白花蛇舌草中熊果酸的含量测定

目的:建立白花蛇舌草中熊果酸的含量测定方法.方法:薄层扫描法.结果:熊果酸在948～4 740 ng范围内有良好的线性关系,Y=1 519.107 3.449X,r=0.998.结论:本方法简便,可靠,精密度高,稳定性好,能快速测定白花蛇舌草中熊果酸的含量,可用于白花蛇舌草及其制剂的质量控制.     

白花蛇舌草提取物诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡

为探究白花蛇舌草提取物对人胃癌MKN-45细胞凋亡的影响.用不同浓度的白花蛇舌草提取物处理MKN-45细胞,然后在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下观察数量和形态.流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-qPCR和Western Blot检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平.结果表明,不同浓度的白花蛇舌草提取物处理48 h后,在显微镜下观察到细胞体积缩小、细胞核裂解和染色质形态变化.细胞凋亡率随着药物浓度的增加而增加,用30 μg/mL白花蛇舌草提取物处理后细胞凋亡率达到23.6％,Bax基因表达水平显著增加,Bcl-2基因表达水平显著降低.综上所述,白花蛇舌草提取物可诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡,具有潜在的医学和药用价值.     

白花蛇舌草连作土壤元素含量分析

目的:以未栽培白花蛇舌草、栽培一茬白花蛇舌草和栽培二茬白花蛇舌草大田土壤为研究对象,分析白花蛇舌草连作对土壤无机元素含量的影响.方法:用电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP)测定土壤中Al、As、Cd、Co、Cu、Fe、Hg、Mg、Mn、Na、Ni、Pb、Sr、Zn等元素的含量,并与国家标准作比较.结果:随着白花蛇舌草连作年限的增加,土壤中除Na元素和Sr元素表现出富集外,其他元素的含量无明显变化.结论:白花蛇舌草对土壤无机元素无偏好性吸收.     

不同提取方法对豫产白花蛇舌草多糖及抗氧化活性的影响

为评价不同提取方法对河南地区白花蛇舌草粗多糖的得率、总碳水化合物含量、杂质含量和抗氧化活性的影响,本实验分别以传统热水提取法、超声波辅助提取法、纤维素酶提取法从该药材中提取多糖。同时测定了粗多糖中总碳水化合物含量、杂质含量(总蛋白和总酚含量)以及羟基自由基清除能力、DPPH自由基清能力、还原力等抗氧化能力。实验结果显示三种提取法所得粗多糖相对于原药材的得率分别为6.77±0.09%、6.37±0.01%和4.81±0.90%;粗多糖中的总碳水化合物含量分别为289.14±1.33、246.83±2.33和278.92±2.92mg/g。粗多糖中总蛋白含量分别为28.59±2.21、23.26±2.43和4.96±0.18mg/g,总酚类成分含量分别为5.9±0.08、5.31±0.40和2.82±0.07mg/g。抗氧化活性实验结果表明,三种粗多糖的羟基自由基清除能力呈现出浓度依赖性,且均在3.0mg/mL时达到最大,对应最大清除率分别为89.13%、85.87%和74.71%。另外,三种粗多糖的DPPH自由基清除率分别在0.75~3.0mg/mL的浓度区间内达到最大并保持稳定,对应清除率的稳定区间分别为77.02%~77.90%、77.06%~77.96%和83.16%~85.73%。综上所述,以上三种不同提取方法对白花蛇舌草多糖的品质影响较大,可以为豫产白花蛇舌草的品质鉴别、多糖质量控制和开发利用提供依据。     

