用皂土法制造型特异性肉毒诊断血清

用皂土为载体与类毒素结合方法及破伤风类毒素抗原抗体絮状反应方法去除A、B、C、D、E、F型肉毒抗血清原料中的异型和异种抗毒素(破伤风抗毒素)。制备的A、B、C、D、E、F型肉毒诊断血清每1m l均能中和相应型的肉毒毒素10000LD50以上,而中和异型肉毒毒素或破伤风毒素均低于5 LD50;A、B、C、D、E、F各型混合后的混合型血清每1m l能中和各型肉毒毒素亦大于10000 LD50,中和破伤风毒素低于5 LD50,即效价和特异性符合规程要求。     

用光纤生物传感器检测炭疽杆菌、鼠疫杆菌及葡萄球菌肠毒素B

目的:用新研制的光纤生物传感器FOB-3检测多种病原微生物及细菌毒素。方法:利用双抗体夹心法,优化免疫反应的时间和浓度后,用FOB-3分别检测炭疽芽孢及繁殖体、鼠疫F1抗原和葡萄球菌肠毒素B。为便于结果判定,确定截断(cutoff)值,并以Ssignal与Nnoise差值的形式消除荧光信号中的噪声。结果:使用光纤生物传感器FOB-3,在20min内可分别检测到50～1000ng/mL的鼠疫F1抗原、0.1～100μg/mL的葡萄球菌肠毒素B、3×101～3×106CFU/mL的炭疽杆菌繁殖体和4×104～4×107CFU/mL的炭疽芽孢。结论:光纤生物传感器可以灵敏、快速、便捷地检测病原微生物及其毒素。     

重组α-银环蛇毒素P22-A31的原核表达及功能分析

α-银环蛇毒素在神经科学研究以及在临床和制药上有重要作用,为获得大量的α-银环蛇毒素,我们用已构建的pGEX-BgTX(P22-A31)质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并用谷胱甘肽Sepharose FF纯化GST-α-银环蛇毒素融合蛋白,再用凝血酶切掉融合标签谷胱苷肽转移酶(Glutathione S-transferase,GST),得到了较纯的重组α-银环蛇毒素同工毒素,得率约为1.225mg/L。用重组α-银环蛇毒素制备多克隆抗体,经ELISA和Western杂交鉴定后可知重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素的抗原性一致。小鼠毒性试验表明,重组α-银环蛇毒素同工毒素的半致死剂量LD50为1.598mg/kg,约为天然α-银环蛇毒素的1/5。小鼠化学法镇痛试验显示,重组α-银环蛇毒素有一定的镇痛药效,1/4LD50剂量的镇痛百分率为55.2%,1/8LD50剂量的镇痛百分率为20.5%,在外周镇痛作用中呈一定的量效关系。     

二月桂酸二丁基锡对大鼠妊娠及对子代毒性作用

目的通过染毒观察二月桂酸二丁基锡（Dibulytin Dilaurate,简称DBTD）对子代胎鼠形态、体重、性别及骨骼发育状的影响。方法按随机分组的原则,将大鼠分为对照组和染毒组,对照组用玉米油,染毒组用DBTD玉米油溶液,浓度分别是2.5 mg/kg体重（1/72 LD50）、10 mg/kg体重（1/18 LD50）和20 mg/kg体重（1/9 LD50）,采用灌胃的方式进行染毒,6 d/周,每天同一时间进行染毒,共计染毒48 d。染毒第五周后,各组大鼠与正常雄性大鼠以1：1的比例合笼,合笼期间不染毒,每只雌鼠查到阴栓为妊娠第0天,继续染毒,于妊娠第18天处死取胎鼠。结果1/18 LD50及1/9LD50剂量组中活胎及胎儿的体重明显下降,1/18 LD50剂量组胎儿的性别开始发生明显的变化（P〈0.05）。结论DBTD染毒对大鼠每胎存活数、胎重、胎儿的形态及性别有影响,有一定的生殖毒性。     

霍乱疫苗中残余霍乱毒素检测方法的建立及验证

采用间接酶联免疫法,即用神经节苷脂包被,加入待检样品,再加入兔抗霍乱毒素B亚单位抗体,用标准样品的吸光值(A值)对标准样品的浓度绘制4-参数拟合曲线,根据标准曲线计算出待测样品中的CT浓度。结果显示,在浓度范围(0.6～16)ng/ml之间,CT标准浓度和检测浓度成线性关系,r2=0.9986。精确度在浓度范围(0.6～16)ng/ml,CT的平均回收率在96.24%～114.44%之间。精密度:批内变异CV%≤12.98%,批间变异CV%≤18.48%。特异性CT浓度在10ng/ml时,平均回收率为102.6%;CT浓度在5ng/ml时,平均回收率为111.17%;CT浓度在2.5ng/ml时,平均回收率为123.83%。实验表明该方法可检测霍乱疫苗原液中CT的含量。     

次磷酸钠的急性毒性研究

目的本研究旨在探讨次磷酸钠对小鼠经口的急性毒性作用,评价其安全性,为其在食品工业中的广泛应用提供理论依据;方法受试物采用经口灌胃途径,观察不同剂量组给予小鼠后的死亡率,并按照寇式法计算半数致死量;结果经实验结果统计,计算出次磷酸钠的LD50为7.67g/kg体重,95%置信区间上限是7.943g/kg体重,下限是6.166g/kg体重;结论按化学物经口急性毒性分级标准,次磷酸钠毒性为2级,属于实际无毒物质。     

