大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用

目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。结果双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168 bp)和仙台病毒(262 bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×10~2 copies/μL。特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。结论建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测。     

RNA干涉的临床前实验研究进展

RNA干涉（RNA interference,RNAi）是一种非常保守的细胞现象,在基础研究和疾病治疗方面具有重大的应用前景。尤其引人注目的是,新的RNAi方法学与已建立的转基因策略相结合,有效地将组织特异性RNAi导入到患者体内,有望治疗人类疾病。本文综述了RNAi的机制与在其临床前的实验研究,简要介绍了RNAi的新用途,讨论了RNAi基因治疗存在的问题,展望了RNAi基因治疗的应用前景。     

甘蓝型油菜Pol CMS育性恢复基因的PCR标记

采用恢、保回交群体和集团混合分析法,筛选了１０４０个１０－ｍｅｒ随机引物,找到了与甘蓝型油菜波里马细胞质雄性不育系（Ｐｏｌ ＣＭＳ）育性恢复基因（Ｒｆｐ）连锁的两个ＲＡＰＤ标记Ｓ１０１９７２０和Ｓ１０３６８１０。它们位于Ｒｆｐ的一侧,与该基因的遗传图距分别为５．８ｃＭ和１２．３ｃＭ。随后,克隆并测序这２个多态性片段,根据其２端序列设计了２对２０～２４－ｍｅｒ的特异引物,它们在１３８株的回交群体中Ｐ     

从"遗传物质基础"的经典实验体味生命科学史蕴涵的教育价值

美国著名的科学史家萨顿说过:“一部科学史,在很大程度上就是一部工具史,这些工具,无论有形或无形,由一系列人物创造出来,以解决他们遇到的某些问题,每种工具和方法都是人类智慧的结晶。”可见,科学史揭示了科学家思考和解决生物学问题的思想历程,展示了科学家所处的时代背景,反映了科学家的探究活动与探究方法。     

犬传染性肝炎DNA疫苗安全性评价

目的研究犬传染性肝炎核酸疫苗pVAX1-CpG-Loop的安全性。方法 BALB/c小鼠随机分为4组,高剂量组(肌内注射每只200μg)、低剂量组(肌内注射每只100μg)、联合免疫组(肌内注射每只100μg,皮下注射50μg,滴鼻每只50μg)和PBS组,每两周免疫1次,共免疫3次。末次免疫后4周、6个月检测血常规和血液生化及对F1代的影响,用PCR和RT-PCR的方法检测DNA疫苗的生物学分布和存留时间,末次免疫后4周和6个月取脏器观察病理损伤。结果各剂量组的主要血液学检测指标、对F1代的影响差异无显著性。末次免疫后4周各剂量组AST明显高于对照组。DNA疫苗在注射部位可存留8周,其中高剂量组和低剂量组在肝、脾、肾和注射部位有分布,联合免疫组在肺组织也有分布。末次免疫后4周小鼠肝肾有淋巴细胞浸润,6个月后慢性炎症明显好转。结论由犬传染性肝炎病毒DNA疫苗引起的肝肾损伤是一过性的,并且pVAX1-CpG-Loop没有整合到宿主基因组,也没有传递给F1代。     

链霉亲和素纯化和鉴定方法的研究

对链霉亲和素进行纯化、鉴定,采用冷钝化的方法去除培养液中大部分杂蛋白,用亲和层析法从链霉菌L-183的培养液中纯化链霉亲和素（SA）,经试验,SA回收率为75％～85％。鉴定表明,自制SA的分子量为74．5kD,每分子SA可结合3．2个生物素分子,活性为11．2U／mg,pI为7．4。自制SA各项生物学性质与文献报道相符。     

园林绿化植物的栽植与养护探析

根据众多的资料表明,在进行园林绿化工作时,栽植和养护都是非常重要的。只有对栽植和养护双管齐下,双重重视才能更好的发展园林绿化工作。本文通过结合多年来的工作经验,对园林绿化植物的栽植与养护的定义和关系进行了阐述,并对栽植与养护问题及对策进行了研究。