白花蛇舌草对人胃癌细胞MNK-45线粒体膜电位及凋亡相关基因表达的影响*

目的: 探讨白花蛇舌草(注射液)对人胃癌细胞MNK-45线粒体膜电位及凋亡相关基因表达的影响。方法: 将人胃癌细胞MNK-45分成4组,每组设置3个复孔,对照组为未加入白花蛇舌草的MNK-45细胞,3组实验组分别加入终浓度为20、30、40 μg/ml白花蛇舌草的MNK-45细胞,各组在5％的CO₂培养箱中孵育48 h后,利用激光共聚焦显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位,qRT-PCR检测Cytochrome C (Cyt c)、caspase3和caspase9基因的表达变化,Western blot检测Cytochrome C (Cyt c)、caspase3和caspase9蛋白的表达变化。结果: 与对照组相比,终浓度为20、30、40 μg/ml的各白花蛇舌草处理组,其MNK-45细胞的线粒体膜电位均明显降低(P＜0.01),Cyt c、caspase3和caspase9的基因表达均明显上调(P＜0.01)、蛋白表达也均显著升高(P＜0.05或 P＜0.01),40 μg/ml的白花蛇舌草处理组的表现最佳。结论: 在终浓度为20~40 μg/ml的范围内,白花蛇舌草能够降低人胃癌MNK-45细胞线粒体膜电位, 诱导细胞凋亡,并可上调Cyt c、caspase3和caspase9基因表达。     

白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌T-47D细胞株生长的抑制作用

目的：观察白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌细胞T-47D生长的影响。方法：采用平皿克隆形成实验、软琼脂集落形成实验和BrdUrd（溴脱氧尿苷）掺入实验,观察不同浓度的白花蛇舌草醇提取物（1.0μg/mL,3.0μg/mL,10μg/mL,30μg/mL,100μg/mL）对T-47D细胞锚定依赖性生长和软琼脂集落形成能力及核酸合成的抑制作用。结果：①随着白花蛇舌草醇提取物浓度的升高,对T-47D细胞的生长呈现明显抑制作用;②白花蛇舌草醇提取物可呈浓度依赖性抑制对数生长期T-47D细胞核酸合成。结论：白花蛇舌草醇提取物可能通过影响肿瘤细胞核酸合成而抑制T-47D细胞生长。     

白花蛇舌草对人胃癌MKN-45细胞周期的影响

为了寻找能抑制肿瘤细胞增殖的药物,本研究探讨了不同浓度白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)对人胃癌MKN-45细胞的影响,使用不同浓度的白花蛇舌草处理人胃癌MKN-45细胞24 h、48 h、72 h,共聚焦显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期,qRT-PCR和Western blotting检测CCNB1和CCND1的表达水平。结果表明,在一定浓度范围内,白花蛇舌草可抑制人胃癌MKN-45细胞增殖且呈剂量时间依赖性;白花蛇舌草处理人胃癌MKN-45细胞24 h、48 h、72 h后的IC50值分别为111.759μg/mL、26.878μg/mL、16.179μg/mL;随着白花蛇舌草的浓度增加,显微镜视野下细胞数量减少;G1期细胞减少,S期细胞增多;CCNB1和CCND1基因表达水平显著降低。白花蛇舌草能能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖,阻滞细胞于S期,降低CCNB1和CCND1基因的表达。     

基于分子和形态学证据确定传统中药白花蛇舌草及其替代品的学名(英文)

白花蛇舌草是我国重要的传统中药,主要是指茜草科(Rubiaceae)钮扣草族(Spermacoceae)的Oldenlandia diffusa,但伞房花耳草(O.corymbosa)在民间或中药市场也常被作为替代品使用。由于长期以来Hedyotis-Oldenlandia复合群的分类存在许多争论,因此白花蛇舌草有时被归入非洲耳草属(Oldenlandia L.),有时又作为广义耳草属(Hedyotis L.s.l.)的成员。为了澄清白花蛇舌草命名上的问题,基于7个叶绿体片段和2个核基因片段对钮扣草族85个分类群进行了系统发育分析。结果表明,白花蛇舌草不属于以上两属中的任何一属,而应为蛇舌草属[Scleromitrion(WightArn.)Meisn.]的成员。依此结果,对5种植物进行了新组合,并提供了白花蛇舌草和伞房花耳草的形态学比较,以有助于在实践中更好地进行区分。     

白花蛇舌草种子发芽及化感部位的研究

目的:研究白花蛇舌草种子发芽的最佳条件及化感部位。方法:采用正交实验寻找种子发芽的最佳条件,用生物工程技术研究不同部位对种子萌发的影响。结果:白花蛇舌草种子在25℃,24 h、20%的光照强度,采用机械破碎贮藏12个月发芽率最高,并且光照强度的变化对种子发芽的差异具有显著性;白花蛇舌草提取液中醇提组、水提组、乙酸乙酯组均存在化感作用。结论:寻找到白花蛇舌草种子发芽的最佳条件,白花蛇舌草化感作用可能是多组分共同作用的结果。     

