建兰与纹瓣兰种间杂种胚培养研究

采用人工授粉的方法,以‘小桃红’建兰为母本、纹瓣兰为父本进行杂交,获得了种间远缘杂交后代植株。杂交果苹与母本自交果荚的大小差异大小,但鲜重明显大于母本,果荚内的种子量却少于母本。杂种胚离体培养90d出现绿色原球胚,210d可萌发出大量植株;而‘小桃红’自交种子培养210d只形成少量绿色根状茎。杂种胚的萌发具有杂种优势,不仅萌发快,而且出苗率高,萌发时先形成原球胚,原球胚上长出大量小根毛,继而形成大量假鳞茎,假鳞茎经转瓶培养后,分化形成大量健壮植株,分化率高。     

建兰和秋兰原球茎的发生及其无性系的建立

本试验采用建兰[Cymbidium ensifolium(L.)SW.]大一白品种和秋兰[Cymbidium ensifolium (L.)CV.Qulan]为实验材料,切取茎尖或侧芽的分生组织,用W培养基,诱导原球茎形成。然后将原球茎培养在MS或W的液体培养基中,形成丛生形原球茎并能继续不断增殖生长,建立无性繁殖系。在丛生形原球茎增殖过程中不断分化出具芽和根的小植株。将小植株切下,培养在MS基本培养基上,待植株达3～4叶时即能转入盆栽。从原球茎开始增殖起不到一年就可出现具有花器官的植株,这些植株中,从小植物形成到花朵完全开放,时间最短的约只2个月。     

报岁兰×春兰杂交种的种子萌发

植物名称;报岁兰(Cymbidium goermgii)×春兰(Cymbidium Sinense)杂交种。材料类别:未成熟的报岁兰×春兰的种子蒴果。培养条件:蒴果浸入70％酒精中表面消毒1分钟,然后在无菌条件下用解剖刀切开,把白色毛状种子置于Kundsonc培养基上,放到25±1℃培养室中,每天2000lx白光灯照射8小时。生长与分化情况:接种后,种子在培养基上逐渐吸水膨胀。3个月后,部分种子萌发出绿色小原球茎,以后大部分种子逐渐萌发。诱导出的原球茎及     

兰花远缘杂交育种技术研究

选择了兰科六个属的兰花为试材,并以兰属的六个种为重点进行远缘杂交育种技术研究,培育出了四个杂交种试管苗。结果表明:建立兰花资源圃是杂交育种的基础,种间杂交结实较易而属间杂交较难,种子萌发是杂交育种的技术关键,选用适当培养基是种子无菌萌发的有效途径。     

中国兰的组织培养

就中国兰组织培养中的形态建成 ,培养基和激素等因素与外植体诱导、种子非共生萌发、原球茎和根状茎的增殖及分化的关系 ,以及中国兰组织培养中存在的问题作了介绍。     

云南莲瓣兰主栽品种SSR指纹图谱的构建和遗传差异分析

为了解云南莲瓣兰(Cymbidium tortisepalum)的遗传多样性,利用SSR技术对32个莲瓣兰主栽品种进行遗传变异分析,并构建莲瓣兰栽培品种的指纹图谱。结果表明,筛选出的12对多态性高、稳定性好的引物共检测到95个等位基因,每对引物检测到4~18个等位基因,有效等位基因数(N E)为61.489,平均有效等位基因数(NA)为5.124,Shannon信息指数(I)和多态性信息含量(PIC)分别为0.806~2.624和0.789~0.953。12对引物中,以引物SSR03的等位基因数、NE、观测杂合度、I和PIC最高。32个品种在12对引物上都具有不同的特异性条带,可以彼此区别。从12对引物中筛选出3对核心引物SSR02、SSR03和SSR12构建了莲瓣兰主栽品种SSR分子指纹图谱,这3对核心引物组合即可鉴定32个莲瓣兰栽培品种。这为莲瓣兰的品种鉴定、遗传多样性分析和分子育种研究提供理论基础和技术支持。     

大花蕙兰'红酒'× 莲瓣兰'边草素花' 杂交种组培快繁技术

该研究以大花蕙兰‘红酒''(Cymbidium hybridum ‘hongjiu'')×莲瓣兰‘边草素花''(C. tortisepalum ‘biancaosuhua'')F1代杂交种原球茎和根状茎为材料,比较了不同激素配比增殖分化、生根的培养基,建立了适用杂交兰组培快繁体系。结果表明:1/2MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 1.0 mg·L^-1+AC 0.05%+香蕉80 g·L^-1对原球茎增殖效果最佳,增殖率达到307%; 1/2MS+6-BA 1.5 mg·L^-1+NAA 1.0 mg·L^-1 +AC 0.05%+香蕉80 g·L^-1有利于原球茎分化,分化率为82%; 1/2MS+TDZ 2.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+AC 0.05%+香蕉80 g·L^-1对根状茎增殖分化效果最佳,增殖率为293%,分化率为79%; 1/2MS+IBA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.3 mg·L^-1+AC 0.05%+香蕉80 g·L^-1为最佳生根培养基,生根率达到84.7%,且根粗苗壮,叶色浓绿。此体系为杂交兰种苗的规模化生产提供了技术支持。     

