β-1,6葡聚糖酶前体编码基因Ss4p对甘蔗黑穗病菌分泌蛋白组的影响

甘蔗(Saccharum spp.)是世界也是中国主要的糖料作物.由甘蔗黑穗病菌(Sporisorium scitamineum)引起的甘蔗黑穗病是中国甘蔗生产上最主要的病害,每年造成重大损失.分泌蛋白在真菌侵染寄主植物与获取营养及病理过程起重要作用.本实验室在分析甘蔗黑穗病菌基因组与转录组数据时,发现1个与真菌细胞壁降解有关的β-1,6葡聚糖酶前体的基因Ssa4p.为了揭示Ssa4p对甘蔗黑穗病菌致病性和分泌蛋白组的影响,本研究利用CRISPR/Cas9和T-DNA双元载体所构建的甘蔗黑穗菌基因敲除系统,成功获得了Ssa4p基因的失活突变株.ΔSsa4p突变株(Δ35-Ssa4p)与野生型菌株JG36的配合能力降低且致病性减弱.用iTRAQ方法对Δ35-Ssa4p和野生型菌株的分泌蛋白组进行比较分析,共鉴定到蛋白质1430个,其中上调差异表达蛋白质685个,下调差异表达蛋白质745个.GO功能富集分析及KEGG分析表明,差异蛋白主要定位于无膜细胞器和核糖体,其功能包括参与核糖体、氨基糖和核苷酸糖代谢等生物学过程.本研究发现β-1,6葡聚糖前体影响植物病原真菌的分泌蛋白,加深了对真菌致病性调控机制的认识.     

甘蔗鞭黑粉菌侵染甘蔗的早期可视化观察

【目的】甘蔗鞭黑粉菌(Sporisorium scitamineum)引起的甘蔗黑穗病是我国甘蔗生产重要的病害。示踪甘蔗鞭黑粉菌侵染甘蔗的过程将有助于揭示其致病性和甘蔗抗黑穗病机制,为抗病品种的选育以及黑穗病的防治奠定基础。【方法】利用农杆菌介导的遗传转化技术对甘蔗鞭黑粉菌进行黄色荧光标记,对转化子进行配合及致病力检测,将标记菌株接种甘蔗感病品种ROC22及抗病品种中蔗1号、中蔗6号和中蔗9号并进行早期可视化观察。【结果】组成型表达的eYFP不影响标记菌株的配合及致病能力,而且黄色荧光性状能通过冬孢子稳定遗传。激光共聚焦显微观察表明,注射接种病原菌第5天,在感病品种ROC22的生长点已可见荧光菌丝及少量聚集状菌丝体,在抗病品种中蔗1号、中蔗6号和中蔗9号中可见少量单一丝状菌丝,无聚集状菌丝体。接种后35 d,在ROC22中可见大量聚集状菌丝体,但在中蔗品种中的聚集状菌丝体明显较少,而以中蔗1号最少。【结论】成功构建了甘蔗鞭黑粉菌侵染甘蔗的荧光示踪系统,并发现中蔗系列品种存在抑制甘蔗鞭黑粉菌菌丝体在细胞间扩展的机制。     

新生儿医院感染49例分析

本文以新生儿医院感染肺炎为重点进行临床分析及讨论。１９９３年１０月～１９９５年４月,共收集医院感染肺炎４９例,占同期住院病人２．７８％。其中足月儿３７例,早产儿１２例。平均住院均在两周以上,诊断院内感染者均从事痰培养、病房空气及医护人员手培养,并进行病毒检测。痰培养结果致病菌以Ｇ－杆菌为主,条件致病菌为球菌与杆菌并存。空气培养在重病监护室有条件致病菌生长同时,还有大肠杆菌生长。医护人员洗手前培养以大肠杆菌多见,而Ｇ＋球菌洗手前、后比较无差异。病毒检测多见合胞病毒,其次为流感及腺病毒。而腺病毒阳性者病情重,并均伴Ⅱ型呼衰。本文对医院感染发病因素及防治措施进行了讨论。     

带有报告基因的板栗疫病菌寄生隐赤壳分泌表达突变体库的构建及分泌缺陷突变体的筛选

丝状真菌分泌蛋白与其致病性密切相关,目前对于病原真菌的蛋白胞外分泌途径及其调控机制的报道不多。为建立一个方便高效的真菌分泌蛋白调控途径的遗传研究体系,本研究以植物病原丝状真菌——板栗疫病菌寄生隐赤壳Cryphonectria parasitica为对象,选取分泌表达量最高的两个分泌蛋白的信号肽SP1和SP2,分别构建带有GUS报告基因的分泌蛋白表达载体pCPXBle-SP1-GUS和pCPXBle-SP2-GUS并用于转化板栗疫病菌。选择高效分泌GUS蛋白的转化株SP1-9为出发菌株,利用农杆菌介导的遗传转化技术构建了T-DNA插入突变体库,从576个突变体中筛选到2株GUS分泌表达明显降低的突变体。本研究成功构建了可用于研究丝状真菌蛋白分泌的遗传研究体系,并筛选获得了分泌蛋白缺陷突变体,为深入研究丝状真菌分泌途径及其调控机制奠定了基础。     

