何首乌营养器官结构与二苯乙烯苷的积累动态研究

采用显微制片技术、组织化学定位和二苯乙烯苷定量分析等方法,对何首乌的各种营养器官分别进行了二苯乙烯苷的定位、含量和相应的组织结构特征研究。结果表明:二苯乙烯苷在何首乌的各类营养器官中均有分布,依据含量排序为:根状茎块根叶茎。二苯乙烯苷的含量因营养器官的生长发育时期不同而发生变化(茎除外)。二苯乙烯苷在何首乌块根中的积累变化是呈直线上升趋势(4月份除外),10月末含量最为丰富;在根状茎和叶中二苯乙烯苷的变化趋势一致,8月末积累达到最大值;二苯乙烯苷在茎中含量较少,且在任何生长期内变化不明显。何首乌的块根属于异常结构,栓内层、次生韧皮部、三生韧皮部和维管射线是其积累二苯乙烯苷的主要场所;二苯乙烯苷在根状茎中的主要积累组织有栓内层、皮层、次生韧皮和维管射线;栅栏组织是叶内二苯乙烯苷积累的主要场所。     

二苯乙烯苷对氧化诱导内皮细胞凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响

为研究二苯乙烯苷对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响并初步探讨二苯乙烯苷抗凋亡的可能机制,采用不同浓度H2O2和二苯乙烯苷处理内皮细胞24 h,以MTT法检测细胞生长活力、Hoechst33258染色观察细胞形态、流式细胞仪检测凋亡率等方法筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度和二苯乙烯苷最佳的抗内皮细胞凋亡作用浓度.RT-PCR、Western-blot分别检测Caspase-3、PARP mRNA及蛋白质的表达.结果发现,与空白对照组相比,300μmol/L H2O2作用后,内皮细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,细胞凋亡率显著增加,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达量显著增加.经二苯乙烯苷处理后,随着二苯乙烯苷浓度增加,细胞的增殖率随之增加,凋亡细胞数减少,凋亡率逐渐降低,与H2O2组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷能够显著提高细胞增殖率,降低细胞凋亡率,并显著减少Caspase-3和PARP表达.以上结果表明,二苯乙烯苷能够抑制由H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,增加细胞生长活性,降低细胞凋亡率,其作用机制可能与下调Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达有关.     

何首乌中新的二苯乙烯甙

用反相层析法从何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)根茎的水提物中分得2个新的二苯乙烯甙(1、 2)及9个已知化合物:没食子酸(3)、 2,6-二羟基-苯甲酸(4)、吲哚-3-(L-α-氨基-α-羟基-丙酸)甲酯(5)、 1, 2-二羟基丙烷-1-(4-羟基-苯基) (6)、大黄素(7)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖甙(8)、(+)-lyoniresinol-3α-O-β-D-葡萄糖甙(9)、 2, 3, 4′, 5-四羟基反式二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(10)和 2, 3, 4′, 5-四羟基反式二苯乙烯-2, 3-二-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(11).新化合物结构通过理化性质与波谱分析特别是 2D NMR得以确定.化合物2表现出很强的DNA裂解活性,化合物1、2与10具有很强的抗脂质过氧化活性.     

树豆叶二苯乙烯类成分的甲醚化和体外抗肿瘤活性

为获得具有抗肿瘤活性的甲醚化先导化合物,对树豆(Cajanus cajan)叶中的二苯乙烯类成分进行甲醚化,并测定其对人肿瘤细胞的细胞毒性。将木豆素C、树豆酮酸A、Cajanotone和木豆素与碘甲烷-碳酸钾反应制备O-甲基产物,通过波谱数据分析产物结构分别鉴定为:2-异戊烯基-3,5-二甲氧基二苯乙烯(1)、树豆酮酸A甲醚(2)、5-O-methylcajanotone(3)和3-O-甲基木豆素(4),其中化合物3是新化合物。肿瘤细胞增殖抑制实验(CCK-8法)结果表明,木豆素C对乳腺癌MDA-MB-231、宫颈癌HeLa、肝癌Hep G2、结肠癌SW480及3种非小细胞肺癌细胞(A549, NCI-H460和NCI-H1299)的半数抑制浓度IC50分别为14.4、16.1、19.6、17.4和25.7～29.6μmol L~(–1);木豆素对宫颈癌和结肠癌之外的5种肿瘤细胞有弱抑制作用,IC50为44.9～78.3μmol L~(–1);而对照的3,4′,5-三甲氧基二苯乙烯(三-O-甲基白藜芦醇)对乳腺癌MDA-MB-231、宫颈癌HeLa、结肠癌SW480和肝癌Hep G2细胞有较强抑制作用(IC50为3.0～14.5μmol L~(–1))。树豆叶二苯乙烯甲醚化衍生物1～4对7种肿瘤细胞系无明显细胞毒活性。     

