大鼠卵巢促黄体激素／人绒毛膜促性腺激素受体cDNA的克隆和在…

促黄体激素／人绒毛膜促性腺激素受体（ＬＨ／ｈＣＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）是一种与蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢ｃＤＮＡ库中筛选ＬＨ／ｈＣＧ受体ｃＤＮＡ及其在昆虫细胞中的高效表达。ＬＨ／ｈＣＧ受体ｃＤＮＡ全长２４０３ｂｐ,编码受体信号肽和成熟受体６７４个氨基酸。用多角体病毒表达载体ｐＶＬ１３９３,ＬＨ／ｈＣＧ受体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示,用     

C5a受体的作用位点及信号传导

Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）属Ｇ蛋白偶联／ＳＴＲ超家族超成员,它至少具两个配体结合位蹼：一个位于Ｎ末端,另一个可能为第二细胞外环上的Ｇｌｕ＾１９９。Ｃ末端和第三胞浆内环与Ｇ蛋白偶联。与Ｃ５ａＲ偶联的Ｇ蛋白有Ｇｉα２、Ｇｉα３、Ｇ１６和Ｇｚ,已知涉及的信号传导通路为ＰＩ－ＰＬＣ、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＡＰＫ、ｃＡＭＰ。Ｃ５ａＲ分子及基因结构已阐明,各功能位点,信号传导还有待深入研究。     

雌性川金丝猴尿中生殖激素变化的研究

用人促黄体生成素／绒毛膜促性腺激素诊断药盒及雌激素诊断药盒,定期测定４只雌性川金丝猴尿中黄体生成素和绒毛膜促性腺激素的活性及其与雌激素含量的关系。实验证明,两种人用诊断药盒可以测出金丝猴尿中的促黄体生成素（ＬＨ）／绒毛膜促性腺激素（ＣＧ）及雌激素（Ｅ）的变化情况。基本上反映了金丝猴的卵泡形成、排卵和黄体生成的时间以及妊娠的情况。ＬＨ／ＣＧ及Ｅ,每月有一个大的峰值,其后１－４天内有月经或尿潜血出现。妊娠初期ＬＨ／ＣＧ急剧上升,持续一个月达到最高峰后即急剧下降。Ｅ在ＬＨ／ＣＧ下降后开始升高,持续３－４个月达到最高峰,高峰下降后半个月左右分娩,分娩后重新升高,但低于原水平。金丝猴的繁殖行为,主要表现为邀配和交配,９－１２月频率最高。根据ＬＨ／ＣＧ曲线的变化可以推断受精的大约日期。     

促性腺激素对猪卵丘细胞-卵母细胞复合体体外减数分裂恢复作用的研究

本实验利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,选用猪卵泡液中自然存在的次黄嘌呤（ＨＸ）作为卵母细胞自发成熟的抑制剂,研究了促性腺激素对猪卵丘细胞－卵母细胞复合体（ＣＥＯ）减数分裂恢复的具体作用。ＣＥＯ在含有不同浓度的促性腺激素（ＦＳＨ,ｈＣＧ,ＦＳＨ＋ｈＣＧ）的培养液中培养２４ｈ,观察卵母细胞减数分裂恢复（ＧＶＢＤ）情况。实验结果如下：１．ＦＳＨ（１－５００ＩＵ／Ｌ）能够明显刺激ＣＥＯ克服ＨＸ的抑制作用而恢复减数分裂（Ｐ＜０．０５）,该作用具有剂量依赖性;２．ｈＣＧ（１－５００ＩＵ／Ｌ）对ＣＥＯ减数分裂的恢复无明显作用;３．ｈＣＧ（１０－５００ＩＵ／Ｌ）与ＦＳＨ（１０,１００ＩＵ／Ｌ）无协同作用。上述结果表明,猪ＣＥＯ减数分裂的恢复可能主要依赖于ＦＳＨ的作用,该作用能使猪卵丘细胞产生一种或几种阳性因子,作用于卵母细胞,从而克服ＨＸ的抑制作用而恢复减数分裂。ｈＣＧ无明显作用,可能是因为卵丘细胞上没有ＬＨ受体或ＬＨ受体的数量不足     

