在差异。RR-B系在葡萄糖磷酸异构酶（Gpi）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（Gpd）位点表现出特异性条带,RW-H系在过氧化氢酶（Ce）位点表现出特异性条带。同一生化位点在各品系内表现较为一致,而在非选育剑尾鱼中在上述三个生化位点表现出多态性。在酯酶（ES）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）位点,各品系谱带不易区分其差异。结论建立了剑尾鱼近交系生化标记检测技术,可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

水生实验动物剑尾鱼的DNA指纹图谱构建

目的剑尾鱼是由原良种委员会审定并由农业部公布的水生实验动物,在遗传学研究、水环境污染监测、细菌性疾病研究方面显示出较好的应用前景。为了对剑尾鱼选育系进行种质资源监测、区分选育系与非选育以及鉴定近交系纯度,本研究采用微卫星DNA进行水生实验动物剑尾鱼的指纹图谱构建。方法根据相关报道设计合成了50对微卫星引物,对几个剑尾鱼品系的种质资源进行检测,筛选品系间差异性引物;确立剑尾鱼核心引物,用EXCEL散点图绘制DNA指纹图谱模式图;并将数字化指纹数据输入珠江水产研究所鱼类种质鉴定软件V1.0,形成剑尾鱼标准化指纹图谱鉴定数据库。结果共获得剑尾鱼品系间特异标记5个可用于剑尾鱼近交系鉴定,确立46个微卫星标记为核心引物,构建剑尾鱼选育系RR-B系、RW-H系和非选育的野生品种的DNA指纹图谱。结论本研究筛选出的微卫星标记与构建的指纹图谱,可用于剑尾鱼3个品种间的品种鉴定、纯度检测及遗传监测。     

利用微卫星多重PCR技术鉴定剑尾鱼RR-B系

目的建立多重PCR技术鉴定选育剑尾鱼RR-B系的方法。方法根据可明显鉴定剑尾鱼RR-B系的6对特异性微卫星引物Msa012、Msa014、Msa033、Msb025、Msd003、Msd051,采用不同的组合方式对RR-B系剑尾鱼和红眼红体的非选育剑尾鱼进行多重PCR扩增。结果引物组合1(Msa014、Msb025、Msd003)和组合2(Msa012、Msa033、Msd051)两个三重PCR反应体系能清楚的扩增各个微卫星座位,且各目的片段之间无干扰,易于识别,引物组合1的排除概率为99.98%,引物组合2的排除概率为99.96%,能准确鉴定剑尾鱼RR-B系。结论本检测方法具有较高的稳定性,可快速准确鉴定剑尾鱼RR-B系。     

剑尾鱼近交系遗传纯度的RAPD分析

目的　分析近交系剑尾鱼 (Xiphophorushelleri)的遗传纯度 ,以指导剑尾鱼实验动物化的培育工作。方法　应用经过筛选的 2 9条随机引物对剑尾鱼的第 19代近交系 12尾剑尾鱼个体基因组DNA进行RAPD扩增 ,计算近交系个体间的相似系数及遗传距离。结果　筛选的 2 9条引物共扩增出 30 6条带 ,扩增片段的大小在 0 2 - 3kb之间。其中多态性带 2 9条 ,多态性带频率在 0～ 5 0 0 0 %之间 ,平均为 9 48%。近交系剑尾鱼不同个体拥有相同条带的比率较高。计算得到近交系的平均相似系数 (S)为 0 9839(0 973～ 0 997) ,平均等位基因频率 ( q)为 0 8731,最低平均杂合率 ( H)为 0 12 6 9。 结论　剑尾鱼第 19代近交系有较高的遗传纯合度。     

BALB/c小鼠遗传质量检测的新方法

目的比较随即扩增多态性方法（RAPD）、微卫星方法（STR）与生化标记方法对近交系小鼠遗传质量检测的差异,为近交系动物遗传质量控制提供一种分子生物学方法。方法提取近交系小鼠BALB/c基因组DNA,用6条RAPD引物和20对STR引物对其进行PCR扩增,用生化标记法检测13个位点。结果在6条RAPD引物中,引物2（p2）、引物3（p3）、引物5（p5）和引物6（p6）这四条引物扩增的条带出现差异,表现为不同的RAPD图谱;在20对STR引物中,引物2、4、10和11,这四对引物扩增的条带出现差异,表现为不同的STR图谱;13个生化标记位点中,过氧化氢酶-2（Ce-2）等6个生化位点发现杂合基因。结论RAPD和STR可用于验证生化标记方法的实验结果,并用于保证近交系动物的遗传质量。     

封闭群斑马鱼的STR遗传检测技术

目的以AB、LF、ST（本地短尾,short tail）三个封闭群斑马鱼的基因组DNA为主要研究对象,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法分析不同种群在核酸水平的异同。方法利用5对斑马鱼STR引物和3对剑尾鱼STR引物,优化PCR条件,对不同种群斑马鱼DNA进行扩增。结果Z24、Z9384、Z10508、Z20046这4对引物可扩增出稳定条带。除Z24的3对STR引物在群内和群间均表现出多态性。对扩增不同带型进行统计分析,Z20046群间差异显著（P〈0.01）,Z9384有群间差异（P〈0.05）,Z10508扩增结果无统计学差异（P〉0.05）。结论鉴于该方法操作简便,通过进一步研究,可为封闭群斑马鱼的遗传质量评价打下基础。     

