黑龙江省大庆市第二医院肝炎科

流行性斑疹伤寒是普氏立克次体通过体虱为媒介而传播的一种急性传染病。临床特征表现为起病急。持续高热、头的一种急性传染病。临床特征表现为起病急。持续高热、头痛、皮疹及神经系统中毒迁延合并肺炎。心肌炎等愈后不良。下面将我院近年来收治4例流行性斑疹伤寒的观察及护理介绍如下：     

微量免疫酶染色检测斑疹伤寒IgM、IgG抗体

本文介绍了微量免疫酶染色(Micro-IP)检测斑疹伤寒IgM、IgG抗体的方法,Micro-IP与临床诊断的符合率为78.9%。IgM抗体早于第四病日阳性,第一周阳性率达76.2%,适于早期诊断。检测IgG抗体适于流行病学调查。Micro-IP检测免疫兔及患者血清抗体为群特异性(对普氏及莫氏立克次体均反应)。     

非洲钝缘蜱传播精河株斑点热立克次体的途径

非洲钝缘蜱(Ornithodoros moubata)叮咬感染精河株斑点热立克次体的豚鼠后45-52天,再叮咬正常豚鼠,可使后者感染。除个别蜱外,受精的感染雌蜱第一次产的卵(吸感染血后10—19天产出)和1龄稚蜱均为阴性。间隔.1个月又喂以正常豚鼠血,这些蜱第二次的吸血率、产卵数和卵的孵化率都明显降低,但从第二次六的卵和1龄稚蚌压印片中均查见大量立克次体。经卵传递率60%,子代感染率59%(6-100%)。     

普氏立克次体的组织培养II．培养普氏立克次体单层细胞的选择

本文报告了从9种组织培养中选出3种,即鼠胚皮肌细咆、鼠胚肺细胞及Detroit-6传代细胞均能使普氏立克次体发育良好。较详细地描述了此病原体在这些细胞中生长繁殖的规律,并发现其在传代细胞中增殖高峰时,能使受染细胞产生特异性的形态学变化。进一步证明普氏立克次体在细胞中的生长特点是在胞浆内繁殖,在组织培养中不能长期传代。     

用胰酶消化法浓缩纯化恙虫病立克次体

用不同感染材料和方法进行了浓缩纯化恙虫病立克次体的试验。结果证明以0．25％的胰蛋白酶消化感染鸡胚卵黄囊膜,可获得形态完整的立克次体;浓缩纯化的立克次体保持活性;用于补体结合试验,抗原滴度可达1：128。经冰冻干燥保存后,仍能保持其形态的完整性。     

黑龙江立克次体的血清学及分子生物学研究

本文应用血清学方法和分子生物学技术,从不同角度探讨与比较ＳＦＧ立克次体种间的差异,为黑龙江立克次体的分类鉴定提供依据。ｍｉｃｒｏ—ＩＦ、ＩＥ及ｍｉｃｒｏ－ＢＡＰＳ试验表明,黑龙江立克次体的血清反应模式和国际参考株及国内分离株不同,具有独特的抗原结构。进一步应用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和免疫印迹分析,该立克次体结构多肽的数量与分子量和其它立克次体有明显差别,并具有两种特有的主要抗原多肽（２１５ＫＤ与６６ＫＤ）,提示在抗原结构上的差异性。ＤＮＡ限制片段分析证明该立克次体的酶切图谱有明显的特征性,易与己知斑点热毒株相鉴别。研究结果表明,黑龙江立克次体可能是ＳＦＧ立克次体一新的血清型式种。对人的致病力需进一步研究。     

