葶苈愈伤组织诱导及分化研究

为保护野生资源、实现人工栽培,本研究以葶苈(Draba nemorosa)嫩茎为材料,采用组织培养方法进行愈伤组织诱导与分化、不定芽生根与试管苗生根继代增殖培养,以及移栽和定植研究。结果表明,MS+6-BA 0.4 mg/L+2,4-D 2.5 mg/L是愈伤组织诱导培养和继代增殖培养的理想培养基;MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L 是愈伤组织分化培养和不定芽继代增殖培养的理想培养基;1/3MS+IAA 0.6 mg/L是不定芽生根培养和生根继代增殖培养的理想培养基;试管苗移栽成活率为86.8%,定植成活率为96.4%;定植苗保持了野生葶苈的植物学性状。     

玉竹的组织培养与快速繁殖

以玉竹[Polygonatum odoratum (Mill.) Druce]根状茎、叶片和茎段为外植体,于附加不同激素配比的MS培养基中诱导愈伤组织、不定芽和不定根,探讨增殖培养和植株再生的条件.结果表明,叶片和茎段外植体诱导愈伤组织和芽的分化率很低;而根状茎外植体易于培养,有较高的诱导率和增殖倍数,其愈伤组织、不定芽和不定根的诱导率分别可达87%、90%和99%以上.适宜根状茎外植体愈伤组织诱导的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,有利于增殖和丛生芽分化的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,而1/2MS+3.0～5.0 mg/L NAA适宜诱导试管苗生根培养.试管苗的移栽成活率可达85%以上.     

草麻黄植株再生体系的建立

目的:以草麻黄的子叶为材料,建立草麻黄植株再生体系.方法:采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织分化和不定芽生根研究.结果:MS+2,4-D 2.0mg/1+6-BA 1.0mg/l为诱导子叶形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;MS+2,4-D 1.5mg/l+6-BA 1.5mg/l是愈伤组织的最佳继代培养基;MS+IAA 0.2mg/l+TDZ 2.0mg/l是愈伤组织不定芽分化的最佳培养基,分化率为75%;试管苗生根培养基为MS+2,4-D 1.0mg/l.结论:建立了草麻黄子叶再生系统,为开发和保护麻黄野生资源提供一定的材料来源和技术方法.     

濒危物种绒毛皂荚组织培养快繁技术的初步研究

以绒毛皂荚(Gleditsia vestita Chun et How ex B.G.Li)种子为外植体,通过愈伤组织诱导、不定芽分化增殖、生根和驯化移栽,建立了绒毛皂荚组织培养的快速繁殖体系。结果表明:1)绒毛皂荚子叶和胚轴在MS+6-BA3.0 mg/L+KT 0.4 mg/L+IAA 0.3 mg/L培养基上同步诱导出愈伤和芽,愈伤组织诱导率达到90.5%,同步分化率高达77.9%;2)不定芽增殖的最佳培养基为1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L,培养20 d后,增殖倍数为4.0;3)MS+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.25 mg/L条件下,生根率高达100%,且移栽后植株长势好,成活率达90%以上。     

金线莲外植体筛选及愈伤组织诱导研究

以金线莲茎段、叶片、茎片、不定芽为试材,分别在添加6-BA、ZT、NAA、KT 5个不同处理的MS及1/2MS培养基上培养,诱导愈伤组织。结果表明,以茎段、茎片、不定芽为外植体,在MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA0.5 mg/L、MS + NAA 2.0 mg/L + KT 0.1 mg/L和MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L + ZT 0.2 mg/L培养基中培养,均能成功诱导愈伤组织。不定芽为诱导愈伤组织最佳外植体,最佳培养基为MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L + KT 0.2 mg/L。     

红金钻蔓绿绒高频再生体系的建立

以红金钻根茎、叶片、叶柄为外植体,通过直接诱导不定芽和间接(愈伤组织)诱导不定芽途径,建立组培快繁体系。本研究发现:根茎直接诱导不定芽最佳培养基:MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2 mg/L GA_3;通过愈伤组织间接诱导不定芽及其分化的最佳培养基:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA;不定芽增殖最佳培养基:MS+3.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L IBA;生根最佳培养基为:1/2MS+0.75 mg/L NAA。将植株种植于草炭和珍珠岩以3:1混合的基质中,成活率达98%。     