几种同域分布姜花属植物的种间杂交亲和性

种间配子不亲和以及种间杂交种子活力低是众多的物种间杂交隔离机制中的两个方面。通过对云南澜沧地区分布的4种（型）姜花属植物——圆瓣姜花（Hedychium forrestii）、草果药(Hspicatum)、两类型滇姜花（Hyunnanense）间进行野外杂交试验,比较杂交结实率、每果种子数以及杂交种子的萌发参数等指标来分析4种（型）姜花之间的杂交亲和性和杂交后代表现,发现4种（型）姜花属植物配子间都具有不同程度的亲和性,但种间杂交种子的萌发适合度比同种授粉获得的种子低。结果表明,这4种（型）姜花属植物间配子亲和性不是有效的种间隔离机制,种间杂交种子活力低是一种不完全的隔离机制,它们在同域分布的地区,仍然有形成杂交后代的可能性。     

几种同域分布姜花属植物的种间杂交亲和性及杂交后代种子活力

种间配子不亲和以及种间杂交种子活力低是众多的物种间杂交隔离机制中的两个方面。通过对云南澜沧地区分布的4种（型）姜花属植物——圆瓣姜花（Hedychium forrestii）、草果药（H.spicatum）、两类型滇姜花（H.yunnanense）间进行野外杂交试验,比较杂交结实率、每果种子数以及杂交种子的萌发参数等指标来分析4种（型）姜花之间的杂交亲和性和杂交后代表现,发现4种（型）姜花属植物配子间都具有不同程度的亲和性,但种间杂交种子的萌发适合度比同种授粉获得的种子低。结果表明,这4种（型）姜花属植物间配子亲和性不是有效的种间隔离机制,种间杂交种子活力低是一种不完全的隔离机制,它们在同域分布的地区,仍然有形成杂交后代的可能性。     

不同荷花品种出泥部分与根状茎生长性状和部分生理指标的比较及相关性分析

在盆栽条件下,对不同荷花(Nelumbo nucifera Gaertn.)品种〔藕莲品种'大紫红'('Dazihong')、花莲品种'中国红·上海'('Zhongguohongshanghai')和花藕兼用莲品种'逸仙莲'('Yixianlian')〕出泥部分(叶和花)和泥下部分(根状茎)的生长性状和部分生理指标进行了比较研究,并对3个荷花品种出泥部分与根状茎间的生长性状和部分生理指标进行了相关性分析.结果表明:'大紫红'在整个生长发育期不开花;'中国红·上海'开花时间相对较早(6月上旬),花重瓣且色泽鲜艳;'逸仙莲'开花时间相对较晚(7月上中旬),花单瓣呈白色.3个荷花品种中,'大紫红'立叶数最少,立叶面积最大,根状茎膨大明显,根状茎中可溶性糖和可溶性蛋白质含量最高;'中国红·上海'立叶数最多,立叶中叶绿素含量最高,根状茎节间长度最长,但根状茎膨大不明显;'逸仙莲'立叶数居中,叶柄最长,根状茎膨大明显,根状茎中可溶性蛋白质、可溶性糖、淀粉和维生素C含量介于其他2个荷花品种之间.相关性分析结果表明:荷花立叶面积与根状茎节间长度呈显著负相关,而与根状茎中可溶性糖、可溶性蛋白质及维生素C含量呈极显著或显著正相关;叶柄长度与根状茎直径和根状茎节间质量呈显著正相关;立叶中叶绿素含量与根状茎节间长度和根状茎中淀粉含量呈显著正相关,而与根状茎中可溶性糖含量呈显著负相关.研究结果显示:根据供试3个荷花品种的立叶面积、叶柄长度、立叶中叶绿素含量可间接判断根状茎的生长发育及营养品质状况,并可进一步应用于快速选育花藕兼用莲品种.     

