FISH和IHC检测HER2基因及蛋白在乳腺癌诊治中的应用

目的对比研究免疫组织化学(IHC)与荧光原位杂交(FISH)方法检测乳腺癌中C-erbB-2蛋白表达和HER2基因扩增,评估两种方法的实际应用价值。方法 IHC和FISH法分别检测58例乳腺癌组织中C-erbB-2蛋白表达和HER2基因扩增状况,并进行一致性分析。结果IHC检测蛋白阳性2+和3+共22例,占总病例的37.9%,58例乳腺癌中FISH检测出HER2基因扩增17例,占29.3%。IHC检测C-erbB-2蛋白3+的12例中11例HER2基因扩增阳性,1例无扩增;C-erbB-2蛋白2+者10例,其中5例可见HER2基因扩增;C-erbB-2蛋白1+者11例HER2基因扩增仅1例。C-erbB-2蛋白阴性病例共25例均未检测到基因扩增。结果显示IHC检测C-erbB-2蛋白与FISH检测HER2基因扩增状态有较高的一致性(k=0.681,P0.01),C-erbB-2蛋白阴性和3+标本与HER2基因扩增阳性率比较差异无统计学意义(P0.05);而C-erbB-2蛋白1+和2+病例与其HER2基因扩增差异具有统计学意义(P0.05)。结果 IHC检测C-erbB-2蛋白强阳性(3+)和阴性(0)与HER2基因扩增有较高的一致性,可作为临床是否应用Herceptin治疗的依据,而C-erbB-2蛋白2+和1+病例必须进一步行HER2基因扩增检测。     

肺腺癌中ALK基因重排的检测*

目的: 比较免疫组化(Ventana IHC)和荧光原位杂交技术(FISH)对肺腺癌ALK基因的检出率。方法: 收集200例肺腺癌患者的临床及病理资料,光学显微镜下复阅其HE切片,标记肿瘤部位,评估蜡块保存情况,制成9张组织芯片,分别采用Ventana IHC和FISH检测ALK基因。结果: 200例病例中,通过FISH检测ALK阳性有9例,通过Ventana IHC检测ALK阳性有11例,其中有两例表现为Ventana IHC(+)、 FISH(-),1例外院做过基因检测,为ALK阴性,EGFR阳性,服用凯美钠,效果良好,另1例未做过基因检测,遂进一步予RT-PCR检验,结果为ALK阴性。最终ALK阳性为9例,Ventana IHC的敏感性和特异性分别是100%和98.95%。结论: Ventana IHC在检测ALK基因重排上表现出较高的敏感性和特异性,可用于FISH检测前的筛选,以避免不必要的FISH检测。     

荧光原位杂交检测乳腺癌HER-2基因的应用价值

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)在检测乳腺癌组织HER-2基因扩增的应用价值.方法:收集50例手术切除的乳腺癌标本.经过处理和切片,FISH法检测细胞HER-2基因扩增情况,IHC法检测细胞膜上HER-2蛋白表达情况.kappa检验法对两种检测结果的一致性进行统计分析.结果:FISH法与IHC法检测结果总符合率为90%(K=0.75,P<0.05).在本组胶东半岛女性乳腺癌人群中HER-2基因扩增率为28%.结论:FISH法检测乳腺癌HER-2基因敏感性及稳定性较高,可作为最终确诊HER-2基因状态的方法.     

