微生物发酵炮制何首乌机理的初步研究

为探讨微生物发酵炮制何首乌的机制,采用HPLC考察何首乌微生物发酵前后二苯乙烯苷类和蒽醌类化学成分的变化。何首乌经米根霉发酵后,产生了新的蒽醌类成分大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,而二苯乙烯苷类成分无变化。同时药理研究发现,大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对家兔肠平滑肌的收缩作用弱于大黄素。由此推断,在何首乌发酵炮制过程中,米根霉可催化大黄素转化为大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,从而降低何首乌的泻下作用。实验结果初步验证了微生物发酵炮制何首乌的科学性。     

何首乌不同器官和组织中蒽醌和茋类化合物的分布

目的探讨何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)不同营养器官和组织中蒽醌类和茋类化合物的分布,为合理利用何首乌提供科学依据.方法采用数码显微鉴定和TLC对何首乌的不同器官和组织部位进行了比较研究.结果从器官来看,何首乌藤茎、地下茎和块根中均含有蒽醌(大黄素和大黄素甲醚)和芪类(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)而叶和嫩茎则不舍;从组织部位来看,蒽醌类成分主要分布于韧皮部,而茋类成分主要分布于周皮和韧皮部,木质部最少.结论蒽醌类和茋类成分的产生与周皮的形成有一定的关系.蒽醌类化合物的含量可能与韧皮部的发达程度有关,茋类化合物主要产生和贮藏于薄壁细胞中.     

何首乌不同器官和组织中蒽醌和芪类化合物的分布

目的探讨何首乌（Polygonum multiflorumThunb．）不同营养器官和组织中葸醌类和芪类化合物的分布,为合理利用何首乌提供科学依据。方法采用数码显微鉴定和TLC对何首乌的不同器官和组织部位进行了比较研究。结果从器官来看,何首乌藤茎、地下茎和块根中均含有蒽醌（大黄素和大黄素甲醚）和芪类（2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷）而叶和嫩茎则不含;从组织部位来看,蒽醌类成分主要分布于韧皮部,而芪类成分主要分布于周皮和韧皮部,木质部最少。结论蒽醌类和芪类成分的产生与周皮的形成有一定的关系,蒽醌类化合物的含量可能与韧皮部的发达程度有关,芪类化合物主要产生和贮藏于薄壁细胞中。     

何首乌生长过程中二苯乙烯苷的含量变化

对1～4年生何首乌的主要药用成分二苯乙烯苷含量在不同时期、不同器官中的变化进行测定分析,以明确何首乌的最佳采收时间和采收部位.结果显示:何首乌各器官中块根的二苯乙烯苷含量最高,为5.35%,其次为老根和老茎,营养器官的幼嫩部分及生殖器官中的含量都很低;随着生长年限的增加,块根中二苯乙烯苷含量逐渐增加.块根中二苯乙烯苷的含量从6月至10月逐渐升高,10月含量达到最高,为7.09%,然后含量逐渐降低.何首乌块根各部分中二苯乙烯苷的含量差异较大,周皮含量最高,为9.64%,薄壁组织最低.从二苯乙烯苷的含量变化考虑,10月采收何首乌较为合理,且老根和老茎应进行综合利用.     

何首乌及其同属混伪品的鉴别研究

目的:探讨何首乌属3种药用植物何首乌、毛脉蓼及齿叶蓼根的性状、显微及化学成分的区别,为合理用药提供科学依据。方法:观察何首乌、毛脉蓼及齿叶蓼药材的性状和显微特征,并对3者的LC-ESI/MS图谱进行分析。结果何首乌、毛脉蓼、齿叶蓼根的形态特征、显微结构及化学成分上均存在明显差异:何首乌根断面黄棕色或红棕色,可见"云锦状花纹",韧皮部宽广,可见异常维管束和纤维束,二苯乙烯类成分含量较高。毛脉蓼断面土黄色或黄棕色,韧皮部宽,可见纤维束,主要含有大量的蒽醌类成分;而齿叶蓼断面为红色或紫红色,韧皮部狭窄,细胞多皱缩,未见异常维管束和纤维束,不含有蒽醌及二苯乙烯类成分,主要含有原花青素类成分。结论:何首乌与毛脉蓼在性状及成分类型上具有一定的相似性,只是含量的差异不同,而齿叶蓼则均具有较大的差异性,尤其是不含有何首乌属普遍具有的蒽醌类成分。     