广谱抗生素应用对小婴儿肠道微生态的影响

目的 :探讨抗生素对小婴儿肠道微生态的影响 ,评价便涂片法监测小婴儿肠道菌群变化的可行性。方法 :对 3 0例应用广谱抗生素治疗的 3个月以下小婴儿 (试验组 )及 3 2例同年龄正常儿 (对照组 ) ,用便涂片直接镜检法进行肠道菌群的初步分析和监测。结果 :应用抗生素 3～ 15d,试验组革兰阴性杆菌比例明显下降 ,革兰阴性杆菌生长受抑制 ,革兰阳性球菌渐表现出优势生长。因此 ,对应用抗生素的患儿应尽早应用微生态制剂调整肠道菌群。结论 :应用便涂片直接检菌法可帮助临床医生初步判定小婴儿肠道菌群的变化情况 ,简便、经济、实用     

新生儿败血症临床分析

目的 探讨新生儿败血症病原学变化特点。方法 通过两组败血症的临床表现、发病因素、感染途径、血培养结果及药敏结果进行临床分析。结果 Ⅰ组病因与围产期高危因素相关。临床表现以体温不升、拒奶、反应差及多脏器功能受损有关。而Ⅱ组病因以皮肤感染、肺炎及颅内感染为多见,临床特点以中毒性脑病为突出。两组血培养结果提示：Ⅰ组以Ｇ＾－杆菌为主,特别是大肠杆菌极为多见。Ⅱ组以金黄色葡萄球菌多见（３２．２％）,耐苯唑青霉素的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）两组均有存在。条件致病菌以Ⅱ组多见。药敏两组比较结果显示：对青霉素、氨苄青霉素耐药,对丁胺卡那霉素、头孢类抗生素高度敏感。结论 加强围产期高危儿检测及新生儿感染性疾病诊治,是减少新生儿败血症发生的重要措施。随着致病菌的变化,含β内酰胺抑制剂的抗生素敏感性高。     

板栗疫病菌ntl基因的功能研究

板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)是引起板栗疫病的病原真菌。在实验室前期研究中,获得了一个不支持病毒复制且丧失致病力的板栗疫病菌紫外诱变突变株UV57。与野生型菌株EP155相比,UV57中检测不到蛋白100472的表达。为研究蛋白100472的功能,我们构建了编码100472蛋白的ntl基因的缺失突变体△ntl及其互补转化株△ntl-com。与野生型EP155相比,△ntl菌株表型不变,但对休眠板栗树枝的致病性明显降低,而互补转化株△ntl-com的致病力与野生型没有区别。ntl基因的缺失不影响低毒病毒CHV1-EP713的复制累积量,但导致参与G蛋白信号传导途径的cpga1、cpgb1、cpgc1和ste12基因以及参与MAPK途径的cpmk1转录水平明显下调。本研究结果为阐明病原真菌致病机制提供了新的知识。     

三芒山羊草中新型储藏蛋白基因Avenin-like的克隆及分析

目的:克隆三芒山羊草(Aegilops neglecta)中新型avenin-like基因,揭示avenin-like基因的表达模式,并对克隆的基因进行相关的分析.方法:利用RT-PCR的方法揭示avenin-like基因的表达模式,并用PCR方法从三芒山羊草中克隆新型的ave-nin-like基因.结果:avenin-like基因在胚乳中特异性表达;克隆得到新型的avenin-like基因;avenin-like基因属于醇溶蛋白超基因家族,含19个半胱氨酸残基、形成8对分子内二硫键和3对分子间二硫键.结论:新型avenin-like基因的克隆为小麦品质改良提供了很好的基因资源.     

不同施钾时期对红富士苹果产量和品质的影响

通过大田试验研究了钾肥不同施用时期对红富士苹果产量、品质、钾肥利用效率及叶片和果实养分含量的影响.结果表明:与对照(不施钾)相比,增施钾肥显著提高了苹果产量4.3%~33.2%,且具有明显改善果品质量的作用.与100%钾基施相比,膨大期施钾处理(50%基施+50%膨大期施、50%花后施+50%膨大期施、100%膨大期施)苹果产量显著增加20.5%~27.7%,果品质量亦有所改善.50%基施+50%膨大期施和50%花后施+50%膨大期施钾处理在苹果增产和改善品质的基础上,明显提高了果园的钾肥利用效率,并维持了果实生长周期中叶片钾含量的相对稳定,为树体钾素的持续供应提供了保障.然而,50%花后施+50%膨大期施钾处理果实钙含量显著下降,不利于果实后期贮藏.综合考虑,50%基施+50%膨大期施为果园钾肥施用的最佳时期.     

蛇苔过氧化物酶基因的序列分析与功能预测

过氧化物酶在生物界分布极广,在细胞代谢的氧化还原过程中起重要的作用.为深入研究蛇苔过氧化物酶的理化性质及功能,对其同源性,亚细胞定位,结构和功能等进行了生物信息学预测和分析.结果表明;该序列有1 050 bp长的开放阅读框,编码349个氨基酸,与拟南芥等的POD相似性较高(相似性为71％).预测R68、F71、H72、...