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提取纯化了油菜叶绿体核糖体4.5S RNA(4.5S rRNA)并在其5’端标记 32P,作为探针与高梁叶绿体DNA(ctDNA)进行分子杂交。结果证明油菜4.5Sr RNA可作为公用探针,对一般植物,特别是高等植物进行分子杂交研究。杂交的结果得到两条带。 相似文献
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本文用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的多角体蛋白基因mRNA的cDNA为探针,用 35S-α-dATP为标记化合物,经缺口转移体外标记探针DNA,用旋转柱层析法分离出标记探针,由膜上DNA-DNA杂交,将ArNPV的多角体蛋白基因定位,确定是在其EcoRⅠ-Ⅱ片段上。 相似文献
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以原代培养的大鼠前脂细胞为模型 ,以 2′ ,7′ bis ( 2 carboxyethyl) 5 ( 6 ) carboxyfluorescein (BCECF)作为检测胞内pH(pHi)的荧光探针 ,测定不同生长因子刺激下胞内pH的变化 ,证明大鼠肾周前脂细胞质膜存在Na+/H+交换活性 ,胎牛血清(FCS)能快速激活Na+/H+交换 ,导致pHi升高 (约 0 .2pH单位 ) ,并引起DNA合成 .Ethyl isopropyl amiloride (EIPA)抑制Na+/H+交换与DNA合成 .在无血清条件下 ,胰岛素不刺激DNA合成但引起细胞分化 ,表现为胞内脂滴积累和 3 磷酸 甘油脱氢酶(G3 PDH酶 )活性增强 ,同时激活Na+/H+交换活性导致pHi升高 ;EIPA既抑制胰岛素对Na+/H+交换的激活 ,也抑制G3 PDH酶活性增强 .结果证明 :Na+/H+交换的激活不仅与大鼠前脂细胞增殖相关 ,同时也是细胞分化的早期事件 . 相似文献
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新型MGB探针在沙眼衣原体实时PCR检测中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
为建立基于TaqMan-MGB探针的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测方法,探讨其临床应用价值,用 PCR法扩增沙眼衣原体隐蔽质粒pLVG440 2 464~2 980 nt段,并克隆入pMD18-T载体用作参比模板,设计一对引物和一个TaqMan-MGB探针,优化反应条件,建立沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统,并运用该系统同时应用连接酶链式反应(LCR)法对临床标本进行检测.结果显示所建立的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统,最低检测限度为1 DNA拷贝每反应;在100~109 DNA拷贝每反应范围内,Ct值(每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数)和DNA拷贝数呈线性关系(r>0.990);对临床标本检测结果同LCR分析结果吻合率为100%.以上结果表明,所建立的基于TaqMan-MGB探针的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统具有敏感性高、特异性强和线性检测范围广等特点,适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选. 相似文献
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两种末端标记的寡聚核苷酸探针的比较研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文利用[α-32P]-dATP 和 [γ-32P]-ATP分别对寡聚核苷酸的3’-末端及5’-末端进行标记,研究这两种标记方法的技术途径,并结合斑点杂交,比较这两种末端标记的探针的灵敏度及特异性。结果表明:[α-32P]-dATP虽可在寡聚核苷酸的3’-OH末端标上多个[32P]-dAMP分子,但所得标记探针的杂交灵敏度及杂交体的稳定性均不及[γ-32P]-ATP标记5’-末端制备的寡聚核苷酸探针。因此,当实验需要极高灵敏度的寡聚核苷酸探针时,以选择[γ-32P]-ATP标记其5’-末端为宜。 相似文献
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琥珀酸弧菌L-天门冬酰胺酶基因的初级克隆和表达 总被引:1,自引:1,他引:0
本文以表达型噬菌体λgtll为载体,以及125I标记的放射免疫抗体为探针,从EcDR I酶切的琥珀酸弧菌(Vyibrto succinogenes)染色体DNA片段中克隆得到携带天门冬酰胺酶基因的目的片段,在宿主菌E.Coil Y 1090 中得到表达。经酶解和凝胶电泳分析表明该插入DNA片段的分子量为5.8kb.重组DNA感染另一宿主菌E.ColiYl089后所产生的酶蛋白具有L-天门冬酰胺酶活力。用重组DNA(λgt11-AS8)为探针进行southern DNA杂交,琥珀酸弧菌染色体DNA的Ec0R I酶切片段中,出现一条位置在5.8kb处的杂交带,证明我们克隆到的携带L-天门冬酰胺酶基因的目的片段来自琥珀酸弧菌。 相似文献
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大肠杆菌基因组中存在Era亲和蛋白的基因 总被引:2,自引:0,他引:2
构建了一个大肠杆菌基因组DNA λ ZAP表达文库,以Dig标记的Era为探针,从4×104噬斑中筛选到一个与探针呈特异结合的噬斑,说明大肠杆菌基因组中确有Era亲和蛋白基因存在.将该噬菌体中插段DNA前800 bp的测序结果与1996年底完成的大肠杆菌基因组全序列作同源性比较,发现该插段序列位于大肠杆菌基因组的第267 section. 相似文献
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杀蚊球形芽孢杆菌BS10的质粒限制图谱 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道一株国内分离的具有杀幼蚁活性的球形芽孢杆菌(Bacullus Sphaericus下文简称Bs)的大质粒(pFWl),其分子量为69.5×106道尔顿,绘制了该质粒的xhol限制性核酸内切酶酶图。以苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bacillus huringiensis israelensis下文简称BTI)75×106道尔顿质粒为探针与泼菌株DNA进行核酸杂交,结果表明BTI与该菌株为毒素蛋白编码的基因序列之间无同源性,说明它们的进化来源是不相同的。 相似文献