HPLC-DAD和UPLC-MS/MS对蔓花生中二苯乙烯类化合物的研究

采用HPLC-DAD和UPLC-MS/MS对蔓花生中白藜芦醇、白藜芦醇苷和二苯乙烯苷三种二苯乙烯类化合物进行鉴定,建立HPLC-DAD同时测定三种化合物含量的方法。HPLC-DAD分析采用依利特ODS1色谱柱,柱温40℃,流动相A为甲醇,B为1%乙酸水溶液,流速1.0 mL/min。UPLC-MS/MS采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,流动相A为乙腈,B为水,电喷雾离子源,负离子检测,数据采集方式为多反应监测模式(MRM)。结果表明:蔓花生根、茎和叶中白藜芦醇含量分别为66.28、90.83和81.56μg/g,白藜芦醇苷含量分别为123.78,302.77和236.53μg/g,根和茎中二苯乙烯苷含量分别为673.60和764.65μg/g,叶中未检测到二苯乙烯苷。     

PGDE交联纳米羟基磷灰石/丝素蛋白复合材料

由纳米羟基磷灰石(HA)与丝素蛋白(SF)复合而成的新型生物复合材料,具有优良的生物相容性,已被研究用作骨移植及填充材料,但其由丝素蛋白分子内交联导致的较差的力学性能,限制了该复合材料的应用。本研究中,采用一种名为聚乙二醇二缩水甘油醚(PGDE)的交联剂对复合材料中的丝素蛋白进行改性。该改性的复合材料经过一系列的检测,结果显示交联剂PGDE可以提高丝素蛋白的结晶性,复合材料HA/SF的抗压强度提高了100%,且该交联剂并没有影响复合材料的生物相容性。     

二苯乙烯苷对H2O2诱导血管内皮细胞ICAM-1及VCAM-1表达的影响

目的:通过研究二苯乙烯苷(TSG)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的影响,探明二苯乙烯苷抗氧化保护内皮细胞的作用机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为空白对照组、H2O2组、辛伐他汀组、TSG组,运用逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验分别检测ICAM-1及VCAM-1 mRNA与其蛋白的表达.结果:200 μmol· L-1的H2O2作用内皮细胞24h后,ICAM-1和VCAM-1的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,与空白对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).而在200μmol· L-1的H2O2作用前用1μmol· L-1二苯乙烯苷预处理体外培养人脐静脉内皮细胞4h,结果显示二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的mRNA和VCAM-1的蛋白水平表达,与H2O2组比较差异有显著性(P＜0.01);而ICAM-1的蛋白表达水平与H2O2组比较差异有统计学意义(P＜0.05);辛伐他汀组ICAM-1和VCAM-1的mRNA及其蛋白水平表达降低,与H2O2组比较差异均有显著性(P＜0.01).实验结果表明二苯乙烯苷可抑制H2O2诱导的内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1表达.结论:二苯乙烯苷可通过降低细胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1的表达保护氧化应激引起的人脐静脉内皮细胞损伤.     

桑树根中二苯乙烯类衍生物蛋白激酶C的抑制作用

桑树(Morus alba L.)根的乙醇浸膏具有抑制蛋白激酶C(PKC)的活性,从中分得的二种二苯乙烯类衍生物:oxyresveratrol和kuwanon Y对PKC的半抑制浓度IC_(50)分别为48μmol·L~(-1)和15μmol·L~(-1)。酶动力学研究显示,oxyresveratrol对PKC的抑制属于非竞争性抑制。     

二苯乙烯苷对AD模型鼠老年斑和行为障碍的影响

目的:观察二苯乙烯苷对Alzheimer病(AD)模型大鼠行为学及脑内海马区域老年斑的影响。方法:采用立体定向仪下于海马部位注射微量Aβ1-42造模,行Y-电迷宫实验检测学习记忆能力及刚果红染色法观察大鼠脑内老年斑的变化。结果:模型组躲避所需的电刺激次数明显增加(29.53±2.28),P<0.05,海马部位老年斑增多(6.87±1.21),P<0.01;二苯乙烯苷干预后,大鼠躲避所需的电刺激次数减少(19.13±2.47),P<0.05,同时,海马部位老年斑减少(4.13±1.19),P<0.05。结论:二苯乙烯苷能改善模型大鼠的学习记忆能力,抑制和清除海马结构中老年斑的沉积。     

