OMgp不同结构域在抑制神经突起生长中的作用

OMgp(oligodendrocyte-myelin glycoprotein)是一种在中枢神经系统表达的GPI连接的糖蛋白。最新发现,它具有诱使生长锥溃变和抑制神经突起再生的作用,这一作用是通过与nogo-66等神经再生抑制因子竞争结合同一受体NgR而实现的。但其相互作用的确切部位尚不能肯定。利用GST融合蛋白表达系统,分段表达了含有不同OMgp结构域的片段,对其与NgR作用的结构域进行了研究。结果表明,在OMgp与NgR的黏附结合过程中,OMgp的亮氨酸富含重复序列结构域是必需的,只有含该结构域的OMgp蛋白片段才能黏附表达有NgR的CHO细胞,并抑制神经突起的生长;在体外,含有丝／苏氨酸富含重复序列结构域的OMgp蛋白片段虽然具有微弱的沉降NgR的功能,但并不能抑制神经突起的生长。该结果将有助于中枢神经系统损伤后神经再生的理论与治疗研究。     

LINGO-1:新发现的脑内神经再生抑制因子

在成年动物和人中枢神经系统 ,髓鞘内的神经再生抑制因子 (MAG、OMgp、Nogo等 )通过与神经元上的特异性受体复合体相互作用 ,启动对神经轴突再生的抑制 ;“Nogo 6 6受体”(Nogo 6 6receptor,即Nogoreceptor 1,NgR1)和“p75神经生长因子受体”是组成此受体复合体的两个关键亚单位 ;被Nogo等激活的受体复合体能活化“胞内骨架调节因子”———RhoA ,RhoA最终实现对轴突延长的抑制。美国学者最近发现 ,在转染后成功表达NgR1和p75的非神经细胞 (COS 7细胞 ) ,神经再生抑制因子OMgp不能激活NgR1和p75复合体、亦不能活化RhoA ,暗示神经…     

OMgp LRR281～228：OMgp神经突起生长抑制功能的主要结构域

OMgp(oligodendrocyte-myelin glycoprotein)可以通过与MAG、nogo-66等神经再生抑制因子竞争结合同一受体NgR而诱使生长锥溃变和抑制神经突起的生长。以前的研究表明,在OMgp与NgR结合抑制神经突起生长的过程中,OMgp的亮氨酸富含重复序列(LRR)是必需的。为进一步了解OMgp LRR在神经突起生长中的作用及其结构与功能之间的关系,采用PCR-定点突变法对OMgp LRR结构域分段删除,表达了删除不同基因片段后的OMgp LRR蛋白,通过对表达有NgR的CHO细胞(NgR-CHO)的黏附实验和对原代培养神经细胞的抑制实验对其功能进行了研究。结果显示,分别删除了OMgp 25～56、57～133、134～180位氨基酸的OMgp LRR蛋白仍具有结合NgR-CHO和抑制原代培养的神经元突起生长的作用;而删除了第181～228位氨基酸的OMgp LRR蛋白则失去了对原代培养神经元的生长抑制作用,但仍然具有结合NgR的能力。表明OMgp181～228在OMgp的功能中具有重要的意义。删除了第181～228位氨基酸的OMgp LRR蛋白可望作为OMgp的竞争性抑制剂,用于中枢神经系统损伤后神经再生的治疗。     

Nogo受体相关研究进展

中枢神经系统损伤后其再生能力较弱已被人们所熟知,原因在于髓磷脂抑制物如Nogo、MAG、Omgp等抑制因子的作用,这些抑制因子通过与神经元上的Nogo受体(NgR)特异性结合,发挥对神经轴突再生的抑制作用。Nogo是一种存在于中枢神经系统少突胶质细胞上的髓磷脂蛋白,其作用主要在于神经细胞损伤后抑制其突触再生,这同时也是对损伤部位其他细胞免于进一步损伤的保护作用。存在于细胞表面的Nogo-66结构是与NgR特异性结合的功能域。NgR是一种存在于神经元表面,传递抑制轴突生长信号的复合共受体。近年来随着对NgR、Nogo及其下游信号通路其他相关蛋白研究的深入,提示多种神经系统疾病与之相关。我们简要综述近年来关于NgR的研究进展。     