硬叶兰种子的迁地共生萌发及有效共生真菌的分离和鉴定

兰科植物的种子原地和迁地共生萌发技术是近年发展起来的开展兰科植物种子和共生真菌研究的有效方法。该研究对兰属(Cymbidium)附生植物硬叶兰(C. mannii)开展了种子的迁地共生萌发研究, 试图获得其种子萌发的有效真菌。利用硬叶兰成年植株根部周围的树皮、苔藓、枯枝落叶、腐殖质等作为培养基质, 进行种子的共生培养。在培养133天后, 成功地获得了处于不同阶段的已萌发种子、原球茎和幼苗, 并从原球茎中分离得到一种瘤菌根菌属(Epulorhiza)真菌。用所分离到的FCb4菌株和一种从兜唇石斛(Dendrobium aphyllum)分离到的胶膜菌属(Tulasnella) FDaI7菌株和硬叶兰种子在燕麦琼脂培养基上进行共生萌发, 设置不接菌作为对照处理, 以检验FCb4菌株对硬叶兰种子萌发的有效性。经过58天的培养, 不接菌的对照处理中种子没有萌发, 接种FCb4和FDaI7菌株的处理都有很高的种子萌发率, 两种接菌处理在不同光照条件下的种子萌发率均无显著性差异。但暗培养条件下, 种子萌发形成原球茎后, 表现出生长停滞的趋势, 仅有很少的原球茎继续生长达到幼苗阶段, 说明原球茎发育后期与幼苗发育阶段需要光照。在光照条件下, 接种FCb4菌株处理中达到幼苗阶段种子的比例为(25.67 ± 9.27)%, 显著高于接种FDaI7菌株处理的(3.04 ± 2.27)% (W = 56, p = 0.026, Mann-Whitney U-test), 表明此研究中分离到的瘤菌根菌属真菌能有效地促使硬叶兰种子萌发并生长发育到幼苗阶段。     

亚美万代兰与多花兰种子发芽过程的扫描电镜观察

兰种子发芽之后形成原球茎与根状茎,前者以亚美万代兰,后者以多花兰为材料进行扫描电镜观察。多花兰种子发芽初期,与亚美万代兰相似,但分化子叶的能力较差,在暗培养下,只形成鳞片状叶,紧贴在根状茎的分生组织上。根状茎只有转入光培养才有茎叶分化。兰种子发芽时的毛状物,在电子显微镜下观察,其形态与根毛较接近。     

多花兰种子无菌萌发及离体快繁研究

以多花兰种子为材料,研究了无机盐浓度、植物生长调节剂和光照条件对多花兰种子非共生萌发的影响,在此基础上,通过研究原球茎增殖和分化、芽苗壮苗和生根的培养基配方及培养条件,建立多花兰组培快繁技术体系.结果表明:多花兰种子萌发培养基为1/6 MS十NAA0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg· L-1+马铃薯泥50g·L-1+AC 1.0g·L-1,光照度为1.25μmol·m-2·s-1,萌发率63.6％;原球茎增殖继代培养基为1/4 MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg· L1+AC 1 g·L-1+PE 200 g·L-1,繁殖倍数6.5倍/60 d,芽分化率60.2％;再生芽分化培养基为1/4 MS十6-BA2.0mg·L-1+NAA 0.2 mg· L-1+AC 1 g·L-1+PE 200g· L-1,繁殖倍数4.0倍/60 d,芽分化率85.0％;芽苗壮苗和生根培养基为1/6 MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+AC 1 g·L-1+蔗糖20g·L-1 +PE 200 g·L-1和1/4 MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA1.2 mg·L-1+AC1 g·L-1十蔗糖20g·L-1+PE200g· L-1,生根率达100％,生根苗移栽成活率90％.此技术可用于多花兰种苗繁育和种质资源保护.     

In situ seed baiting to isolate germination-enhancing fungi for an epiphytic orchid,Dendrobium aphyllum (Orchidaceae)

Orchid conservation efforts, using seeds and species-specific fungi that support seed germination, require the isolation, identification, and germination enhancement testing of symbiotic fungi. However, few studies have focused on developing such techniques for the epiphytes that constitute the majority of orchids. In this study, conducted in Xishuangbanna Tropical Botanical Garden, Yunnan, China, we used seeds of Dendrobium aphyllum, a locally endangered and medicinally valuable epiphytic orchid, to attract germination promoting fungi. Of the two fungi isolated from seed baiting, Tulasnella spp. and Trichoderma spp., Tulasnella, enhanced seed germination by 13.6 %, protocorm formation by 85.7 %, and seedling development by 45.2 % (all P?Epulorhiza, another seed germination promoting fungi isolated from Cymbidium mannii, also enhanced seed germination (6.5 %; P?P?Trichoderma suppressed seed germination by 26.4 % (P?Tulasnella was the only treatment that produced seedlings. Light increased seed imbibition, protocorm formation, and two-leaved seed development of Tulasnella inoculated seeds (P?Tulasnella be introduced for facilitating D. aphyllum seed germination at the protocorm formation stage and that light be provided for increasing germination as well as further seedling development. Our findings suggest that in situ seed baiting can be used to isolate seed germination-enhancing fungi for the development of seedling production for conservation and reintroduction efforts of epiphytic orchids such as D. aphyllum.     