白花蛇舌草叶片离体培养及试管无性系的建立

以白花蛇舌草叶片为材料,建立了白花蛇舌草叶片高效不定芽发生、植株再生体系。研究了不同激素及其组合对外植体不定芽发生的效应。结果显示,在MS基本培养基中单纯添加6BA,当6BA浓度为0.1mg/L和0.5mg/L时,不能诱导离体叶片发生不定芽,6BA浓度在1.0～5.0mg/L范围内,诱导率随BA浓度升高而增加,适宜浓度为3.0mg/L;当6BA与NAA配合使用时,其诱导率随着培养基中6BA与NAA的相对比值的提高而提高;以MS+BA3mg/L+NAA0.01mg/L作为继代培养基,建立起白花蛇舌草高效、稳定的试管无性系,为白花蛇舌草遗传转化研究奠定了基础。     

草果多糖的含量测定

目的：为了充分利用草果资源,减少资源浪费,研究草果多糖含量的测定.方法：利用热水浸泡充分提取草果多糖,并用Sevag法脱蛋白法将其提纯,然后进行草果多糖含量的测定.结果：样品多糖的含量测得为0.312％,回收率为97.14％,RSD =0.827％ （n =5）.结论：广西贵港草果中含有一定的多糖,且该方法操作简便,准确,可靠,可作为检验草果多糖含量的较好方法.     

乌梅丸水提液中多糖理化性质分析及预防结肠炎的作用

目的:考察乌梅丸水提液中多糖含量,建立HPLC法分析乌梅丸多糖分子量及单糖组成方法,观察其对右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)所致小鼠溃疡性结肠炎(UC)的预防作用,为乌梅丸临床用药及药理活性成分的研究提供依据。方法:采用水提醇沉法提取多糖;硫酸-苯酚法测定乌梅丸多糖含量;凝胶色谱法-龙智达分子量工作站测定多糖分子量;PMP柱前衍生化法HPLC分析单糖组成;DSS(3%)法建立UC小鼠模型。ICR小鼠50只随机分为5组:正常组,模型组,乌梅丸多糖2.5%,5%,10%剂量组,每组10只。造模前7天,在乌梅丸多糖治疗各组的小鼠饮水中添加乌梅丸多糖,一直给药维持至实验结束(第14天)。结果:葡萄糖在0~0.08 mg·m L-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.998);右旋葡聚糖酐标准品分子量在2500~2000000 Da范围内呈良好线性关系(r=0.998);乌梅丸水提液中多糖含量为40.3%,纯化的乌梅丸多糖糖含量为91.6%;分子量范围在171343~525009 Da之间,分布系数D=1.18;其多糖的单糖组成主要为甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和木糖组成,其相对含量比为1.8:1.0:19.3:32.8:4.2;乌梅丸多糖能降低结肠组织损伤程度。结论:多糖可能是乌梅丸汤剂中有效的活性成分,对小鼠UC有一定的防治作用,其理化性质分析方法简便快速,结果准确,重复性好,可作为乌梅丸多糖的质量控制方法。     

聚酰胺树脂分离纯化芦荟多糖的研究

文章采用聚酰胺吸附树脂,采用水、0．2M／LNaCl溶液、5％NaOH水溶液为洗脱剂梯度洗脱分离纯化,得到了三个芦荟多糖组分,通过IR、UV、GC等手段对其进行了分析。以甘露糖为标准,采用硫酸．苯酚法,测得水洗和NaOH水溶液洗脱所得多糖含量分别为90．10％和93．28％;以木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖为单糖标准的GC分析结果显示：水洗所得多糖主要以甘露糖为主,同时含有少量的葡萄糖。     

Revisiting the effect of water content on enzymatic peptide synthesis in non-aqueous medium

Enzymatic acyl-transfer reaction in organic medium competes with the hydrolytic side reaction depending on the water content. The effect of water content on aminolysis activity of -chymotrypsin for the synthesis of Bz-Tyr-Val-NH₂ in acetonitrile was examined under the conditions which were devoid of the hydrolytic deacylation. Excess H-Val-NH₂ (880 mM) was employed to keep the hydrolysis negligible. The aminolysis rate increased abruptly between 4 and 5% (v/v) water but a further increase in the water content did not affect the reaction rate. This suggests that water added more than 5% (v/v) does not enhance intrinsic enzyme activity but acts only as a nucleophile for the hydrolytic deacylation.     