乳腺癌患者新辅助化疗后ER、PR、HER2、Ki67表达变化及临床意义

目的:研究乳腺癌患者在新辅助化疗后ER、PR、HER2、Ki67的变化及临床意义。方法:选择2012年1月-2017年12月至我院进行乳腺癌新辅助化疗的患者176例进行临床研究。所有患者化疗前及术后行经B超引导下核芯针穿刺取病理活检,检测ER、PR、Ki67、HER2的表达,分析其变化情况。结果:176例乳腺癌患者新辅助化疗前ER阳性为57例,新辅助化疗后ER阳性为69例,新辅助化疗前ER阴性为119例,新辅助化疗后ER阴性107例;新辅助化疗前后状态改变了34例(19.32%),其中12例新辅助化疗前ER阴性转变为ER阳性,22例新辅助化疗前ER阳性转变为新辅助化疗后ER阴性,化疗前后患者ER表达变化有统计学差异(x~2=8.044,P=0.037);176例乳腺癌患者新辅助化疗前PR阳性为83例,新辅助化疗后PR阳性为89例,新辅助化疗前PR阴性为93例,新辅助化疗后PR阴性87例;新辅助化疗前后状态改变了82例(46.59%),其中45例新辅助化疗前PR阴性转变为PR阳性,37例新辅助化疗前PR阳性转变为新辅助化疗后PR阴性,化疗前后患者PR表达变化有统计学差异(x~2=6.311,P=0.049);176例乳腺癌患者新辅助化疗前HER2阳性为31例,新辅助化疗后HER2阳性为30例,新辅助化疗前HER2阴性为145例,新辅助化疗后HER2阴性146例;新辅助化疗前后状态改变了3例(1.70%),其中1例新辅助化疗前HER2阴性转变为HER2阳性,2例新辅助化疗前HER2阳性转变为新辅助化疗后HER2阴性,化疗前后患者HER2表达变化无统计学差异(x~2=0.522,P=0.945);176例乳腺癌患者新辅助化疗前Ki67阳性为104例,新辅助化疗后Ki67阳性为95例,新辅助化疗前Ki67阴性为72例,新辅助化疗后Ki67阴性81例;新辅助化疗前后状态改变了109例(61.93%),其中54例新辅助化疗前Ki67阴性转变为Ki67阳性,55例新辅助化疗前Ki67阳性转变为新辅助化疗后Ki67阴性,化疗前后患者Ki67表达变化有统计学差异(x~2=2.936,P=0.048),经过新辅助化疗后,Ki67出现上调表达最高,为23.86%,同时也是下调表达最高,为38.07%。HER2表达保持不变最高,为98.30%。结论:新辅助化疗会对乳腺癌患者ER、PR、Ki67的表达造成影响,其中对Ki67的影响最为显著。     

Anti HER2 ScFv-GFP融合抗体靶向检测HER2的表达

为验证真核表达的携带绿色荧光的抗HER2单链抗体应用于临床诊断HER2阳性肿瘤细胞和病理组织的可靠性,构建融合基因Anti HER2 ScFv-GFP,重组入pFAST Bac HT A载体,在昆虫细胞Sf9中表达,以Ni2+-NTA亲和层析法纯化Anti HER2 ScFv-GFP融合蛋白,测定其浓度与纯度,将同浓度的纯化蛋白分别与3种乳腺癌细胞BT474、SKBR3和MCF7各混合12 h、24 h和48 h,分析其在不同时间段结合HER2阳性肿瘤细胞的稳定性。用纯化蛋白直接检测经抗原修复的乳腺癌病理组织,与免疫组织化学法检测结果对比。结果在昆虫细胞Sf9中可观察到明显绿色荧光,纯化的融合蛋白相对分子量约60 kDa,浓度为115.5μg/mL,纯度约97%,SKBR3和BT474鉴定为HER2阳性。结合12 h、24 h、48 h后其细胞表面均有明显绿色荧光,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光,该抗体滴度为1:64,48 h内该荧光抗体仍具有稳定性。携带绿色荧光的融合抗体检测病理组织与IHC法的结果完全一致。表明成功表达的携带绿色荧光的抗HER2单链抗体可特异性检测HER2阳性乳腺癌细胞BT474和SKBR3,在HER2阳性肿瘤细胞和临床病理组织检测上具有应用前景。     

高特异性HER2/CEP17双色探针的制备与临床应用

目的:探讨高特异性HER2/CEP17双色探针在浸润性乳腺癌中的诊断价值。方法:制备高特异性HER2/CEP17双色探针,通过外周血细胞核型滴片检测该探针的特异性,同时用传统探针和新制备探针对425例浸润性乳腺癌患者进行FISH检测,并对结果进行对比分析,评估高特异性HER2/CEP17探针在浸润性乳腺癌中的临床诊断价值。结果:染色体定位显示,传统的CEP17探针在17号染色体着丝粒处杂交信号明亮,在Y染色体着丝粒处可见一个较17号染色体略弱但肉眼可辨的杂交信号点;而新制备CEP17探针在17号染色体着丝粒处具有明亮的杂交信号,在其余染色体中未见明显的杂交信号点,表明该探针具有较高的特异性。临床样本检测中,新制备探针与传统探针对浸润性乳腺癌HER2基因扩增的检测无统计学差异(P=0.500,χ~2=0.5),然而,对于CEP17杂信号,统计结果表明新制备探针明显少于传统探针(P=0.013,χ~2=5.29)。结论:新方法制备HER2/CEP17探针具有较高的特异性,相比于传统探针更具有临床应用优势。     