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H2O2-Fe3+所致人淋巴细胞DNA双链断裂损伤 总被引:2,自引:0,他引:2
采用脉冲电场凝胶电泳法检测H2O2-Fe3+体系产生的OH·对人淋巴细胞DNA的双链断裂损伤.H2O2-Fe3+浓度与DNA双链断裂呈明显量效关系;随OH·作用时间延长,细胞DNA双链断裂加重;过氧化氢酶对OH·损伤有明显抑制作用.脉冲电场凝胶电泳法可检测到的H2O2和FeCl3引起细胞DNA双链断裂的最低浓度为0.3 mmol/L和6 μmol/L. 相似文献
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大肠杆菌野生株JE5506(1pp+)和突变株JE5505(1pp-)的染色体DNA的Hind Ⅲ酶解片段,与一带有大肠杆菌外膜脂蛋白信号肽基因的107bp探针,在20℃下进行DNA-DNA杂交,在25kb和3.4kb处各出现一杂交带。该两片段与载体质粒pBR322在体外进行DNA重组,分别得到pHWO14和pHWO15两个重组质粒。该两重组质粒的限制性内切酶酶切图谱,Southern印迹及与107bp探针杂交的实验结果,进一步证明了上述两个DNA片段上存在有与 相似文献
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The response of Saccharomyces cerevisiae to different concentrations of Pb2+ was investigated. The results demonstrated that the growth of S. cerevisiae in the presence of Pb2+ showed a lag phase much longer than that in the absence of Pb2+. The inhibition was dependent upon Pb2+ concentrations. The Pb2+ at a concentration of 5 μM inhibited the microbial growth by approximately 30% with regard to control, whereas Pb2+ at concentration of 2 μM did not have a significant effect on the microbial growth. The existence of Pb2+ did not perturb cell-protein synthesis and there was a good correlation between dry cell weights and total protein content
(R
2 = 0.98). The RNA/DNA ratio in the microbial cells varied with Pb2+ concentration and there was a significant positive correlation between Pb2+ concentration and the RNA/DNA ratio. The microbial assimilation of ammonium ion was inhibited by the presence of Pb2+ in the medium; when Pb2+ concentration was 10 μM, the microbial ammonium assimilation was inhibited about 50%, in comparison with the control experiment. 相似文献
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本文介绍一种简便制备λ[ 3H]DNA的方法。用该方法制备λ[ 3H]DNA,每升培养物可得10mg以上的产物。比放射性为6.75×104cpm/μGλDNA,酸不溶的放射性产物达99%以上。用单链和天然的λ[ 3H]DNA作底物,能方便地检测出酶制剂中极微量的核酸外切酶Ⅰ与Ⅱ和Ⅲ的污染活性。 相似文献
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用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出09kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得高效表达的重组子菌株。重组α-ALDC基因表达量占菌体总蛋白量的27%。酶活检测表明重组子细胞表达的α-ALDC活性是产气肠杆菌的12000倍。另外,粗提的重组α-ALDC的最适pH为6.5~7.0,pH稳定范围为5.5~8.0,适合的温度为35~45℃。Ba2+、Cd2+、Fe2+、Co2+、Mn2+、Sn2+可提高重组α-ALDC的活性。氨基酸修饰剂可降低其活性。 相似文献
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分别以 3H-UR, 14C-Leu, 125I-UdR为前体,采用三标记参入方法,更严格地在同一样品中同时观察了淋巴细胞染硒前后DNA,RNA,蛋白质的合成及变化。结果表明该方法可行,且显著提高了实验效率;三种受试硒化合物在10-8—10-4mol/L浓度范围内对DNA,RNA,蛋白质合成均具有双相性影响,在中毒浓度时,三种硒化合物的毒性顺序为:亚硒酸钠>硒酸钠>硒蛋氨酸。 相似文献
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牛生长激素cDNA的分子克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
我们克隆了与牛生长激素Poly(A)+RNA互补的DNA(cDNA)。首先从小牛垂体中提纯总的Pply(A)+RNA,用AMV逆转录酶合成单链cDNA,以单链cDNA为模板合成双链cDNA,用多聚G及多聚c谱尾法将双链cDNA克隆到pBR322质粒的Pst I位点上,构建成牛垂体PoIy(A)+RNA的cDNA文库。以牛生长激素基因为探针,筛选出7个阳性菌落,经电泳鉴定有两个菌落(1号和2号)含有大于500bp的插入片段。1号克隆经酶切图谱、southeTn blot 杂交及序列分析证实含有牛生长激素的编码序列。 相似文献
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p16INK4a基因的功能及其调控 总被引:1,自引:0,他引:1
p16INK4a蛋白能抑制CDK4和CDK6的活性,使pRb处于非磷酸化或低磷酸化状态而能与转录因子E2Fs结合,从而抑制DNA 的合成,阻止细胞由G1期进入S期.p16INK4a的表达受Ets1和Ets2的正调控,受Bmi-1的负调控.p16INK4a基因缺失、突变、甲基化、RNA剪接加工错误可导致细胞周期失控和癌变.应用p16INK4a对某些肿瘤进行基因治疗的研究正在进行中. 相似文献