棘豆属植物Oxytropis pseudoglandulosa化学成分研究

从棘豆属植物O.pseudoglandulosa的地上部分中分离得到2个芳香性酰胺类化合物和3个黄酮类化合物,经波谱学方法鉴定为N-苯乙基苯甲酰胺(N-phenylethyl-Benzamide,1),N-(2-羟基,2-苯乙基)肉桂酰胺(N-(2-hydroxy-2-phenylethyl)cinnamamide,2),5-羟基,7-甲氧基二氢黄酮(5-hydroxy-7-methoxyflavanone,3),5-羟基,7-甲氧基黄酮(5-hydroxy-7-methoxyttavone,4),7-羟基二氢黄酮(7-hydroxyflavanone,5).其中3个黄酮类化合物均为首次从该植物中分得.     

芪合酶基因Fm-STS在何首乌毛状根中的过量表达分析

目的:通过过量表达探究在何首乌中得到的芪合酶基因Fm-STS的功能.方法:由含CaMV 35S启动子驱动以及荧光标记蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的植物转基因基础表达质粒pBIN-35S-GFP构建过量表达质粒pBIN-35S-STS-GFP(阳性),并同空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)均导入野生型发根农杆菌ATCC15834中,转化何首乌外植体(无菌苗叶片),诱导生成毛状根并培养,对毛状根进行高效液相色谱分析芪合物二苯乙烯苷含量变化以及实时荧光定量检测基因Fm-STS表达差异.结果:在过表达组和空白组中毛状根中发根农杆菌Ri质粒中的rolB基因和外源基因GFP均有表达,芪合物二苯乙烯苷含量依次为4.67 mg/g和2.18 mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量:过表达组是空白组的2.41倍.结论:基因FM-STS是何首乌中芪合物二苯乙烯苷生物合成过程中的酶基因,过量表达在基因功能研究中有良好的应用.     

何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异

目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差并.方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50％稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体积比为20∶80),利用高效液相色谱分析其二苯乙烯苷含量差异;采用实时荧光定量PCR分析芪合酶基因Fm-STS表达差异,以β-actin作为内参对照,2-△△CT公式计算各组别中FM-STS的含量.结果:根茎叶中芪合物二苯乙烯苷含量依次为14.62mg/g、1.78mg/g和0.47mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量为叶片中最高,根是叶的1/10倍,茎是叶的1/64倍.结论:芪合酶基因FM-STS主要在何首乌叶片中表达,二苯乙烯苷主要在叶片中合成,进而转移到根块中富集.     

河南产景天三七抗氧化活性研究

用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、2,2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法对洛阳和信阳产景天三七(Sedum aizoon)体外总抗氧化活性进行评价,并与阳性对照丁基羟基茴香醚(BHA)、没食子酸丙酯(PG)和二丁基羟基甲苯(BHT)比较。发现洛阳和信阳景天三七有较好的体外抗氧化活性。洛阳和信阳产乙酸乙酯部位活性最强,正丁醇部位活性次之。在6个提取部位中,信阳产景天三七乙酸乙酯部位活性最强,其清除DPPH、ABTS自由基能力强于阳性对照BHA和BHT,还原Fe3+的能力大于阳性对照BHT,洛阳产景天三七乙酸乙酯部位和正丁醇部位活性次之。     

碳化二亚胺对透明质酸进行化学修饰的研究

目的：用水溶性的碳化二亚胺(EDC)作为交联剂对透明质酸(HA)进行化学修饰,研究交联产物(HA-EDC)的物化性质和微观结构。方法：制备HA与EDC的交联产物,对该交联产物进行流变性和热学性能的研究,并对其进行红外光谱、拉曼光谱以及核磁共振的微观结构研究。结果：反应时间和交联剂添加量的不同可以改变交联反应的交联度。不同摩尔比的EDC和HA的交联产物有不同的溶胀性。光谱分析得到交联产物的N-酰脲的结构。结论：可以用碳化二亚胺来对透明质酸进行化学修饰,得到具有很强吸水性并且吸水性可以控制的交联产物,交联反应过程中,产物的结构从不稳定的O-异酰脲转变为稳定的N-酰脲。     