Bio-drying of municipal solid waste with high water content by aeration procedures regulation and inoculation

To improve the water content reduction of municipal solid waste with high water content, the operations of supplementing a hydrolytic stage prior to aerobic degradation and inoculating the bio-drying products were conducted. A 'bio-drying index' was used to evaluate the bio-drying performance. For the aerobic processes, the inoculation accelerated organics degradation, enhanced the lignocelluloses degradation rate by 10.4%, and lowered water content by 7.0%. For the combined hydrolytic-aerobic processes, the inoculum addition had almost no positive effect on the bio-drying efficiency, but it enhanced the lignocelluloses degradation rate by 9.6% and strengthened the acidogenesis in the hydrolytic stage. Compared with the aerobic processes, the combined processes had a higher bio-drying index (4.20 for non-inoculated and 3.67 for the inoculated trials). Moreover, the lowest final water content occurred in the combined process without inoculation (50.5% decreased from an initial 72.0%).     

杏鲍菇菌丝体水溶性多糖提取及培养条件优化

以马铃薯葡萄糖综合培养基(PDP)为基础培养基,采用正交试验法优化杏鲍菇菌丝体多糖发酵条件,对接种量、摇床转速和培养时间等因素对多糖含量的影响进行了研究。采用水提醇沉法提取多糖,苯酚—浓硫酸法进行多糖含量测定。结果表明,最佳培养条件:接种量为每瓶1块直径为1cm的菌块,转速为140r/min,培养时间为8d。此时杏鲍菇菌丝体多糖含量最高,为75.1mg/g。     

灰树花多糖的提取及抗氧化活性

采用单因素和正交试验法对热水浸提、超声波辅助和微波辅助提取灰树花多糖的工艺进行研究,分别获得了3种方法的最佳条件,并发现微波辅助法最佳,其最优条件为:微波功率800 W、微波时间3 min,浸提2h,多糖得率为13.05％,比热水浸提法提高了51.22％.利用提取的灰树花多糖进行抗氧化性研究,发现灰树花多糖对O2-·和·OH都具有一定的清除作用,且多糖浓度与其对O2-·的清除作用存在量效关系,但不如·OH明显.     

检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量ELISA法的建立

目的建立双抗体夹心ELISA法,对A群流脑多糖抗原进行特异性定量测定。方法制备抗A群多糖的特异性多克隆抗体,所得抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记多克隆抗体。分别以抗A群多糖多克隆抗体作为包被抗体及酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对A群多糖抗原进行特异性定量测定。结果一系列验证试验表明,该法特异性较好,未检出与C、Y、W135群多糖的交叉反应;1.25～20 ng/mL多糖浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.98,经实验内10次及不同试验间以16、84、ng/mL测定3次A群多糖中的含量,变异系数在6.3%～11.5%间,回收率在91.8%～105.9%之间,符合常规质控要求,检测限量为4 ng/mL。采用该法测定3批ACYW135群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量、分子大小及回收率的结果均符合规程草案质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可尝试用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖的关键质量指标的检测。     

微波辅助提取灰树花多糖工艺研究

采用提取时间、微波功率、液料比的单因素试验和正交试验法优化微波辅助提取灰树花多糖条件.结果表明,以净多糖得率为指标,影响微波辅助提取灰树花多糖的主次因素为:提取时间＞微波功率＞液料比,并且提取时间和微波功率的影响达到了极显著水平.灰树花多糖最佳提取工艺条件为:提取时间为10 min,微波功率为80%(全功率为800 W),液料比为25∶1.创立了一种用苯酚-硫酸法测定多糖时排除蛋白质干扰的方法.