禽分枝杆菌对豚鼠的致病性分析

【背景】我国禽型结核菌素(avian tuberculin)的制造用菌株为CVCC 68201、CVCC 68202和CVCC 68203株,但目前仍未明确这3株菌的生物学特性及对豚鼠致病性的情况。【目的】探究禽分枝杆菌(Mycobacterium avium)的生物学特性及对动物机体的致病性,为禽结核病和牛结核病的防控工作提供技术支撑。【方法】对3株禽分枝杆菌基因组进行鉴定分析及核酸相似度分析;用3株禽分枝杆菌分别感染豚鼠,观察感染后的临床症状、病理学变化、体重增重情况分析、皮内变态反应结果、脏器系数变化等,进而分析3株禽分枝杆菌对豚鼠的致病力。【结果】种型鉴定和进化分析结果表明,CVCC 68201、CVCC 68202和CVCC 68203均为禽分枝杆菌,基因组与Mycobacterium avium subsp. avium FDAARGOS_1608最为相近;在感染前期、中期、后期对3株禽分枝杆菌感染豚鼠的体重增重情况分析发现,感染禽分枝杆菌影响豚鼠增重,主要表现为生长迟缓,感染第5周时,CVCC 68201、CVCC 68202组豚鼠的平均体重明显轻于未感染组;皮内变态反应试验结果显示,感染CVCC 68201组豚鼠的皮肤红肿面积明显大于其他2个感染组,CVCC 68201可引起机体更为强烈的迟发型变态反应;3株禽分枝杆菌感染后,豚鼠脾脏和肺脏存在不同程度的肿大与出血,其中感染CVCC 68201豚鼠的肺脏系数与未感染组相比差异显著(P<0.01);病理学观察结果显示,豚鼠肺脏可见不同程度病变,其中CVCC 68201组更为严重,表现为肿大和轻微出血。各感染组豚鼠肺脏和脾脏组织切片抗酸染色均可见红色的分枝杆菌散在浸润。【结论】3株禽分枝杆菌对豚鼠均有一定程度的致病性,可引发局部病变。本研究为禽分枝杆菌的制备和鉴定提供依据,也为牛结核病的鉴别诊断方法研究提供参考。     

恙虫病立克次体补体结合抗原的研究

本文介绍应用兔睾丸单层细胞制备恙虫病立克次体补体结合抗原的方法,并初步探讨了影响鸡胚卵黄囊膜抗原效价的一些因紊。鸡胚卵黄囊膜抗原产量大、效价高、特异性较好。但有些恙虫病立克次体株在鸡胚中不易繁殖。而在组织培养中很易繁殖,第一代即能获得大量立克次体,有利于同时制备多株恙虫病立克次体抗原。本文同时介绍了制备豚鼠及家兔免疫血清的简便方法。     

痢疾T32与伤寒Ty21a两价菌株的组建

用体内重组的方法,将经过多次现场考核,证明安全有效的痢疾T32无毒株和伤寒Ty21a无毒株,用前者作给体后者作受体,以两步法组建成一株既具痢疹福氏2a抗原特性又保持伤寒Ty21a株特性的两价菌株。经猴体免疫力试验,在对照组全部发病的情况下,能保护80％的免疫猴免于感染菌痢;以c,H系小鼠做免疫力试验,能保护伤寒毒菌的感染。该菌株经实验室传30代仍保持稳定,豚鼠角膜毒力试验无炎症反应,以400亿活菌口饲猴体,对101人,每人口服15 7—200亿活菌,均未发现不良反应,是一株有希望的菌苗候选株。     

胶体金渗滤法检测贝氏柯克斯体的研究

本文建立一种快速、敏感、适于基层应用的贝氏柯克斯体（俗称Ｑ热立克次体）的检测方法。将Ｑ热立克次体多克隆抗体点于硝酸膜上,用以捕获待检标本中的Ｑ热立克次体抗原,通过胶体金标记的鼠抗Ｑ热立克次体单克隆抗体直接显色,阳性者出现红色斑点。结果表明,用该法检测Ｑ热立克次休实验感染豚鼠血液,小鼠肝或脾,蜱血淋巴等标本取得了较满意的结果,整个过程仅需５－６分钟。与其他病原体无交叉反应,敏感度不低于５０ｎｇ立克次     

斑点热群立克次体的PCR／SSCP分型技术研究

本文应用PCR／SSCP技术对斑点热群立克次体国际标准株、国内各参考株及黑龙江立克农作54株、36株进行了分型鉴定。结果显示各株之间SSCP图谱差异明显,国内各参考株的SSCP,图谱与西伯利亚立克次体的图谱完全一致,黑龙江立克次作的图谱与国内各株显著不同。分析表明,我国存在2种斑点热群立克次体,即西伯利亚立克农作种和斑点热群立克次体新种－黑龙江立克次体。同时证明应用PCP／SSCP技术分析斑点热群立克农作型别,具有方法简单、经济省时、结果准确等优点。该分型技术应用于立克次体分型国内外未见报道。     

