蝉虫草菌丝体胞内和胞外多糖抗肝细胞氧化损伤比较研究

蝉虫草（蝉花）作为我国传统的中药材,是一种药食两用的虫生真菌,因含有丰富的活性物质而具有广泛的医疗保健价值。本研究以自由基清除率为指标分析蝉虫草胞内和胞外多糖的化学抗氧化活性,再以H₂O₂诱导的人肝LO2细胞氧化损伤为模型,进而分析比较二者对肝细胞氧化应激损伤的改善作用。结果表明,在化学抗氧化能力比较上,蝉虫草菌丝体胞外多糖有效清除?OH自由基、ABTS自由基和DPPH自由基的EC₅₀值分别为1.06mg/mL、0.96mg/mL和0.63mg/mL,而胞内多糖的EC₅₀值分别为3.71mg/mL、2.83mg/mL和1.70mg/mL,表明蝉虫草胞外多糖的化学抗氧化能力更强;在改善细胞氧化应激损伤比较上,与模型组对比,二者均能随着浓度递增而显著地提高细胞存活率,但胞外多糖比胞内多糖更强,当多糖浓度为5mg/mL时,胞外多糖细胞存活率达到92.36%,胞内多糖只达到82.07%;在调节细胞抗氧化酶清除ROS的机制上,与模型组对比,胞外多糖分别上调SOD酶活力2.51倍和CAT酶活力2.91倍,极显著地降低了细胞ROS水平（P<0.01）来改善细胞的氧化应激损伤作用。相应地,胞内多糖只上调了1.85倍和2.33倍,显著性地清除了ROS（P<0.05）,表明蝉虫草菌丝体胞外多糖具有更显著的抗肝细胞氧化损伤作用。本研究结果显示蝉虫草菌丝体胞外和胞内多糖均具有良好的抗肝氧化损伤活性,且胞外多糖比胞内多糖活性更好,为蝉虫草菌丝体多糖在保肝产品中的开发和应用提供了科学依据。     

复方中草药对罗氏沼虾碱性磷酸酶（AKP）和血清蛋白的影响

为了探究中草药添加剂对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)免疫功能的影响,以罗氏沼虾为对象,在水温20～30℃、pH 7～8的试验条件下,往饲料中分别添加质量分数为0%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%的复方中草药制剂,连续饲喂25 d。结果显示:随着饲料中复方中草药质量分数的提高,罗氏沼虾的生长指标、血清中碱性磷酸酶(AKP)活性、血清蛋白含量均呈现先上升后下降的趋势,试验组相较于对照组有很大提高;中草药质量分数的提高引起的血清中蛋白含量的提高远远大于肌肉中蛋白的含量,在各试验组中2.5%的复合中草药制剂的添加量效果最好。试验证明,添加复方中草药制剂对罗氏沼虾的免疫活性、生长性能均有明显的促进作用。该结果能够为罗氏沼虾的健康养殖提供基础资料。     

棉铃虫不同虫态及虫龄血淋巴中酚氧化酶活力的比较

分别测定了棉铃虫Helicoverpa armigeraHübner不同虫态及虫龄血清和血细胞中酚氧化酶(phenoloxidase,PO)的活力。结果显示血清和血细胞中都有酚氧化酶活性,且血细胞中高于血清中。不同虫态及虫龄的血清和血细胞中酚氧化酶活力有很大的不同,血清和血细胞中酚氧化酶活力变化规律一致。3龄幼虫酶活力最高,5龄幼虫最低。酶活力大小依次为:3龄幼虫>预蛹>4龄幼虫>蛹>5龄幼虫     

虾头提取物对凡纳滨对虾生长和免疫因子的影响

以添加不同量虾头提取物(0、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)的饲料投喂初体质量为6.35±0.38 g的凡纳滨对虾49 d,研究其对对虾的生长及免疫因子的影响。各组凡纳滨对虾的生长及体成分组成没有显著差异。与对照组相比,1.5%~3.0%添加量组对虾血清中的ACP活力明显提高;2.0%~3.0%添加量组对虾血清中的AKP活力明显提高;各添加量组对虾血清中的PO活力都有明显提高。实验结果表明,添加适当剂量的虾头提取物可以增强凡纳滨对虾的免疫能力。     