基于微滴式数字PCR检测肠癌病人游离环状DNA KRAS突变的新方法

基于微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)设计一种检测肠癌游离循环DNA(Circulating cell free DNA,cf DNA)中KRAS(V-Ki-ras2 Kirsten ratsarcoma viral oncogene homolog)基因突变的新方法并评估其灵敏度和准确性。根据肠癌病人KRAS基因的突变类型设计并合成,采用dd PCR扩增并评估其灵敏度和准确性;根据AMRS-PCR引物设计原理设计KRAS基因的实时定量PCR扩增引物并评估其准确性,进而比较dd PCR和q PCR二者之间的优缺点;最后针对52例肠癌病人的cf DNA采用dd PCR进行检测,研究dd PCR在cf DNA KRAS基因突变检测的应用。成功使用dd PCR和q PCR两种方法对KRAS野生型及7种突变型建立检测方法,使用质粒标准品及实际样品验证该两种方法可行并对其假阳性率、线性范围及检测下限等性能进行了评价,最后成功对52例临床患者和20例正常人的血浆cf DNA样本进行检测,临床灵敏度为97.64%,临床特异性为81.43%。dd PCR的检测性能优于q PCR,LOD达到个位数DNA拷贝,最低可确认突变浓度达到0.01%–0.04%。样本提取效率在方法学建立中也十分重要,直接影响到灵敏度和Cut Off值的判定。临床患者检测结果显示其KRAS突变率接近报道水平。     

早幼粒细胞白血病分子遗传学诊疗技术在临床中的应用

目的:综合多种急性早幼粒细胞白血病(APL)分子遗传学检测方法,比较染色体核型分析(CC)检测方法在临床诊疗中的应用优势.方法:采用急性早幼粒细胞白血病(APL)临床诊断中常用的分子生物学(反转录筑巢式聚合酶链反应--Rf-nest-PCR)、细胞形态学和荧光原位杂交(FISH)方法分别对83例来本院初、复诊的APL患者的骨髓标本进行分析,将结果分别与染色体核型分析(CC)的结果进行比较.结果:83例APL患者中染色体诊断出现典型的t(15;17)异位为79例,占总人数的95.2％;2例出现复杂染色体变化即t(15;17)+7和t(15;17)+9,占总人数的2.4％;1例出现t(11;17)异-位,占总人数的1.2％;1例为正常.PCR对融合基因检测阳性率为92.8％;细胞形态学检测结果阳性率为92.8％;荧光原位杂交阳性率为97.6％.结论:染色体核型分析是对APL疾病诊断的可靠法,特别是在对一些复杂核型的判断上相对于PCR和细胞形态学以及FISH的检测方法上均有很大优势,是其他诊断方法无法取代的.     

SD-PMA-ddPCR检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

【目的】检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌活菌。【方法】利用脱氧胆酸钠(SD)对受损细胞预处理,然后使叠氮溴化丙锭(PMA)进入受损细胞与DNA发生共价交联,提取细菌基因组DNA进行微滴式数字PCR(dd PCR)检测。【结果】0.1%SD和5.0 mg/L PMA协同作用,可以有效抑制108 CFU/m L的单核细胞增生李斯特氏菌死菌DNA的PCR扩增。经过SD和PMA对样品预处理,dd PCR可以在死菌存在条件下,定量检测鸡肉中单核细胞增生李斯特氏菌活菌,消除了"假阳性"结果的出现。活菌灵敏度检测结果显示:SD-PMA-dd PCR的灵敏度为2.0 copies/20μL。SD-PMA-dd PCR方法精密度和稳定性良好。【结论】SD-PMA-dd PCR在检测食源性致病菌方面有巨大的发展空间。     

不同方法检测鸡胴体中沙门菌结果的比较研究

对鸡胴体淋洗液样品进行沙门菌检测,样品经过前增菌和选择性增菌后,分别采用4种不同的方法进行检测,即普通PCR方法、实时荧光PCR方法、免疫学方法(VIDAS)和传统的微生物检验方法。共检测了56份样品,普通PCR检出阳性样品34份,实时荧光PCR阳性样品36份,VIDAS阳性样品28份;PCR和实时荧光定量PCR均无假阳性和假阴性结果。结果显示该3种检测方法均可以用于鸡胴体中沙门菌的快速检测。     