应用异型双功能交联剂制备酶-抗体结合物

酶标免疫测定法(ELISA)中最关键的化合物是酶-抗体结合物,将酶和抗体交联起来需用交联剂。本文作者使用了N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(简称SPDP)将辣根过氧化物酶(HRP)和兔抗小鼠IgG(兔IgG)交联起来。我们试验了SPDP/HRP,SPDP/IgG和HRP/IgG的不同比例,以期获得活性高的酶-抗体结合物。此外还研究了从结合物中去除自由HRP和自由IgG的方法。用SDS-PAGE及硝酸纤维膜电泳转移法证明本法制备的结合物不含HRP及IgG的自身聚合物。用ELISA法鉴定结合物制品时,一般稀释度可达到1:10,000以上,有的可达到1:20,000(当结合物浓度A_(280nm)=1.0,底物显色A_(492nm)=1.0时)。     

决明子生品及炮制品的抗氧化活性研究

采用清除二苯代苦味肼基(DPPH)自由基、清除[2,2'-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基及铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法,以二丁基羟基甲苯(BHT)为阳性对照,对决明子生品及炮制品进行抗氧化活性评价。实验结果表明,决明子生品及炮制品均有一定的抗氧化活性。酒蒸决明子乙酸乙酯部位清除DPPH自由基的能力(IC50值为93.8μg/mL)较其它提取部位强;酒炙决明子乙酸乙酯部位清除ABTS自由基(IC50值为8.1μg/mL)和还原Fe3+的能力(TEAC=319.22μmol/g)最强。不同炮制方法对决明子抗氧化活性具有不同程度的影响。     

发酵法炮制何首乌的初步研究

为了筛选出可以专一性降解何首乌中蒽醌类成分而不破坏其有效成分二苯乙烯苷的菌种,降低何首乌的毒副作用,我们建立了一种炮制何首乌的新方法.采用HPLC法和UV分光光度计法,对不同菌株发酵的何首乌样品及其发酵前后的化学成分进行比较分析.结果显示:米根霉(Rhizojpus oryzae)、菌株YMS-010(Mucor.sp.)发酵样品的游离型总蒽醌、大黄素、大黄素甲醚的含量均有较大幅度的降低.菌株YMS-006(Aspergillus)、黑曲霉(Aapergillus nigers)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)三株菌株发酵何首乌样品有未知成分产生,且含量较高.通过筛选发现米根霉、菌株YMS-006具有专一性降解蒽醌类成分而不破坏二苯乙烯苷的能力,获得了具有发酵炮制作用的菌株.     

何首乌生长过程中二苯乙烯苷的含量变化

对1～4年生何首乌的主要药用成分二苯乙烯苷含量在不同时期、不同器官中的变化进行测定分析,以明确何首乌的最佳采收时间和采收部位.结果显示:何首乌各器官中块根的二苯乙烯苷含量最高,为5.35%,其次为老根和老茎,营养器官的幼嫩部分及生殖器官中的含量都很低;随着生长年限的增加,块根中二苯乙烯苷含量逐渐增加.块根中二苯乙烯苷的含量从6月至10月逐渐升高,10月含量达到最高,为7.09%,然后含量逐渐降低.何首乌块根各部分中二苯乙烯苷的含量差异较大,周皮含量最高,为9.64%,薄壁组织最低.从二苯乙烯苷的含量变化考虑,10月采收何首乌较为合理,且老根和老茎应进行综合利用.     

二苯乙烯苷抗动脉粥样硬化的作用和机制

二苯乙烯苷是中药何首乌中主要的水溶性生物活性成分。大量研究表明,二苯乙烯苷能够通过调脂、抗氧化、抗炎、舒张血管及增强免疫力等作用而抑制动脉粥样硬化的发生和发展,作为抗动脉粥样硬化的一种有效成分极具研究价值。但目前对其抗动脉粥样硬化的潜在作用机制还不完全清楚,本文就二苯乙烯苷在调节脂质、抗氧化、降低炎性反应等方面作用和机制作一综述。     

疏毛绣线菊的抗氧化活性研究

采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除[2,2-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法对疏毛绣线菊总抗氧化活性行评价,将测定结果与阳性对照药物二丁基羟基甲苯(BHT)进行比较。研究结果发现疏毛绣线菊正丁醇部位具有较强的清除DPPH自由基(IC50=42.2μg/mL)和还原Fe3+的能力(TEAC=1052.46μmol/g),乙酸乙酯部位清除ABTS自由基能力(IC50=6.4μg/mL)较好,但均弱于阳性对照药物BHT(IC50和TEAC值分别为23μg/mL、2.3μg/mL和1532.7μmol/g)。实验证明疏毛绣线菊正丁醇部位体外抗氧化活性较强。