LA系列百合‘Eyeliner’花器官组培快繁技术研究

该试验以LA系列百合‘Eyeliner’花器官为外植体,通过不定芽直接诱导和愈伤组织再分化2种途径,建立了花器官组培快繁技术体系。结果表明:以花器官为外植体污染率接近于0;4种百合花器官诱导从易到难的顺序为花梗、花丝、子房和花柱;花丝易诱导愈伤组织,花梗易诱导不定芽,最适诱导培养基均为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA;不定芽增殖最佳培养基为MS+2.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,愈伤组织分化最佳培养基为MS+1.5mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA;诱导生根最佳培养基为MS+45g·L-1蔗糖;最佳炼苗方式为将组培苗封口放置在自然环境中3d,然后开口放置在自然环境条件下2d;当试管苗鳞茎大小为3.15cm时,移栽成活率最高;移栽最佳基质为草炭∶蛭石∶珍珠岩=2∶1∶1。     

三倍体毛白杨组织脱分化培养与植株体再生

采用毛白杨三倍体幼叶作为外植体进行组织培养,以MS为基本培养基获得了再生植株。从NAA和IAA与6-BA间进行的18个正交试验中,选择出适宜脱分化培养基MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L,对三倍体毛白杨愈伤组织诱导率为87.6%。5种生长素与6-BA配比的再分化培养基中,12MS+IAA 0.1mg/L+6-BA 0.1mg/L对不定芽的分化诱导率可达到68.5%;MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.01mg/L的培养基可使单芽直接增殖出7.4个芽。在MS+IBA 1.0mg/L的生根培养基上,试管苗的生根率可达85.7%。     

药用植物金荞麦愈伤组织诱导与植株再生

目前转基因技术已成为植物定向遗传改良的重要手段,而建立稳定高频的离体再生系统是实现遗传转化的基础和前提.本试验以25 ～30 d苗龄的金养麦(Fagopyrum dibotrys)无菌苗叶片、茎节间、叶柄为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究.结果表明:叶片在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 1.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率达到89％.茎节间在MS +2,4-D 2.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率为87％.叶柄在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L+ IBA 0.2 mg/L培养基上的最高诱导率仅为54％.愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为MS +6- BA2.0 mg/L +TDZ0.2 mg/L +NAA0.2 mg/L;金荞麦不定芽在1/2 MS +NAA 0.5 mg/L的培养基上生根效果最好.组培再生植株经炼苗后移栽到田间成活率达80％以上,且生长表现正常.高频完整再生体系的建立,为金荞麦进一步遗传操作和扩大药材资源奠定了基础.     

芥蓝组织培养研究

以登峰芥蓝为试材,取无菌苗的茎段、下胚轴为外植体分别进行组织培养研究。结果表明:MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为下胚轴最适诱导培养基,MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为带腋芽茎段最适诱导培养基;最适宜的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;试管苗在1/2MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L培养基中进行生根培养效果最好;经炼苗后组培苗移栽成活率达96.6%。     

向日葵离体再生体系的建立

为了建立高效的向日葵离体再生体系,从基因差异、外植体取材、生长素和细胞分裂素浓度、附加物的添加等方面出发,对向日葵愈伤诱导、分化、生根等过程进行了系统优化。结果表明：杂交材料相对于自交材料更容易实现再生;最佳外植体是生长4 d的子叶;最佳愈伤诱导培养基是MS培养基 (MS) +2.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA)+0.5 mg/L奈乙酸 (NAA)+1.0 mg/L激动素 (KT),诱导率最高可达100％;最佳分化培养基是MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+0.3 mg/L硝酸银 (AgNO3)+0.2 g/L活性炭 (AC),芽分化率可达71％;最佳生根培养基是1/2 MS+0.6 mg/L吲哆丁酸 (IBA),生根率最高为77％。方差分析表明,材料基因型、外植体生长时间、激素、AgNO3、AC对向日葵再生呈现显著性影响。     

雌雄栝楼的组织培养研究

对雌雄栝楼（Trlctmsanthes kirilowii Maxim）分别进行组织培养的研究结果表明：在雌雄栝楼组织培养过程中,愈伤组织的诱导和分化适宜的培养基均存在性别差异。愈伤组织诱导的适宜培养基分别是,雌性栝楼培养基为MS＋NAA0．5mg／L＋IBA0．5mg／L＋6-BA1．5mg／L;雄性栝楼培养基为MS＋NAA0．1mg/L＋IBA0．5mg／L＋6-BA0．5mg／L和MS＋NAA0．1mg／L＋IBA1．0mg／L＋6-BA1．0mg/L。愈伤组织分化的适宜培养基分别是,雌性栝楼培养基为MS＋NAA0．1mg／L＋IBA0．4mg／L＋6-BA1．2mg／L;雄性栝楼培养基为MS＋NAA0．3ms／L＋IBA0．2mg／L＋6-BA0．8mg／L;雌雄栝楼无根苗生根的适宜培养基均为MS＋NAA0．1mg／L。     