利用HER2/neu胞外配体结合区2从噬菌体抗体库中筛选抗体及其初步鉴定

目的:利用HER2/neu胞外配体结合区2(RLD2)从噬菌体抗体库中筛选相应抗体,并进行初步检测。方法:设计合成引物,利用PCR方法克隆出RLD2基因后,将其连接到pET-24a( )载体中,在大肠杆菌中实现高效表达。对包涵体蛋白经纯化、透析复性后得到目的蛋白。以得到的目的蛋白为靶标,从人源性噬菌体抗体库中进行4轮筛选得到抗体,经ELISA法初步鉴定,并用MTT法检测阳性克隆。结果与结论:初步得到6株亲和力较高的抗HER2/neu抗体,选取其中2株进行了MTT法检测,表明对HER2高表达的乳腺癌细胞有较明显的抑制作用。     

S100A14在乳腺癌不同分子亚型中表达的临床病理研究

目的:探讨S100钙结合蛋白A14(S100A14)在乳腺癌不同分子亚型中的表达及临床病理意义,为确定新的分子分型标志物提供参考依据。方法:254例乳腺癌石蜡组织来源于2013年1月16日至2014年5月22日在中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院暨湖南省肿瘤医院进行乳腺癌根治术的患者。应用免疫组织化学方法检测S100A14在乳腺癌组织中的表达,分析其S100A14在不同分子亚型乳腺癌组织中表达及其与患者临床病理指标间的相关性,采用Kaplan-Meier法分析S100A14蛋白表达与乳腺癌患者预后的关系。结果:S100A14在ER+/PR+/HER2+型、ER+/PR+/HER2-型、ER-/PR-/HER2+型、ER-/PR-/HER2-型乳腺癌四种分子亚型中的阳性表达分别为38.5%、47.1%、75.5%、80.0%,以在ER-/PR-/HER2-型中表达最高,在ER+/PR+/HER2+型中表达最低,四组间的阳性表达比较差异有显著统计学意义(P0.01);S100A14的表达与乳腺癌患者术后肝转移呈正相关(r=0.134,P0.05),与ER、PR表达均呈负相关(r=-0.353,P0.01),而与ER+/PR+/HER2+型、ER+/PR+/HER2-型乳腺癌的临床病理特征无显著相关性(P0.05)。在ER-/PR-/HER2+型乳腺癌中,有腋窝淋巴结转移组患者的S100A14阳性表达率明显高于无腋窝淋巴结转移组,差异有统计学意义(P0.05);在ER-/PR-/HER2-型中,S100A14表达与术后肺转移呈负相关(r=-0.272, P=0.044)。结论:S100A14在不同分子亚型乳腺癌中表达存在差异,其表达与不同分子类型乳腺癌转移或复发有关,可能作为乳腺癌分子分型的候选标记物。     

乳腺癌HER2表达与乳腺X线及超声影像表现的相关性分析(英文)

目的:对比分析乳腺癌人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)表达阳性和阴性与乳腺癌的X线及超声影像表现的相关性。方法:对139例雌激素受体(oestrogen receptor ER)、孕激素受体(progesterone receptor PR)表达均阴性的乳腺癌患者术前行X线及超声形态学分析,术后标本测定癌细胞的人类表皮生长因子受体2(HER2)表达情况,比较并分析HER2+/ER-/PR-乳腺癌和HER2-/ER-/PR-乳腺癌影像学的特征性表现,在X线上主要分析:腺体致密度、及病变类型(肿块、钙化、结构紊乱)。其中肿块主要分析形状、边缘、大小;钙化主要分析形态、分布,在超声上主要分析:肿块边缘、有无强回声点、有无腋淋巴结转移,血流情况。结果:HER2+/ER-/PR-乳腺癌在X线上的特征性表现为单纯肿块(x2=8.067,P=0.005)或肿块伴钙化(x2=4.384,P=0.036),棒状、分枝状钙化(x2=5.723,P=0.017),簇状分布(x2=12.110,P=0.007),肿块直径多2cm(x2=4.933,P=0.026),而在腺体致密度、肿块边缘方面差异无统计学意义。超声的特征性表现为肿块伴钙化(x2=16.134,P0.001)、边界不清(x2=9.188,P=0.010)、伴腋下淋巴结转移(x2=5.210,P=0.022),血流方面差异无统计学意义。结论:HER2+/ER-/PR-乳腺癌影像学有特征性表现,X线常表现为单纯肿块或肿块伴钙化,棒状、分枝状钙化,簇状分布,肿块直径多2cm;超声常表现为低回声肿块、边界不清、其内可见点状强回声、常伴腋下淋巴结转移。     