内皮素—1对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞产生孕酮的影响

本文用离体细胞体外孵育法研究了内皮素－１（ＥＴ）对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞孕酮生成的影响及其作用机理。结果发现,ＥＴ能显著抑制ｈＣＧ刺激下的孕酮产生,抑制作用在浓度为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,即有显著意义（Ｐ＜０．０５,ｎ＝６）,至１０－７ｍｏｌ／Ｌ时则有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１,ｎ＝６）;不同浓度ＥＴ（１０－７—１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,对颗粒细胞基础孕酮的产生无明显影响。进一步研究表明,ＥＴ对ｈＣＧ刺激下孕酮生成的抑制作用,在用免抗人内皮素抗血清（ＥＴ－Ａ）１：１０００及ｃＡＭＰ后能明显被逆转。实验中还观察到,ＥＴ使颗粒细胞ＬＨ／ｈＣＧ受体数下降,亲和力降低。本文结果提示,ＥＴ可能为卵巢内的一种局部调节肽,通过作用于ＥＴ受体,干扰ＬＨ／ｈＣＧ受体功能和ｃＡＭＰ生成而抑制颗粒细胞孕酮的产生。     

P物质在谷氨酸兴奋外侧下丘脑-穹窿周围区引起的升压反应中之作用

Ｐ物质（ＳＰ）能神经元及其轴突末梢和受体广泛分布于很多心血管中枢。外侧下丘脑含ＳＰ能神经元,外侧下丘脑投射的升压区内又存在ＳＰ能纤维及ＳＰ受体;因此本工作检验ＳＰ在外侧下丘脑升压反应中的作用。实验显示：（１）Ｌ－谷氨酸（Ｇｌｕ）兴奋外侧下丘脑的穹窿周围区（ＬＨ／ＰＦ）或将ＳＰ分别注入各ＬＨ投射区：蓝斑（ＬＣ）、臂旁核（ＮＰＢ）或中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）均引起升压反应;（２）［Ｄ－Ｐｒｏ２,Ｄ－Ｐｈｅ７,Ｄ－Ｔｒｐ９］－ＳＰ（ＳＰ拮抗剂）预先注入ＬＣ或ＰＡＧ可使Ｇｌｕ兴奋ＬＨ／ＰＦ引起的升压反应减小,而注入ＮＰＢ对该反应无明显影响;（３）双侧延髓头端腹外侧区（ＲＶＬ）分别用酚妥拉明、心得安或阿托品预处理也可明显削弱该反应。结合我们以往的实验结果：ＲＶＬ内的α－、β－、Ｍ－受体介导ＬＣ升压反应,α－和β－受体介导ＰＡＧ－升压反应;本工作显示ＬＨ／ＰＦ可通过其ＳＰ能投射纤维作用于ＬＣ－ＲＶＬ和ＰＡＧ－ＲＶＬ升压系统而实现其升压反应。     

G蛋白偶联受体激活丝裂原活化蛋白激酶的机理

多种Ｇ蛋白偶联受体的均能激活丝裂原活化蛋白激酶。Ｇｉ蛋白偶联受体主要通过其βγ亚基,依赖Ｒａｓ蛋白途径;在大多数哺乳类细胞中Ｇｓ蛋白偶联受体通过ＰＫＡ途径抑制Ｒａｓ依赖的ＭＡＰＫ活化,但在ＣＯＳ－７细胞,Ｇｓ蛋白偶联受体通过ＰＫＡ途径使表达的ＭＡＰＫ活化;Ｇｑ蛋白偶联受体主要通过ＰＫＣ途径依赖或非依赖于Ｒａｓ使ＭＡＰＫ活化。ＭＡＰＫ信号途径中ＥＧＦ受体,酪氨酸激酶及调节蛋白Ｓｈｃ等联级反应蛋白可能     