盐肤木体细胞胚胎发生及植株再生

以盐肤木(Rhus chinensis Mill.)幼胚为外植体,研究不同植物生长调节剂组合对其愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生的影响,以建立盐肤木体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明,最适愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率为84.57%,诱导出的初代愈伤组织白色或淡黄色,质地疏松,表面光滑,为非胚性愈伤。初代愈伤组织转移到1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基上培养1个月后,长出淡黄色质地紧密的胚性愈伤组织,诱导率高达100%,在此培养基上胚性愈伤组织增殖倍数为854.73%。所获得的胚性愈伤组织转接到1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖4%的培养基上培养1个月后可诱导体细胞胚胎发生,诱导率可达32.67%。诱导得到的体细胞胚胎经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚进一步分化发育成苗。无菌苗炼苗后栽种到泥炭土∶蛭石∶珍珠岩为2∶1∶1的生长基质上,能100%稳定成活。经过细胞学观察分析,体细胞胚的发育与合子胚相似。     

激素对樱桃番茄两种外植体诱导再生植株的影响

以 MS为基本培养基 ,附加不同浓度的 6-BA、IAA和 NAA培养樱桃番茄两种外植体以诱导再生植株。结果表明 :含 NAA的 MS+6-BA2 mg/L(单位下同 ) +NAA0 .2培养基诱导的叶片愈伤组织 ,经继续培养无芽的分化 ,含 IAA的 MS+6-BA2 +IAA0 .2培养基诱导的愈伤组织 ,经继续培养诱导芽的分化 ;含 NAA或IAA的 MS+6-BA2 +NAA0 .2和 MS+6-BA2 +IAA0 .2培养基利于下胚轴愈伤组织的诱导 ,而不含生长素的 MS+6-BA1 .0培养基可直接诱导芽的分化。     

白刺金琥组织培养研究

以白刺金琥种子无菌播种产生的小球体为外植体,进行愈伤组织诱导和小球分化。结果表明,去除顶端生长点的小球在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L的培养基中,可由刺座直接产生大量小球体,而切口形成的愈伤组织在6-BA浓度低于4.0mg/L时无法分化小球,当6-BA浓度提高到4.0~6.0mg/L时,亦可分化小球体,但诱导率低且周期长。继代培养在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L培养基中进行,单球在1/2MS加或不加NAA的培养基上均可生根。     

罗布麻愈伤组织诱导及植株再生

以罗布麻(Apocynum venetum L.)当年的成熟种子和5周龄的幼苗叶片为外植体,研究了不同激素组合、暗培养对愈伤组织及植株再生的影响.结果表明,幼苗作外植体诱导愈伤的最佳培养基为添加1.0 mg/L 6-BA 0.2 mg/L IBA的MS培养基;继代培养中1.0 mg/L 6-BA与0.2 mg/L IBA组合愈伤致密而生长迅速,长时间培养硬化的愈伤组织可用添加0.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IBA培养基和初期暗培养获得大量质地疏松、增殖迅速的愈伤组织;再生苗诱导以0.5 mg/L 6-BA 0.2 mg/L IBA组合为佳;1/2MS附加NAA 0.6 mg/L为适宜的生根培养基,初步建立了罗布麻离体再生体系.     

党参的离体培养及植株再生的研究

在附加激素的MS培养基上,培养党参下胚轴和无菌芽切段,诱导产生愈伤组织并且再生植株。经过两年多(15个世代)的继代培养,建立了党参体细胞无性系。实验结果表明:(1)培养基MS 0.4mg/L 2,4-D 0.8mg/L Kt 2.0mg/L IAA对愈伤组织诱导及继代培养,MS 0.2mg/L 6-BA诱导外植体产生丛芽和愈伤组织再分化,MS 0.5mg/L NAA 0.2mg/L 6-BA及MS 0.2mg/L NAA诱导生根效果最好。(2)愈伤组织再分化经过胚状体途径。     

枇杷叶片愈伤组织的诱导与保存

在不同成熟度的枇杷叶片中,最适宜诱导愈伤组织的是中度成熟叶;最适合的愈伤组织诱导培养基是MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L,诱导出的愈伤组织为黄绿色、颗粒状、硬度适中;适合愈伤组织继代保存的培养基为MS+6-BA 0.5~1.0mg/L+2,4-D 0.1~0.2mg/L。