扩增子测序技术应用于乳腺癌循环游离DNA无创性检测的研究

目的:应用扩增子测序方法检测乳腺癌循环游离DNA肿瘤相关突变。方法:军事医学科学院附属医院的10例HER2阳性晚期乳腺癌患者血样入组,应用扩增子测序技术检测血细胞和血浆中的循环游离DNA(cfDNA),筛选出肿瘤相关基因突变,即循环肿瘤DNA(ctDNA)。结果:检测10例晚期乳腺癌患者外周循环血50个基因,共检出11个突变基因,其中PIK3CA、ERBB4的阳性检出率均达到100%,AKT、TP53的阳性检出率为90%。结论:检测覆盖度及深度均良好,结果提示11个基因的热点突变区域出现单核苷酸的多态性基因突变,突变基因与PI3K-AKT-m TOR通路、Ras-Raf-MEK-ERK通路明显相关。扩增子测序技术和筛选方法可以用于乳腺癌ctDNA的无创性检测。     

非洲猪瘟病毒微滴数字PCR (ddPCR)方法的建立及应用

【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失。因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国。本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)检测方法。【方法】针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR(q PCR)和dd PCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFV ELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率。【结果】建立的ASFV q PCR和dd PCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),dd PCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是q PCR的10倍。ASFV dd PCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进dd PCR技术在我国的发展和应用。     

市售椰子汁(植物蛋白饮料)中椰子、大豆、花生源性成分鉴定的分子生物学方法

为建立市售椰子汁饮料产品中目的种源成分(椰子)和非目的种源成分(大豆、花生)的分子生物学检测鉴定方法。本研究代表性抽取了6批次市售主流品牌椰子植物蛋白汁饮料,提取各样本DNA,通过扩增基因组ITSⅡ片段验证核酸提取效果。之后利用PCR方法检测了样本中椰子种源成分并同时比较了椰子的稳定持家基因eEF1-α和UBC10扩增效果(Xia et al., 2014),发现所有检测样本均可检出椰子成分,并且UBC1O基因更适用于椰子汁这类工业化产品的靶向扩增。另利用实时荧光PCR验证大豆、花生等的源性成分引物、探针特异性,发现6个种源间无交叉反应,无非特异性扩增曲线。在实际样本检测中,实时荧光PCR显示6份样本中无花生源性成分检出;3#和6#样本有大豆成分检出,Ct值分别为33.89和38.15,6#样本经重复实验分析无明显差异,表明在2份椰子汁中检出非目的种源—大豆。考虑到6#样本为弱阳性,故采用特异性、灵敏度更好的微滴式数字PCR (dd PCR)检测并验证前期结论,分析显示在实时荧光PCR中有扩增的2份样本中,3#样本检出大豆阳性微滴信号,6#则为阴性,其余4份样本dd PCR与实时荧光PCR一致,均为阴性。本次实验筛选了更适合扩增椰子植物蛋白饮料DNA的靶基因,建立了此类产品中2个种源鉴定的实时荧光PCR方法,并通过先进的dd PCR法对可疑结果进行验证的完整解决方案,最终避免了假阳性结论,判定这6份市售产品中有1份样本存在掺杂使假。这项工作为监管部门提供了有效的监管手段和技术支撑,将有助于进一步规范椰子汁市场和质量安全。     