大鼠卵巢绒毛膜促性腺激素受体在CHO中的表达和扩增

本文报道了利用二氢叶酸还原酶放大系统将大鼠ＬＨ／ｈＣＧ受体（记为Ｆ－ｈＣＧＲ）及其胞外肽段（记为Ｔ－ｈＣＧＲ）在中国苍鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中的表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,Ｆ－ｈＣＧＲ为一条蛋白质带,其表观分子量为９２ｋｄ,而Ｔ－ｈＣＧＲ为３５ｋｄ和３７ｋｄ两条带。表达受体对其配基ｈＣＧ表现出高的亲合力,Ｆ－ｈＣＧＲ的解离常数为７×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,Ｔ－ｈＣＧＲ为６．４×１０－９ｍｏｌ／Ｌ。表达Ｆ－ｈＣＧＲ的转染ＣＨＯ细胞可结合１２５Ｉ－ｈＣＧ,而表达Ｔ－ｈＣＧＢ者不结合１２５Ｉ－ｈＣＧ。这提示Ｆ－ｈＣＧＲ主要存在于细胞质膜表面上。表达Ｆ－ｈＣＧＲ的转染ＣＨＯ细胞能刺激。ｃＡＭＰ的形成,而表达Ｔ－ｈＣＧＲ者不能刺激ｃＡＭＰ形成。免疫荧光定位结果表明,Ｔ－ｈＣＧＲ主要分布于质膜的细胞质侧以及胞内其他一些细胞器膜上。用免疫亲和层析可以得到纯化的Ｔ－ｈＣＧＲ。     

大鼠卵巢促黄体激素受体膜外微区（1—341）在昆虫细胞中的表达…

促黄体激素／人绒毛膜促性腺激素受体（ＬＨ／ｈＣＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）Ｎ端膜外微区３４１个氨基酸残基（简称Ｒ３４１）与激素有很高的亲和力。本文报道编码Ｒ３４１的ｃＤＮＡ在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染及其产物性质的初步研究。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条带：分子量为３８．５Ｋｄ的主带和分子量为４０．０Ｋｄ的次带。配基结合免疫印迹和１２５Ｉ－ｈＣＧ     

细胞质膜上的Ca^2＋受体

以前就有过设想；甲状旁腺细胞表面的Ｃａ＾２＋受体可感受细胞外Ｃａ＾２＋浓度变化并起应答反应。最近克隆到的与Ｇ蛋白偶联的Ｃａ＾２＋受体证实了上述观点。Ｃａ＾２＋受体可调节不同细胞活性。Ｃａ＾２＋受体的发现为新药设计提供了新的靶分子物质。     

味觉信号的通用编码途径

味觉对于辨别甜味、苦味、酸味、咸味和鲜味 (氨基酸味 )有重要的作用。最近 ,利用遗传学、生物信息学、表达克隆等手段克隆了哺乳动物的味觉受体。甜味和鲜味是由Ｔ1Ｒ家族的三个Ｇ蛋白偶联受体介导的。苦味主要由Ｔ2Ｒ家族约 30个Ｇ蛋白偶联受体所介导。ＴＲＰＭ5是一种新近从味觉细胞中克隆的基因 ,属于ＴＲＰ钙离子通道家族。形态学研究结果表明 ,ＴＲＰＭ5与Ｔ1Ｒ或Ｔ2Ｒ受体共存 ,并且证明ＴＲＰＭ5可以被味觉受体通过磷脂酶Ｃ(ＰＬＣ)所激活。ＴＲＰＭ5或者ＰＬＣβ2基因敲除的小鼠表现出甜味、苦味和鲜味味觉缺失 ,但不影响其酸味和…     

LH/CG受体基因克隆与表达的研究进展

LH/CG受体是一种与G蛋白偶联的在哺乳动物生殖及性功能调节起重要作用的糖蛋白激素受体。介绍了鼠、猪及人等哺乳动物、鸟类、鱼类LH/CG受体基因及昆虫,无脊椎动物等LH/CG类受体的基因克隆表达及特性。     

M受体亚型与G蛋白

５种不同的Ｍ受体亚型的基因已被克隆，用免疫沉淀法观察了它们在体内的分布；Ｇ蛋白调节许多膜受体介导的细胞内功能，在牛的中枢神经系统中发现至少有５种独立的Ｇ蛋白，且每种Ｇ蛋白都由３个亚基构成。实验表明，５种Ｍ受体亚型通过不同的Ｇ蛋白，可同时与ｃＡＭＰ改变和ＰＩ翻转发生偶联作用。     