紫外分光光度计法与酶标仪微量法测定酚氧化酶蛋白含量及活力的比较

分别采用紫外分光光度计比色法与酶标仪微量法测定菜青虫Pieris rapae(L.)体内酚氧化酶蛋白含量和活力,以水杨醛缩对硝基苯胺为抑制剂,对2种方法的结果进行比较。结果表明,微量法和比色法在检测酚氧化酶(PO)蛋白含量、酶活力和抑制剂对PO抑制作用时结果无显著性差异。因此,微量法可以替代比色法,使用试剂量大大降低,重复性好,操作简单、快捷。     

酚氧化酶参与德国小蠊对大肠杆菌的免疫应答

【目的】探讨酚氧化酶(phenoloxidase, PO)在德国小蠊Blattella germanica对大肠杆菌Escherichia coli的免疫响应中的作用。【方法】利用同源克隆和RACE方法获得德国小蠊酚氧化酶基因（BgPO）的全长cDNA序列,用MEGA5.1软件构建BgPO与其他昆虫PO的系统进化树,用RT-PCR方法检测BgPO的组织表达模式及大肠杆菌诱导后不同时间的表达量变化,用Hultmark 方法测定抑菌活力,用邻苯二酚法测定酚氧化酶活性。【结果】获得的德国小蠊BgPO基因（GenBank登录号：KJ789157）cDNA全长为2 252 bp,其中开放阅读框大小为2 085 bp,编码695个氨基酸,预测的分子量和等电点分别为79.7 kDa和6.19。Blast分析结果表明德国小蠊BgPO与其他昆虫PO有较高的同源性,其中与白蚁Coptotermes formosanus PO的氨基酸序列一致性高达80%;系统进化树分析显示其与C. formosanus PO的亲缘关系最近。基因表达检测结果表明BgPO主要在血淋巴细胞和表皮中表达。大肠杆菌诱导德国小蠊后,发现BgPO的表达量在诱导24 h后升高,在诱导后36 h达到峰值;其血淋巴的抑菌活力及酚氧化酶的活性在诱导后6-36 h内均随着诱导时间的增加而增加,且菌诱导组与PBS诱导组之间存在显著差异(P<0.05)。【结论】本研究获得的德国小蠊酚氧化酶基因BgPO主要在血淋巴和表皮中表达,并参与了大肠杆菌诱导的免疫应答反应。研究结果为进一步探索酚氧化酶在德国小蠊对病原菌的免疫响应机制奠定基础。     

海洋红酵母多糖提取及其对日本蟳血清中部分免疫活性因子的影响

以海洋红酵母为材料, 通过化学抽提法得到多糖, 用经典的Sevag 法进行脱蛋白处理, 经多级沉淀得到纯糖并采用硫酸-蒽酮法测得其中葡萄糖含量; 考马斯亮蓝法分析蛋白质含量。以定量海洋红酵母多糖人工注射日本蟳, 注射等量生理盐水为对照, 定时测定其血清中部分免疫活性因子的活性; 实验表明: 提取多糖为蛋白多糖, 其中葡萄糖含量为3.6%, 蛋白质含量1.9%, 含有多种氨基酸, 其中天冬氨酸含量最多; 注射后12 h 日本蟳血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD) 活力达到最高, 酸性磷酸酶(ACP) 活力在注射后24 h 达到最高, 碱性磷酸酶(AKP) 48 h 达到最高, 过氧化氢酶(CAT) 48 h 达到最高, 溶菌酶(LZM) 12 h 即达到最高, 最高点分别高于对照组24%、43%、25%、35%、95%; 72 h 后都恢复至对照组水平。结论: 海洋红酵母多糖注射48 h 内日本蟳体内免疫活性因子均有不同程度的提高, 对日本蟳有较强免疫刺激作用。     