TROY：新发现的NgRl受体复合物中的重要分子

中枢神经系统（CNS）损伤后神经不能再生,在很大程度上是由于外环境中存在大量的神经生长抑制因子。这些抑制因子中作用力最强的三种分子Nogo-A、MAG和OMgp是分别通过与其特异性受体NgRl的结合而发挥神经生长抑制作用的。NgRl是一种膜表面蛋白,不能直接激活细胞内信号,必须通过与跨膜蛋白的结合而传导信号。传统的观点认为：跨膜蛋白p75充当了这一角色。     

髓鞘相关糖蛋白与神经系统的髓鞘发育和轴突生长

髓鞘相关糖蛋白（myelin-associated glycoprotein,MAG）是免疫球蛋白超家族成员,它由中枢神经系统的少突胶质细胞和外周神经系统的施万细胞表达。MAG定位于直接和轴突相接触的髓鞘膜的最里层,它通过介导胶质细胞与轴突的相互作用参与髓鞘的形成及其完整性的维持。同时MAG也是髓鞘来源的神经生长抑制因子的主要成分。在神经系统发育的不同阶段,MAG显示不同的功能：即发育期促进轴突生长,成熟期抑制轴突生长。其抑制作用主要由髓鞘来源的抑制分子的共同受体NgR介导,在神经营养因子受体p75NTR以及小GTP酶Rho等信号分子的共同参与下完成。     

Nogo—p4与NgR结合抑制神经干细胞分化为双极形星形胶质细胞的突起生长

目的观察Nogo—p4是否通过与NgR结合的途径对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成双极形星形胶质细胞突起长度产生抑制。方法取4只出生24h内的Wistar大鼠,悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞。把神经干细胞分为A、B、C、D四组,A组加入血清,B组加入血清和Nogo—p4,C组神经干细胞经RNA干扰沉默NgR基因后加入血清分化,D组神经干细胞经RNA干扰沉默NgR基因后加入血清和Nogo—p4。分化第7d,GFAP抗体标记星形胶质细胞,使用Image—ProPlus5．0软件测量双极形星形胶质细胞突起长度。结果神经干细胞分化第7d,四组均可形成双极形星形胶质细胞。B组中双极形星形胶质细胞的突起长度明显短于其它各组。A、C、D组中双极形星形胶质细胞的突起长度没有显著差异。结论Nogo—p4经与NgR结合途径显著抑制脊髓来源神经干细胞分化成的双极形星形胶质细胞的突起生长。     

神经轴突生长抑制因子Nogo 家族的研究进展*

Nogo家族是一类神经轴突生长抑制因子家族,目前成员包括Nogo-A,Nogo-B,Nogo-C三个亚型。Nogo家族成员因C末端具有保守的RHD结构域而归属于RTNs家族,表明它们的分布和功能与内质网密切相关。Nogo家族C末端还具有一个进化保守的66氨基酸的功能段称为Nogo-66,体外表达的Nogo-66片段具有抑制神经突生长的作用。Nogo家族成员结构上的区别主要表现在不同剪切长短的N末端序列。Nogo-A主要在中枢和外周神经系统中广泛分布,Nogo-C主要分布在骨骼肌,而Nogo-B则几乎遍布于各种组织与细胞之中。目前,发现可介导Nogo胞内信号转导通路的受体主要是膜外糖蛋白偶联的NgR和跨膜受体p75NTR组成的共受体,但NgR与Nogo-A在胚胎发育中时空表达并不同步提示可能还有其它受体存在。虽然Nogo家族作为神经轴突生长抑制因子被发现,但越来越多的研究表明其可能在胚胎发育、细胞凋亡或神经退行性变等重大事件中扮演重要角色。本文拟就Nogo家族迄今为止突出的研究进展作一综述,旨在为下一步的功能研究工作提供理论参考和依据。     