菠菜和黄瓜光系统Ⅱ捕光叶绿素a／b蛋白质复合体的比较研究

用菠菜（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ Ｍｉｌｌ．）和黄瓜（Ｃｕｃｕｍ ｉｓｓａｔｉｖｕｓＬ．）叶片的叶绿体制备出光系统Ⅱ捕光叶绿素ａ／ｂ 蛋白质复合体（ＬＨＣⅡ）,并对这两种ＬＨＣⅡ的聚合状态的Ｃｈｌａ／ｂ 值、光谱特性以及多肽组分进行了比较研究。实验结果表明,菠菜ＬＨＣⅡ的Ｃｈｌａ／ｂ 为１．３３,黄瓜ＬＨＣⅡ的Ｃｈｌａ／ｂ 为１．１７。其光谱特性说明黄瓜的ＬＨＣⅡ更富含Ｃｈｌｂ。它们的多肽组分存在着明显差异,菠菜的ＬＨＣⅡ含有２７ ｋＤ和２５ ｋＤ ２个多肽,而黄瓜的ＬＨＣⅡ只含有２７ ｋＤ １个多肽,这表明２５ ｋＤ多肽含有较少的Ｃｈｌｂ。叶绿素蛋白质复合体的分析结果表明,菠菜ＬＨＣⅡ的单体、二聚体及三聚体均由２个多肽组成;而黄瓜的ＬＨＣⅡ不同聚合状态均由１个多肽组成     

GM3对重建Gs与AC偶联功能的影响

将神经节苷脂ＧＭ３（Ｍｏｎｏｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ－ＧＭ３）通过保温法掺入到含激活型Ｇ蛋白（ＳｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,Ｇｓ）与腺苷酸环化酶（ＡｄｅｎｙｌｙｌＣｙｃｌａｓｅ,ＡＣ）的脂酶体中,研究了ＧＭ３对Ｇｓ和ＡＣ偶联功能的影响。实验结果表明,在４－１０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围的ＧＭ３增加ＡＣ的基础活力;在高于４μｍｏｌ／Ｌ时,ＧＭ３可显著抑制Ｇｓ激活ＡＣ的能力;而在ＧＭ３浓度高于１００μｍｏｌ／Ｌ的条件下,Ｇｓ结合ＧＴＰγＳ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ５＇－Ｏ－（３－ｔｈｉｏｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ））的活力受到明显抑制。随外源ＧＭ３浓度的增加,ＧＭ３对Ｇｓ激活ＡＣ的能力与对ＡＣ基础活力的影响似乎并不完全一致。这些结果提示,Ｇｓ与ＡＣ的解偶联对较低浓度的ＧＭ３的影响更加敏感。用荧光探剂ＭＣ５４０标记脂酶体,测量其荧光光谱的结果显示,随着ＧＭ３浓度增加,ＭＣ５４０的荧光强度增强,这说明外源性的ＧＭ３的掺入使膜脂质分子头部的堆积变得更加疏松。这可能提示,ＧＭ３介导的膜脂物理状态的变化是调节Ｇｓ与ＡＣ偶联功能的重要因素之一。     

双单抗的免疫层析一步法用于早妊诊断的研究

在试管式、微孔式和斑点式的酶免测定法测定人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）的基础上,发展了应用双单克隆抗体的免疫层析一步法测定ＨＣＧ。此法用胶体金标记抗βＨＣＧ单克隆抗体,将抗αＨＣＧ单克隆抗体包被在硝酸纤维素膜上。无需分离步骤,特别是在进行测定时除加入样品外无需再加任何试剂,此方法特别迅速、简便,２～５ｍｉｎ即可得结果。凡ＨＣＧ浓度＞２５ＩＵ／Ｌ的样品可得到阳性结果。在人体血或尿中可能出现的高浓度的干扰物质,如抗坏血酸、乙酰水杨酸、雌二醇、蛋白质、胆红素、甘油三酯等对本测定均无干扰作用,在促黄体激素（ＬＨ）浓度高达５００ＩＵ／Ｌ时仍与ＨＣＧ没有交叉反应。能进行测定的最高值大于３００ＩＵ／ｍｌ,这表示,当ＨＣＧ浓度达到妊娠期的最高值时仍不会有假阴性结果。     