普氏立克次氏体经鼻腔感染小白鼠后肺中产生干扰秦的初步观察

小白鼠经鼻腔感染普氏立克次氏体后,在肺组织的上清液体中能够获得一种干扰素。它对乙醚有抵抗力且不能透析;每分钟16,ooo转的离心速度尚不能使它沉淀。酸透析和碱透析以及60~C 30分钟均不能使其受到破坏。但可受到0．01％胰蛋白酶的破坏。这种干扰素对于普氏立克夹氏体和牛痘苗病毒有干扰作用,例如它能使普氏立克次氏体在家觅皮内所引起的反应推迟、减轻和反应过程的缩短;在鼠肺中的繁殖受到一定的抑制;受到普氏立克次氏体感染的脉鼠的发烧期略短,体重减轻略少,而血清中的补体结合抗体却低于对照组(未经过干扰素处理)豚鼠血清的4倍。     

痢疾杆菌杂交株的生物学及免疫学特性

以大肠杆菌HfrC为给体,福氏志贺氏痢疾杆菌Fa．1、Fs．2、F3,4、F。2404为受休,分别杂交 得到六株痢痰杆菌杂交株,与其原始株及两株铰链株进行了生化、血清、药敏、繁殖力、侵袭力、免疫力等生物学及免疫学特性的比较。发现HF,。2-3,Hfu 4—17二杂交株与痢疾毒株在乳鼠肠道内具有不同程度的繁殖力,此点与两株依链株不同,后者在乳鼠肠道内不能繁殖。经毒力试验表明,HE38 2-3与HF38 4-17株的小白鼠LD,。剂量分别为2．5×10,,2,0×10,,而其相应原 始菌株Fs-2,F384分别为4×104．2．7 x10’,杂交株高于原始菌株;将上述二杂交株以5×10。 菌体接种豚鼠角膜,未引起炎症反应;二者均不侵入HeLa细胞,结果同依链株类似。经豚鼠角膜免疫力试验证明,HF38 4—17与HF38 2—3株均可使免疫豚鼠角膜产生对同型毒菌F38 75株攻南白免疫力,尤以HF38 4—17株曲杯．     

人工感染羊嗜流产衣原体豚鼠流产模型的建立

目的通过人工感染怀孕豚鼠建立嗜流产衣原体发病模型,观察流产病理学变化的差异,确定豚鼠是否可以作为嗜流产衣原体的动物模型。方法35只清洁级怀孕40d的豚鼠随机分为7组,每组5只。将羊嗜流产衣原体分离株B10011、CG1株分别以三个剂量组（10^-1,10^-2,10^-3）腹腔攻毒1次,每只0．5mL,以灭菌生理盐水为阴性对照。攻毒后观察豚鼠的临床体征、流产和死亡数量。攻毒后20d安乐死处理剩余的大小豚鼠,无菌摘取组织,分成2份。一份-20℃冷冻保存,PCR检测病原在组织中的分布;另外一份固定于10％中性甲醛溶液,组织切片和免疫组化观察。结果（1）羊嗜流产衣原体分离株B10011和CG1均可造成怀孕豚鼠流产、产弱胎、畸形胎或死胎。2种分离株感染不同剂量造成豚鼠平均流产时间、流产数量、豚鼠死亡数量均有显著差异,且CG1株敏感性高于B10011株。（2）2个分离株均可造成肾脏、肝脏肿大,肺脏呈局灶性出血,卵巢出血坏死,胎盘子宫阜水肿;病理组织学显示肾小管上皮细胞变性、坏死,单核细胞大量增生;肝细胞颗粒样病变。脾髓质弥漫性出血,皮质区淋巴小结生发中心萎缩。（3）免疫组化结果显示衣原体包涵体主要分布于肾脏近曲小管、远曲小管,以及脾脏的髓质区。（4）PCR检测显示分离株感染后,肾脏、脾脏、肺脏、肝脏中均呈阳性。在卵巢组织中,高剂量组呈阳性。结论以B10011和CGl分离株人工感染怀孕豚鼠均可导致豚鼠出现流产,且CG1分离株敏感性较高,呈剂量一效应关系;感染豚鼠病理学变化与临床羊流产相似。因此,人工感染豚鼠流产模型可以用于反刍动物嗜流产衣原体病的研究。     