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

多重PCR在几个近交系小鼠遗传检测中的应用初探

目的　探讨多重PCR方法在小鼠微卫星检测中的应用。方法　用 34对特异性引物对AKR、BALB c、C57 BL、DBA 2、CBA、A WY、6 15、T739、BALB cJ和AKR J 10个品系的近交系小鼠用PCR方法进行遗传检测 ,并从中选用 4对引物 ,对这些品系小鼠进行二重和多重PCR检测。结果　二重PCR在与单一PCR相同的反应条件下 ,扩增出两条与预期条带相同的带 ,而三重PCR则没有得到三条预期的条带 ,出现了干扰现象。结论　通过二条条带的距离可以鉴别出不同的近交系小鼠 ,二重PCR可应用于近交系小鼠的遗传检测 ,具有方便简单、省时的优点     

微卫星DNA标记在近交系大鼠HFJ和MIJ遗传监测中的应用

目的 用24对引物对近交系HFJ和MIJ大鼠的微卫星位点进行多态性分析,并选用近交系Lewis和F344大鼠作为对照,进行比较分析.方法 用传统的酚-氯仿法分别提取4个近交系大鼠MIJ、HFJ、Lewis和F344 的基因组DNA,选取大鼠24个微卫星位点,通过PCR扩增,扩增产物经过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染,根据电泳结果,比较分析4种品系近交系大鼠之间微卫星多态性.结果 4种品系及品系内不同个体的近交系大鼠在24个微卫星位点上的扩增产物均出现一个条带,MIJ和HFJ大鼠在品系间和品系内均表现为单态性,同Lewis 和F344的扩增结果比较,14个位点显示多态性,有10个位点显示单态性.结论 两个近交系大鼠品系MIJ和HFJ符合近交系要求,筛选出的14个多态性微卫星位点可用于有关近交系大鼠的遗传背景监测.     

利用多重荧光STR技术分析上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性

目的比较上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性。方法将筛选到的48对多态性丰富的微卫星引物组合优化,形成11组多重荧光PCR引物混合体系,对来自上海地区两大实验小鼠供应商的7品系近交系小鼠核心群的DNA样进行分型检测。利用遗传分析软件进行数据分析。结果来自两大供应商的7品系近交系小鼠在48个微卫星位点上都为纯合子。同一种群内小鼠的STR位点结果均一致;不同种群小鼠无论品系是否相同,相互间均存在STR位点差异。但相同品系不同种群近交系小鼠间的遗传距离与不同品系小鼠种群间的遗传距离相比均较近。在UPGMA聚类树中,相同品系的不同种群均首先两两聚成一类。C57BL/6小鼠与其他6品系小鼠的亲缘关系均较远。结论上海地区不同供应商的7品系近交系小鼠核心群间均存在STR位点差异。     

DNA polymerase beta mRNA and protein expression in Xiphophorus fish

Herein we report Xiphophorus DNA polymerase beta (XiphPolbeta) mRNA and protein expression levels in brain, liver, gill, and testes tissues from Xiphophorus maculatus, Xiphophorus helleri, and Xiphophorus couchianus parental line fish and two different tumor-bearing Xiphophorus interspecies hybrids. Polymerase beta protein levels in the Xiphophorus tissues were measured by Western blot, and mRNA was measured with a quantitative real time RT-PCR method which employed cRNA construction to produce accurate calibration curves. We found significant differences in both mRNA and protein levels between the tumor-bearing hybrid animals and the three parental species. However, there were no significant differences in either mRNA levels or protein expression observed between the parental species. Thus, interspecies hybridization results in dysregulation of Polbeta expression and this may manifest a modulation in DNA repair capability and susceptibility to latent tumorigenesis.     

Retrovirus-like particles in embryonic kidney tissue of the platyfish, Xiphophorus maculatus

Ultrastructural studies were performed on embryos of an inbred strain (163A) of the platyfish Xiphophorus maculatus, and a pooled stock of the Rio Sarabia strain of the swordtail, X. helleri. Viral-like particles were found in the kidney tissue of platyfish embryos. Exposure of pregnant platyfish to 5-bromodeoxyuridine during the time of differentiation of embryonic melanocytes enhanced the production of viral-like particles in platyfish embryos. Viral-like particles were not found in untreated or drug-treated swordtail embryos. The morphology of these particles corresponds to type C retroviruses.     

应用40对微卫星引物对6种近交系小鼠遗传背景进行监测的研究

采用40对引物的微卫星DNA PCR遗传质量符合要求的BALB／C－nu0nu-,DBA/2,SCID,T739,TA2,615等6种近交系小鼠进行遗传监测,结果26对引物有稳定的扩增结果,5对引物表现为单态性,21对引物表现出多态性,其中D2Nds3,D3Mitl5,D3Mitl7,D3Mit18,D16Mit7等6对引物表现出显著的多态性,反映了各品系小鼠独特的遗传背景,可应用于区别小鼠品系,监测系间的遗传污染,为有关小鼠品系积累了遗传背景资料,有助于将实验动物的遗传监测从表墼这度到DNA水平。