G蛋白－肌醇磷脂途径及其与高血压的关系

作为第二信使的三磷酸肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌ－１,４,５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＩｎｓＰ３）主要经２种途径形成：Ｇ蛋白偶联受体和酪氨酸激酶偶联受体。两类受体激活各自相应的磷脂酶Ｃ（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ,ＰＬＣ）而水解磷脂酰肌醇－４,５－二磷酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－４,５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＰｔｄＩｎｓ４．５Ｐ２）形成ＩｎｓＰ３和二酯酰甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ,ＤＧ）。ＩｎｓＰ３形成后动员储存钙和促进外源性钙内流。近年来的研究证实,Ｇｑ是调节ＰＬＣ－β１活性的特导性Ｇ蛋白,Ｇｑ系列α亚单位包括Ｇαｑ、Ｇα１１、Ｇα１４、Ｇα１５和Ｇα１６。高血压的重要病理基础是动脉血管壁的痉挛和增殖,许多血管活性物质可以促使血管平滑肌细胞的收缩和增生,同时伴有细胞内ＩｎｓＰ３产生增加．但高血压并不能造成Ｇｑ量的持续改变。     

糖皮质激素对谷氨酸和GABA受体的电生理反应的快速调制作用

在大鼠下丘脑薄片和豚鼠腹腔神经节上,分别用玻璃微电极细胞外和细胞内记录方法,观察了１０＾６ｍｏｌ／Ｌ糖皮质激素（ＧＣ）对谷氨酸和ＧＡＢＡ受体分层效应的快速调制作用。结果表明,ＧＣ灌流后５ｍｉｎ,对谷氨酸受体介导的效应起抑制作用,而对ＧＡＢＡ受体介导的效应起增强作用。撤除ＧＣ后,神经元对谷氨酸和ＧＡＢＡ的反应恢复到对照水平。低钙高镁灌流液不能取消ＧＣ的调制作用。结果提示,ＧＣ在不需要突触环路条件下,     

Urotensin Ⅱ——体内最强的缩血管活性肽

鱼尾加压素Ⅱ（ｕｒｏｔｅｎｓｉｎⅡ,ＵⅡ）最早是从鱼的脊髓中分离出来的生长抑素样环肽,近年已从人体中克隆出来,并发现它主要分布于神经和心血管组织。最近,Ａｍｅｓ等发现,人体内一种孤立的Ｇ蛋白偶联受体ＧＰＲ１４是ＵⅡ的特异性受体。作者根据大鼠ＧＰＲ１４（ＳＥＮＲ）在人类基因库中的查寻,分离出一种９ｋｂ的基因克隆,能够编码３８９个残基的人特异性Ｇ蛋白偶联受体。ＧＰＲ１４主要分布在心血管及神经系统。ＵⅡ能同ＧＰＲ１４进行高度特异性结合,促进细胞内Ｃａ２＋增加。ＵⅡ能引起大鼠游离胸主动脉的强烈痉挛,而在…     

CRF在谷氨酸兴奋中央杏仁核引起的升压反应中之作用

促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）能神经元的胞体和轴突末梢广泛分布在中央杏仁核（ＡＣ）及其投射的重要升压区。本工作显示：（１）谷氨酸兴奋ＡＣ或将ＣＲＦ分别注入ＡＣ投射区：室旁核（ＮＰＶ）、外侧下丘脑／穹窿周围区（ＬＨ／ＰＦ）、蓝斑（ＬＣ）、臂旁核（ＮＰＢ）、中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）或延髓头端腹外侧区（ＲＶＬ）均引起升压反应;（２）ＡＣ的上述投射区内预先分别注入α－ＨｅｌｉｃａｌＣＲＦ［９－４１］（ＣＲＦ拮抗剂）均能阻断谷氨酸兴奋ＡＣ引起的升压反应。以上结果结合以往报道：ＬＨ／ＰＦ也有纤维投射至ＬＣ、ＮＰＢ和ＰＡＧ,后三者均可通过ＲＶＬ引起升压反应,表明ＡＣ发出的ＣＲＦ能投射纤维一方面可兴奋ＮＰＶ,另一方面则可间接（通过ＬＨ／ＰＦ）或直接作用于ＬＣ、ＮＰＢ和ＰＡＧ,进而激活ＲＶＬ－交感兴奋神经元,也可能直接兴奋ＲＶＬ而引起升压反应