蛹虫草MF27菌糠多糖对肝细胞氧化损伤的保护作用

蛹虫草是一种可利用大米、小麦等谷物培育的名贵药用真菌,其采收后的菌糠里仍富含许多生物活性物质。本研究立足于蛹虫草菌糠多糖,先分析其化学抗氧化活性,再以H₂O₂诱导氧化应激损伤的LO2细胞为模型,评价其对肝细胞氧化损伤的保护作用,进而解析活性多糖的单糖组分。结果显示,菌糠多糖能够有效清除DPPH自由基、羟基（?OH）自由基和ABTS自由基,EC₅₀分别为0.26mg/mL、1.03mg/mL、0.57mg/mL,提示其具有良好的抗氧化能力;在H₂O₂诱导氧化应激损伤的LO2细胞中,菌糠多糖能有效地保护细胞形态的完整性,并且随浓度梯度递增式地提高细胞存活率,当多糖浓度为5mg/mL时,细胞存活率可达91.83%;在分析其作用机制上,与模型组对比,菌糠多糖能通过调节细胞抗氧化酶SOD（提高4.91倍）和CAT（提高3.40倍）的表达来清除ROS含量（P<0.01）,降低氧化损害;经检测,虫草菌糠活性多糖主要含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、木糖、半乳糖醛酸、鼠李糖和岩藻糖等单糖。研究结果表明蛹虫草MF27菌糠多糖具有保护肝细胞氧化损伤的作用,为进一步开发和利用虫草菌糠提供了重要理论依据。     

细虫草胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能研究

本实验在体外条件下,以人工发酵培养的细虫草胞外多糖OgE、OgE-F1和OgE-F2作用于小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,通过测定其对巨噬细胞的增殖率、代谢MTT活力、NO分泌和吞噬能力的影响,评价细虫草胞外多糖的免疫调节活性。结果表明,细虫草多糖对巨噬细胞无细胞毒性,且能促进巨噬细胞代谢MTT活力;在0.2mg/mL^1.0mg/mL浓度范围内,多糖呈剂量依赖性的促进巨噬细胞分泌NO水平和吞噬能力。本研究表明,细虫草多糖能有效地增强小鼠巨噬细胞的活性,潜在地可改善小鼠的先天性免疫调节。     

发酵豆粕替代鱼粉和豆粕对罗氏沼虾生长、血清生化及免疫基因表达的影响

为研究发酵豆粕在罗氏沼虾饲料中的适宜用量及替代后可能造成的影响, 以含有30%鱼粉和18%豆粕的饲料为基础饲料(T0组), 分别用2% (T2组)、5% (T5组)、8% (T8组)、15% (T15组)的发酵豆粕等蛋白替代基础饲料中的鱼粉和豆粕(2﹕1), 共配制5种等氮等能的实验饲料。选用初始均重为(0.17±0.02) g的罗氏沼虾在室内水泥池网箱中进行为期64d的养殖实验。结果显示, 发酵豆粕对鱼粉和豆粕的替代量影响罗氏沼虾的生长、血清生化及免疫基因表达。随着发酵豆粕添加量的增加, 增重率和特定生长率呈先升后降的趋势, 都以T8组最高。血清中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力随发酵豆粕添加量的增加均呈先升后降的趋势, 各替代组丙二醛含量均显著高于对照组(P<0.05); 血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性和总蛋白含量呈先下降后上升的趋势, 且替代组不同程度低于对照组; T15组Toll受体、NF-κB、HSP70转录水平表达量显著高于其他各组(P<0.05)。以上结果表明用不同水平的发酵豆粕替代鱼粉和豆粕, 显著影响罗氏沼虾的生长性能、抗氧化能力及免疫机能; 在实验条件下, 罗氏沼虾饲料中的发酵豆粕最佳使用量为8%。     

云芝多糖及其注射剂的稳定性研究

作者对云芝多糖和云芝多糖注射剂进行了影响因素试验,加速试验和室温留样考察,结果表明,二者具良好的化学稳定性。     

红海藻多糖的提取和结构研究

本文报道了从红海藻中分离提取出水溶中性多糖,经纯化和鉴定得单—木聚糖,其一级结构测定结果表明,此多糖为直链结构,以β(1—3)木糖残基连接.构象研究结果表明,该多糖具有三股螺旋结构.     