狂犬病病毒Vero细胞适应株3aG-V的致病性和免疫原性

狂犬病病毒3aG—V株是3aG—5在vero细胞适应的毒株,对其在小鼠、豚鼠、家兔、犬的不同感染途径的致病性,小鼠、豚鼠、兔子上的免疫原性进行研究,同时进行纯毒及在中枢神经系统中能否形成尼氏小体试验,结果表明：狂犬病病毒3aG—V株潜伏期较长,在动物脑内不形成尼氏小体,为固定毒,其在实验动物上具有较弱的致病性和较好的免疫原性,可作为纯化Vero细胞狂犬病疫苗的生产用疫苗株。     

恙虫病立克次体弱毒株的毒力及免疫原性的研究

本文比较了三株(“49”株、“l(J5”株、浙三联)从自然界分离或经人工减毒处理的恙虫病立克次体弱毒株的毒力和免疫原性。从实验结果证明,三株恙虫病立克次体对小白鼠的毒力都较一般从病人分离的菌株弱。三株中以“49”株的毒力最低,它对小白鼠的LD50<10-1.00LD50与ID50相差2．5--5．5个对数。用“49”株免疫后的小白鼠能耐受从广东、福建,云南等地分离的强毒株的攻击,保护指数大于三个对数。     

胆道感染和深部脓肿中无芽胞厌氧菌的分离和鉴定

近年来,国外时无芽胞厌氧菌的研究非常重视。许多资料指出,无芽胞厌氧菌能使所有的器官和组织发生感染,引起各种类型的疾患,已成为主要的内流性感染的病原菌之一。我们从1980年以来,自胆道感染和深部脓肿病人的检材中,分离出8株无芽胞厌氧菌。做了形态学观察,生化反应和药物敏感性试验。其由胆道感染病的十二指肠引流中分得5株,经鉴定有了3株属Veillonella,1株为 B.fragilis,另1株为 Peptostreptococcus。此外,由脑脓     

立氏立克次体外膜蛋白H基因片段的克隆表达与免疫原性分析

目的：克隆表达立氏立克次体（Rickettsia rickettsii）外膜蛋白H基因（ompH）片段并对其进行免疫原性分析。方法：采用PCR技术从立氏立克次体基因组中扩增ompH基因片段,将该基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组原核表达质粒pET32a/ompH;将pET32a/ompH转入大肠杆菌细胞内,用IPTG诱导转化大肠杆菌表达目的基因。结果：获得长为327bp的ompH基因片段,SDS-PAGE分析发现pET32a/ompH转化菌表达了大小约27kDa蛋白,该蛋白与立氏立克次体免疫豚鼠血清及斑点热患者血清在免疫印迹分析中呈阳性反应,经该重组蛋白免疫血清中和后的立氏立克次体感染VERO活力减低。结论：pET32a/ompH转化的大肠杆菌表达了ompH基因片段,所产生的重组蛋白具有良好的免疫反应性及保护性。     

立氏立克次体外膜蛋白H 基因片段的克隆表达与免疫原性分析

目的:克隆表达立氏立克次体(Rickettsia rickettsii)外膜蛋白H基因(ompH)片段并对其进行免疫原性分析。方法:采用PCR技术从立氏立克次体基因组中扩增ompH基因片段,将该基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组原核表达质粒pET32a/ompH;将pET32a/ompH转入大肠杆菌细胞内,用IPTG诱导转化大肠杆菌表达目的基因。结果:获得长为327bp的ompH基因片段,SDS-PAGE分析发现pET32a/ompH转化菌表达了大小约27kDa蛋白,该蛋白与立氏立克次体免疫豚鼠血清及斑点热患者血清在免疫印迹分析中呈阳性反应,经该重组蛋白免疫血清中和后的立氏立克次体感染VERO活力减低。结论:pET32a/ompH转化的大肠杆菌表达了ompH基因片段,所产生的重组蛋白具有良好的免疫反应性及保护性。     

非洲钝缘蜱感染Q热立克次体敏感度的测定

Q热立克次体以10^-1—10^-12不同稀释度,用血腔注射法感染非洲钝缘蜱,感染35天,取蜱血淋巴液,分别用Gimenez染色法及免疫荧光技术检查,在10^-1—10^-5的稀释度,两种方法检出率基本相似。10^-6以下各组,免疫荧光尚可检出少数阳性标本,而Gimcnez法则无阳性,前者总阳性率为48.28%,后者为40.68%。感染的蜱悬液接种豚鼠,12组动物血清做Q热补体结合试验全部阳性。动物发病情况如潜伏期长短、发烧天数等似与蜱内立克次体的含量有关。