天麻种子与小菇属真菌共生萌发的研究*

Four fungal species of Mycena were identificated from the strains isolated from the protocorm and roots of Orchidaceae species.M anoectochial was isolated from the Proocorm of G.elata, M orchidicola, M.dendrobii and M anoectochila respectively separated from the roots of Cymbidium sinense, Dendrobium candidum and Anoectochilus roxburghii. The symbiotic germination test beteen G. Elata seeds and the above fungal species demonstrated that these flingal species can stimulate the seed germination, Which means t…     

利用RAPD 技术分析云南兰属部分种的种间关系

采用RAPD 技术对云南兰属的11 个种和3 个变种中的39 个样本进行了相似性分析。在相似系数0. 58 水平上, 大花亚属的虎头兰、西藏虎头兰、长叶兰和碧玉兰聚为一支; 建兰亚属的寒兰、墨兰、蜜蜂兰、蕙兰、春兰、豆瓣兰、春剑、莲瓣兰和送春聚为另一支, 兔耳兰与大花亚属关系更近。春剑和莲瓣兰相似性更高, 它们与春兰的关系较远, 不支持送春作为蕙兰下的变种。这些结果可为开展兰属育种提供重要参考价值。     

莲瓣兰形态变异研究

莲瓣兰是分布于云南西北部、四川西南部和台湾的濒危兰花.本研究采用引种不同种群的莲瓣兰栽培在相同环境中的植株为实验材料,测定其形态性状并进行统计计算,分析莲瓣兰种群之间的形态变异以及亲缘关系.巢氏方差分析结果显示,莲瓣兰19个表型性状居群间方差百分比为22.162%,居群内方差百分比为77.838%,莲瓣兰形态变异主要来源于居群内;聚类分析显示保山施甸(SD),大理云龙形态(YL)较为接近,春剑贵州兴隆(XL)居群形态与莲瓣兰各居群差别较大,距离较远.研究结果可为莲瓣兰的类群划分、良种选育及野生资源的保护提供基础数据.     

墨兰共生真菌一新种的分离、培养、鉴定及其生物活性

在对产于云南西双版纳的热带兰花菌根进行研究时,发现一分离自墨兰的菌株,菌丝纯白色,具典型的锁状连合,对其子实体的鉴定表明该菌株代表着一新分类单位——兰小菇Mycena orchidicola Fan et Guo sp.nov.同时,对该新种在兰科种子萌发中的作用作了初步探讨,结果表明该菌可侵入兰科种子,促进种子萌发。     

Endophytic fungi from Pecteilis susannae (L.) Rafin (Orchidaceae), a threatened terrestrial orchid in Thailand

Eight endophytic fungi were isolated from roots of the threatened terrestrial orchid, Pecteilis susannae (L.) Rafin. Phylogenetic analysis based on an alignment of internal transcribed spacer regions of nuclear rDNA indicated that seven isolates belonged to the genus Epulorhiza and one to Fusarium. All fungal isolates were cultured with orchid seeds collected from three field sites near Doi Suthep-Pui National Park, Chiang Mai, Thailand. Seed germination and protocorm development were evaluated up to 70 days after sowing. Percent symbiotic seed germination was highest (86.2%) when seeds were cultured with Epulorhiza (CMU-Aug 013). The protocorm development was the most advanced up to stage 2, continued embryo enlargement, or rupture of the testa, and the highest percentage was 17.8% when seeds were cultured with Epulorhiza (CMU-Aug 007). Without fungi, seed germination and protocorm development were 62.1% and 11.1%, respectively. The dependency of P. susannae on fungal symbionts for early seedling development is yet to be determined. Optimizing seed germination and seedling fitness will assist the conservation of this threatened orchid in Thailand.     

天麻种子萌发过程中与其共生真菌石斛小菇间的相互作用

天麻Gastrodiaelata种子与石斛小菇Mycenadendrobii的共生萌发试验表明,石斛小菇可与天麻共生,促进天麻种子发芽并形成原球茎。菌丝主要分布于原球茎的柄状细胞、外皮层细胞和内皮层细胞,在外皮层细胞中形成菌丝结,内皮层细胞中的菌丝则被消化。原球茎细胞中的菌丝均被电子透明物质和原球茎细胞质膜包围而与原球茎细胞质相隔离,菌丝进一步液泡化并最终被水解。含有衰败菌丝的原球茎细胞常被菌丝重新定殖。这一菌丝被消化及菌丝的重新定殖过程在整个原球茎发育过程中可不断重复发生。