艰难梭菌荚膜致病作用的初步研究

本文在我室先前研究的基础上,以3株艰难梭菌的荚膜多糖提取物、全菌悬液以及全菌免疫血清分别在小鼠中进行半数致死量和保护试验等动物实验,以探讨艰难梭菌荚膜的致病作用。结果测得其中一株艰难梭菌的荚膜多糖对小鼠有致死毒性,其LD50为2.83mg,特异性抗血清保护试验证实艰难梭菌免疫血清对动物有保护作用。实验结果可能为进一步研究艰难梭菌荚膜的致病作用提供了参考资料。     

半枝莲多糖的分离、纯化及其理化性质

唇形科植物半枝莲全草的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析得纯品半枝莲多糖(S-BP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。SBP的比旋度为[α]_D~(20)=+26.2°,不含氮,分子量13000,具有890cm~(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,SBP含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其克分子比为1.14:1.50:0.20:0.75:1.0:2.18。     

冷热两种方法提取的褐藻硫酸多糖促双歧杆菌增殖效果的比较

目的 比较褐灌硫酸多糖（冷提取物ＳＰＣ和热提取物ＳＰＨ）对青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌性外促增殖效果。方法 选用ＢＳ培养基,采取度管法。结果 在实验深度下。ＳＰＣ和ＳＰＨ对两种双歧杆菌增殖均有明显的促进作用。其活菌数,实验组与对照组比,有显著性和非常显著性差异（Ｐ〈０．０５,Ｐ〈０．０５,Ｐ〈０．００１）,且呈量效关系。ＳＰＨ促菌增殖效果优于ＳＰＣ,当浓度为０．５％和１．０％时,具有显著性差异（Ｐ〉     

银耳孢子多糖的分离和分析

由固体培养法得到的中国福建产银耳孢子(Tremella fuciformis Berk.),经沸水提取、三氯醋酸-正丁醇除蛋白、乙醇沉淀分离制备的多糖具有明显提高机体免疫功能的作用。应用CTAB(溴化十六烷基三甲胺)络合法进一步精制后的银耳孢子多糖干品,含糖量达80％左右。经纸层析,醋酸纤维素薄膜电泳及琼脂糖电泳分析表明,其主成分为单一斑点。组成分析发现分子中富含己糖醛酸,主要组成单糖有木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、阿拉伯糖及葡萄糖醛酸等。组成中不含蛋白和核酸类物质。红外光谱分析证明,分子中具有典型酰基结构。     

寡糖及多糖甲基化方法的发展及现状

本文综述了在寡糖、多糖结构分析中应用的各种甲基化方法及近年来有关的最新进展,并对它们各自的优、缺点进行了比较。     

地生枝顶孢胞外多糖的理化性质和结构初步分析

报道分离自地生枝顶孢Acremonium terricola RCEF0260菌株发酵滤液中的胞外多糖EPS-Ia的理化性质和一级结构。EPS-Ia分子量为416kD,至少含有D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖、D-木糖,各单糖摩尔比为4.46: 0.24: 2.38: 0.90: 0.19。糖醛酸含量为27.4%。硫酸基含量0.92%、蛋白质含量2.23%。氨基酸组成分析显示:EPS-Ia中含有17种常见氨基酸。EPS-Ia为型吡喃糖,含有1→3糖苷键,1→6糖苷键及1→2糖苷键,其中的糖肽键是N-糖苷键。     

多型炭角菌的培养及多糖提取

多型炭角菌在4%葡萄糖,1%蛋白胨,250mL三角瓶装培养液80mL,pH6.5,25℃的培养条件下生长最好,发酵终点为168小时。正交试验得到K+, Mg2+,Ca2+, Zn2+, Fe2+, Mn2+和Cu2+等金属离子的最适浓度分别为0.15%, 0.03%, 0.05%, 0.0015%, 0.001%, 0.00005%和 0.0002%。对培养得到的菌丝体进行多糖提取,得到2种粗多糖:X-1(水溶性多糖)和X-2(碱溶性多糖);从发酵液提取的粗多糖为X-3。经Sephadex G-100和 Sephadex G-150凝胶柱层析,收集、合并的单一峰位部分经聚丙烯酰胺凝胶电泳及纸层析均呈现为单一斑点。多糖酸水解后均能与茚三酮显色,蛋白质组成分析表明其分子中富含16种氨基酸。     

艰难梭菌荚膜多糖单糖组成的气相色谱分析

本文对两株艰难梭菌（ＣｄＡ３１８和ＣｄＣＤＣ２７９）荚膜多糖进一步分析,结果证实纯化的艰难梭菌荚膜多糖为单一均匀的物质;经气相色谱分析表明,其单糖组分主要由Ｄ－葡萄糖、Ｄ－甘露糖和Ｄ－半乳糖组成,不同菌株的荚膜多糖可能有微小差异。