中枢神经再生抑制因子及免疫治疗研究

成体哺乳动物中枢神经损伤后早期轴突再生失败的一个主要原因是由于髓磷脂抑制分子的存在。Nogo、髓磷脂相关糖蛋白以及少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白等神经再生抑制因子的发现,大大促进了中枢神经再生分子机制的研究。它们均能独立通过Nogo-66受体产生对轴突再生的抑制效应,髓磷脂抑制分子及其信号转导机制的研究日益成为中枢神经再生的研究热点,髓磷脂及其信号转导分子特别是Nogo-66受体、p75神经营养素受体成为损伤后促进轴突再生、抑制生长锥塌陷的主要治疗靶点。抑制上述抑制因子及相关受体NgR或p75NTR可能有助于中枢神经损伤的修复,围绕这些抑制因子及其相关受体介导的信号转导途径,人们提出了多种治疗中枢神经损伤的新思路,其中免疫学方法尤其受到关注。     

RNA干扰对离体大鼠神经干细胞NgR基因表达的影响

目的观察RNA干扰（RNA interference,RNAi）对离体大鼠神经干细胞的Nogo-66受体（Nogo-66 reeeptor,NgR）基因表达的影响。方法设计并合成3条大鼠NgR基因mRNA的小分子干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染体外培养的神经干细胞,免疫荧光及Western blot检测NgR表达。结果siRNA可以成功的转染神经干细胞,3条siRNA不同程度的阻断了神经干细胞的NgR基因表达,阻断效率随时间延长逐渐下降。阻断效果最好的1条siRNA在转染后第5d仍能保持（85．22±3．1）％高阻断效率。结论应用RNAi可以高效率的使大鼠神经干细胞的NgR基因表达沉默。     

色素上皮衍生因子--肿瘤治疗的候选药物

色素上皮衍生因子（pigment epithelium—defived factor,PEDF）是一种具有神经营养保护、抑制新生血管增生和抑制肿瘤生长等作用的多功能蛋白质。体内外试验证明,PEDF通过抑制新生血管生成、诱导肿瘤细胞分化和抑制肿瘤细胞增殖及迁移等多个环节抑制肿瘤的生长,成为治疗肿瘤的候选药物。     

电针及天麻素降低脑缺血大鼠杏仁中央核Nago-A及其受体的免疫组织化学表达

目的观察电针及天麻素对脑缺血大鼠杏仁中央核(central nucleus of amygdale,CeA)神经轴突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor-A,Nogo-A)及其受体(Nogo-A receptor,NgR)水平的影响,了解Nago-A及其受体是否参与针药结合治疗脑缺血作用。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、天麻素组和电针+天麻素组。除正常组,其余组采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型。待造模成功大鼠清醒后,模型组不予治疗,电针组电针(频率2Hz)刺激左侧"曲池""合谷"穴,天麻素组腹腔注射天麻素注射液,电针+天麻素组给予电针和天麻素联合治疗;均为每天1次,共治疗14d。采用免疫组织化学方法检测CeA内Nogo-A、NgR蛋白的水平。结果模型组Nogo-A、NgR免疫组织化学表达较正常组明显增强,电针组、天麻素组和电针+天麻素组Nogo-A和NgR表达性较模型组明显减弱,电针+天麻素组Nogo-A、NgR表达较电针组或天麻素组减弱。结论电针及天麻素均可抑制脑缺血后CeA内Nogo-A、NgR水平的升高,二者结合具有协同作用。     

肿瘤坏死因子受体超家族成员TROY的研究进展

TROY(TNFRSF expressed on the mouse embryo)是近年新发现的表达于小鼠胚胎的肿瘤坏死因子受体超家族成员.TROY在体内分布广泛,尤其高表达于胚胎和成熟的中枢神经系统.研究表明,TROY能与髓鞘抑制因子Nogo NgR1及脑内神经再生抑制因子(LINGO-1)形成功能受体复合物,参与中枢神经系统轴突生长抑制因子的信号转导;TROY还能诱导细胞副凋亡,促进某些细胞的增殖分化.本文就TROY在上述相关领域的研究进展作一综述.     