毛脉酸模内生真菌蒽醌类次生代谢产物的筛选及含量分析

本文通过对毛脉酸模内生真菌的发酵培养得到其次生代谢产物,采用HPLC法对内生真菌中蒽醌类成分进行筛选。以大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素五种蒽醌类成分为参照,筛选出3株真菌含大黄素、3株真菌含大黄酸、5株真菌含芦荟大黄素,其中含量最高为683μg/g、最低为8μg/g。将各菌株所含成分与各菌株分离部位的相应成分进行比较,相对宿主植物而言各菌株均有较高的含量。本实验分析方法准确、快捷,适用于毛脉酸模内生真菌的代谢产物研究。     

不同炮制时间对何首乌成分及含量的影响

研究何首乌最佳炮制时间及其成分的含量变化特征。采用HPLC法测定6个不同炮制时间的何首乌对比市售制首乌中各成分的含量,并采用指纹图谱相似性分析、聚类分析以及PLS回归分析对测定结果进行特征分析。结果表明相似度均在0.9~1.0之间,各个样本之间有较好的相关性。聚类分析方法将6个不同炮制时间的何首乌按成分变化特征聚为4类。PLS回归分析法得到二苯乙烯苷和白藜芦醇为不同炮制时间的成分含量变化的主要差异成分。4 h为何首乌最佳炮制时间,为何首乌的质量控制以及深入研究提供参考依据。     

何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异

目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差并.方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50％稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体积比为20∶80),利用高效液相色谱分析其二苯乙烯苷含量差异;采用实时荧光定量PCR分析芪合酶基因Fm-STS表达差异,以β-actin作为内参对照,2-△△CT公式计算各组别中FM-STS的含量.结果:根茎叶中芪合物二苯乙烯苷含量依次为14.62mg/g、1.78mg/g和0.47mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量为叶片中最高,根是叶的1/10倍,茎是叶的1/64倍.结论:芪合酶基因FM-STS主要在何首乌叶片中表达,二苯乙烯苷主要在叶片中合成,进而转移到根块中富集.     

土壤pH值对何首乌生理及其光合特性和有效成分含量的影响

该研究采用盆栽试验,探究不同土壤pH (4.5、5.5、6.5、7.5、8.3、9.5)对何首乌生长、生理特性及有效成分含量的影响,以明确何首乌种植的适宜土壤pH。结果表明：(1)何首乌在土壤pH 6.5~9.5时能正常生长,在pH 4.5和5.5时出现叶片枯萎脱落,少数不能存活;叶面积在pH 4.5～9.5范围内先增加后降低,并在pH 6.5和7.5达到高峰值,且显著高于其余处理。(2)在土壤pH 4.5~9.5范围内,何首乌叶片叶绿素含量、净光合速率、气孔导度和蒸腾速率均呈现先增加后降低的趋势,并在pH 6.5和7.5时达到峰值;叶片脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量总体上随pH升高呈降低趋势;叶片丙二醛含量随pH升高先降低而后增加,其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性均随pH升高先升高后降低。(3)在土壤pH 4.5~9.5范围内,何首乌块茎有效成分含量随pH升高而降低,但均达到《中华人民共和国药典》标准,其中二苯乙烯苷含量和结合蒽醌含量分别为1.89% ～ 5.41%和0.10% ～ 0.25%;土壤pH为4.5时,何首乌块茎中二苯乙烯苷和总蒽醌含量达到最高,分别为5.41%和0.38%。研究认为,何首乌对土壤酸碱有一定的耐受性,但在进行何首乌人工驯化和种植时要尽量避免强酸性环境,且宜选择pH在6.5 ～ 8.3的中性至弱碱性土壤。     

何首乌营养器官结构与二苯乙烯苷的积累动态研究

采用显微制片技术、组织化学定位和二苯乙烯苷定量分析等方法,对何首乌的各种营养器官分别进行了二苯乙烯苷的定位、含量和相应的组织结构特征研究。结果表明:二苯乙烯苷在何首乌的各类营养器官中均有分布,依据含量排序为:根状茎块根叶茎。二苯乙烯苷的含量因营养器官的生长发育时期不同而发生变化(茎除外)。二苯乙烯苷在何首乌块根中的积累变化是呈直线上升趋势(4月份除外),10月末含量最为丰富;在根状茎和叶中二苯乙烯苷的变化趋势一致,8月末积累达到最大值;二苯乙烯苷在茎中含量较少,且在任何生长期内变化不明显。何首乌的块根属于异常结构,栓内层、次生韧皮部、三生韧皮部和维管射线是其积累二苯乙烯苷的主要场所;二苯乙烯苷在根状茎中的主要积累组织有栓内层、皮层、次生韧皮和维管射线;栅栏组织是叶内二苯乙烯苷积累的主要场所。