靶向HER2的CAR-T细胞构建与抗肿瘤活性的体外分析

CAR-T细胞疗法通过靶向识别肿瘤细胞表面抗原,特异性杀伤肿瘤细胞,近年来已经成为肿瘤免疫疗法的研究热点。通过基因工程方法构建靶向人类表皮生长因子受体2(HER2)的CAR慢病毒表达质粒,以磷酸钙沉淀辅助多质粒共转染HEK293T细胞包装,制备CAR慢病毒颗粒lenti-car,感染人外周血单核细胞获得HER2靶向的CAR-T细胞,并分析其对HER2阳性和阴性肿瘤细胞的特异性抑制效果。研究结果表明,构建的CAR-T细胞可被HER-2阳性的肿瘤细胞特异性激活,分泌大量炎症性细胞因子IFN-γ和IL-2。在同样效靶比等处理条件下,构建的HER2靶向CAR-T细胞对HER2阳性的人卵巢癌细胞株SK-OV-3的生长抑制率为(58.47±1.72)%,显著高于对照组(P0.05);而对HER2阴性的人慢性髓原白血病细胞株K562的生长抑制率为(11.74±2.37)%,与对照组无显著差异(P0.05)。进一步,在K562细胞中转染人HER2表达载体使其成为HER2阳性,则HER2靶向CAR-T细胞对其的生长抑制率上升为(30.41±7.59)%,较HER2阴性K562具有明显差异(P0.05)。研究结果表明,构建的HER2靶向的第二代CAR-T细胞可选择性地抑制高表达HER2蛋白的肿瘤细胞的生长,暗示了其对HER2阳性肿瘤进行细胞免疫治疗的临床应用前景。     

双探针显色原位杂交技术在乳腺癌HER2基因检测中的应用

目的:通过双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的状态,评估双探针显色原位杂交技术的临床应用价值。方法:选取存档蜡块82例,分别用免疫组化及双探针显色原位杂交两种方法对Her-2基因及蛋白进行检测,并采用四格表卡方检验、配对卡方检验及Kappa检验作相关统计学分析。结果:两种方法检测结果不存在显著性差异(P0.05);就两种方法检测结果的一致性分析而言,两种方法所得出的检测结果存在较好的一致性(P0.05)。结论:双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因扩增结果与免疫组化检测HER2蛋白过表达结果高度相似,可作为检测HER2基因状态的有效方法。     

双通道TaqMan实时荧光PCR应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B*58:01的检测与验证

摘要 目的：建立一种双通道TaqMan实时荧光PCR方法,应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B*58:01的快速基因检测,并验证该方法的灵敏度、特异性、重复性及可靠性等性能指标。方法：针对HLA-B*58:01 等位基因序列设计引物和Taqman 探针,建立一种双通道TaqMan实时荧光PCR检测方法,收集陕西省人民医院、浙江大学医学院附属第二医院、浙江大学医学院附属邵逸夫医院三家医院收治的1158例临床诊断为痛风或血清尿酸高患者的外周血标本,采用双盲对照实验,分别采用双通道TaqMan实时荧光PCR法与已获审批的商业试剂盒共同检测所有标本,对比两种方法的检测结果进而评价该TaqMan实时荧光PCR方法的临床性能。结果：双通道TaqMan实时荧光PCR法特异性高,稳定可靠,可检测低至1 ng/?滋L的阳性样本;采用双通道TaqMan实时荧光PCR法与已获审批的商业试剂盒在1158份患者标本中检出的HLA-B*58:01阳性及阴性标本均相同,阳性标本147例,阴性标本1011例,该组患者HLA-B*58:01基因携带率为12.69%,两种方法符合率为100%（1158/1158）,两组实验结果数据采用SPSS分析P=1.000,差异无统计学意义。所有受检者HLA-B* 58:01携带率为12.69 % （147 /1158）。结论：双通道TaqMan实时荧光PCR可以作为一种快速、特异、灵敏的HLA-B*58:01的基因检测方法,用于别嘌呤醇用药前的相关不良反应风险评估。     

Ki-67在基底细胞样型乳腺癌中的诊断价值

目的分析细胞增殖抗原Ki-67与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体(human epidermal growth factorreceptor-2,HER-2)在乳腺癌表达的相关性,探讨Ki-67在基底细胞样型乳腺癌和非基底细胞样型乳腺癌的表达与临床病理特征的关系。方法选取65例女性浸润性乳腺癌标本,其中包括27例基底细胞样型乳腺癌,38例非基底细胞样型乳腺癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学技术检测Ki-67、ER、PR、HER2在乳腺癌的表达。结果 65例乳腺癌中,Ki-67表达与ER、PR呈负相关,与HER2无相关性。在基底细胞样型乳腺癌组织中,Ki-67在细胞核强阳性表达。基底细胞样型乳腺癌与非基底细胞样型乳腺癌比较,Ki-67表达与组织学分级相关,组织学分级越高,Ki-67表达越强。结论 Ki-67可能参与基底细胞样型乳腺癌的发生发展,对预后评价有重要的参考价值。