TAT-NEP1-40——神经再生的新型药物

在受损的中枢神经系统中,Nogo-A蛋白、髓鞘蛋白和少突髓鞘蛋白是抑制中枢神经轴突再生的主要物质,它们通过一个共同受体——Nogo蛋白受体(Nogo receptor,NgR)介导中枢神经轴突抑制。NEP1-40是NgR受体的竞争性抑制剂,是治疗中枢神经损伤是一个具有潜在性的候选药物。TAT蛋白质转导序列是HIV反式转录激活因子,是目前已知具有有效蛋白质转导功能的序列。利用蛋白质重组技术构建并表达的含有TAT结构域和NEP1-40肽的融合蛋白质TAT-NEP1-40可能成为一种治疗中枢神经系统损伤如中风、脑缺氧、脑出血、脑外伤和脊髓损伤的新颖的候选药物。     

人白血病抑制因子(hLIF)在昆虫细胞Sf9中表达

白血病抑制因子(LIF)是一种作用广泛的细胞因子,它促进小鼠白血病M_1细胞分化并抑制其增殖,所以把它命名为白血病抑制因子。随着研究的不断深入,人们了解到它还具有抑制胚胎干细胞的分化,抑制脂蛋白脂酶的活性,促进骨吸收,引起血小板增加,刺激肝细胞合成急性反应蛋白,以及参与胚胎发育、促进神经肌肉的生长和维持垂体功能等作用。 本研究用PCR扩增pLXSN-hLIF中的LIF结构序列。经HindⅢ和BamHⅠ插入质粒     

PEDF在肿瘤生长和转移中的作用

色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)最早是由胎儿视网膜色素上皮细胞的培养液中分离出来的,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族,但不具备抗蛋白酶活性,其在人体中广泛表达。PEDF是目前已知的人体最强的血管生长抑制因子,是最有希望成为治疗肿瘤和血管增生性疾病的候选基因。虽然PEDF最初被确认为神经细胞分化因子,现在研究发现它还具有营养和保护神经、抑制血管形成、促进肿瘤分化和凋亡等功能,但目前关注更多的却是其抑制新生血管生成的活性。此外,最近的研究表明,PEDF在人体中具有抗肿瘤作用,主要表现在抑制肿瘤的生长和转移,阐明其抑制肿瘤的作用机制对于抗肿瘤的研究具有重要意义。     

G-蛋白 Rab3a 对神经生长抑制因子 (GIF) 抑制神经元细胞生长作用的影响

为了深入研究 Rab3a 和神经生长抑制因子 (GIF) 的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用 MTT 还原法定量研究了 Rab3a 对 GIF 神经生长活性的影响,发现 Rab3a 可以替代脑提取物而使 GIF 发挥神经生长抑制活性 . 接着又利用多克隆抗体方法研究了 GIF 与 Rab3a 的相互作用,结果说明 Rab3a 是 GIF 发挥神经生长抑制活性所必需的蛋白质,并且它们的相互作用受空间位置的因素影响较大 . 在随后对它们相互作用的机理和可能的生物学意义进行了讨论 .     

蛇毒神经生长因子的研究

神经生长因子 ( Never growth factor,NGF)是神经营养因子家族中非常重要的一员。神经营养因子是一种内源性的可溶性蛋白家族 ,具有调节神经元的生长、存活、分化所需蛋白质的合成及影响神经元形态可塑性的功能。目前已发现的有神经生长因子 ,神经营养因子 - 3、 4、 5 ( NT- 3、 4、 5) ,脑源性神经营养因子 ( BDNF) ,睫状节神经营养因子( CNTF) ,以及胶质细胞源性神经营养因子( GDNF)。NGF是神经营养因子中第一个被发现和确认的 ,它的活性最早报道存在于两种肉瘤组织和蛇毒中 [1]。多年来 ,人们对蛇毒 NGF分离纯化、结构、生理…     

Nogo-A氨基末端：通过特异整合素机制抑制细胞黏附及轴突生长

成年哺乳动物的中枢神经系统（CNS）受损后,解剖学上的修复水平非常有限。因神经纤维再生明显受阻,往往造成神经损伤后永久性的功能缺陷。在成年CNS抑制轴突生长的因子中,有一类是髓磷脂蛋白（myelin）,而Nogo是这类蛋白中的一种,由少突神经胶质细胞产生,抑制轴突的生长。通过不同的启动子和差别剪接,nogo基因会产生三种主要的转录产物Nogo-A、-B和-C。