层析法纯化破伤风毒素的试验研究

为了获得高纯度的破伤风毒素,用疏水层析和离子交换层析纯化破伤风毒素。破伤风毒素培养滤液经Phenyl Sepharose疏水层析除去大部分杂质,再经DEAE Sephadex离子交换层析进一步纯化。经两步层析纯化后,毒素纯度达到2000Lf/mg PN以上,回收率为52%~73%。用此方法,连续纯化五批毒素,均获得高纯度的破伤风毒素。试验证明破伤风毒素经疏水层析和离子交换层析可得到有效纯化。     

桑色素对小鼠的急性毒性研究

桑色素是一种天然的黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤及抗氧化等作用,本实验中使用上下法主试验,腹腔注射给予ICR雌雄小鼠不同剂量的桑色素(230、280、330、390、450、530、630 mg/kg),观察动物的毒性反应,存活动物观察14 d,计算半数致死量LD50。观察期结束后,通过体重、外周血指标、血清生化指标和病理组织学检查来衡量桑色素对小鼠的急性毒性。研究发现,高剂量桑色素对小鼠有一定的急性毒性,腹腔注射半数致死量LD50为463.24 mg/kg,并且毒性强弱与给药剂量密切相关。     

番茄叶水提物急性毒性及其对急性炎症的影响

本文观察了番茄叶水提物对小鼠的急性毒性及其对脂多糖诱导急性炎症模型大鼠的影响。采用经典的急性毒性试验方法,观察小鼠口服给予番茄叶水提物的死亡率,按寇氏法计算半数致死量(LD50)。50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药泼尼松5 mg/kg组与番茄叶水提物3.19、1.59 g/kg组,连续给药10 d,每天一次。以腹腔注射脂多糖(LPS)建立急性炎症模型,ELISA法测定血清白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果显示,番茄叶水提物单次灌胃给药的LD50为46.44g/kg,95%可信限为39.52～54.60 g/kg。3.19 g/kg番茄叶水提物可明显降低LPS诱导的急性炎症小鼠血清IL-1、IL-6和TNF-α水平。番茄叶水提物抑制LPS诱导急性炎症的作用机制可能与其降低血清炎症因子水平有关。     

新型抗虫活性肽雷氏大疣蛛毒素4596的纯化与鉴定

雷氏大疣蛛是我国新近鉴定的蜘蛛新种,虽然动物学家们已经对其进行过分类地位与生态学特性研究,然而有关抗昆虫活性成分研究的报道较少.通过比较解剖蜘蛛毒囊、乳胶软管诱导与电脉冲刺激3种蜘蛛毒液采集技术,发现雷氏大疣蛛毒液的最佳采集方法是电脉冲刺激采毒法.该蜘蛛粗毒对蜚蠊50%致死剂量LD50值是1.486 mg/g.结合阳离子交换层析和反相高效液相色谱技术从该蜘蛛粗毒中分离纯化到一种新型多肽毒素,根据质谱分析确定其相对分子质量为4 596.38,该毒素被命名为雷氏大疣蜘蛛毒素-4596(raventoxin-4596,RVTX-4596).通过初步毒性实验证实RVTX-4596是一种新型抗昆虫毒素.     

CMG2-Fc 融合蛋白突变体筛选及中和炭疽毒素活性分析

目的:筛选能有效中和炭疽毒素和抵抗炭疽毒素损伤细胞的CMG2-Fc(炭疽毒素受体II-人免疫球蛋白Fc段融合蛋白)突变体。方法:运用FoldX等计算软件分析CMG2与PA晶体学结构,设计能提高CMG2-PA亲和力的突变体分子,并与人IgG1Fc片段构成融合基因,转染CHO-S细胞并通过亲和层析获得CMG2-Fc突变体蛋白,通过亲和力检测和细胞保护实验分析各突变体中和炭疽毒素能力。结果:筛选并表达了8个CMG2-Fc突变体分子,亲和力实验显示其中E117Q突变可明显提高CMG2-Fc与PA的亲和力(KD=1.35×10-11 mol/L),细胞保护实验提示E117Q突变能有效提高CMG2-Fc中和炭疽毒素能力(CMG2-Fc(E117Q)的IC50为15 ng/μL,而wt CMG2-Fc的IC50为50ng/μL)。结论:CMG2-Fc(E117Q)突变体分子可作为拮抗炭疽毒素损伤的炭疽治疗药物分子,进行进一步研究。     

硫酸化茯苓多糖急性毒性实验研究

按10、8、6.4、5.12、4.1g/kg体重剂量的硫酸化茯苓多糖(SP)分别灌胃给药,通过观察小鼠的活动和急性毒性反应,记录小鼠的死亡数,用综合计算法计算半数致死量(LD50)等相关数据.结果表明硫酸化茯苓多糖灌胃给药的LD50为7.358/kg,LD50的95%平均可信限为(7.358±0.894)g/kg,属低毒性物质.该研究为开发应用硫酸化茯苓多糖新药提供科学的药理学依据.     

利用EXCEL快速进行毒力测定中的致死中量计算和卡方检验

根据机率值分析法和最小二乘法的原理 ,在Windows 98 Me 2 0 0 0 XP系统中 ,利用EXCEL软件编制了 2个杀虫剂毒力测定中计算有关毒力回归方程、LD50 、相关系数、LD50 的 95 %置信限、标准误以及卡平方检验等计算程序模板。计算时只需要输入试验浓度 (或剂量 )、试虫数和试虫死亡数 ,即可快速、简便、准确计算毒力测定的结果 ,并进行卡平方值的计算和适合性判断。     

免疫沉淀法测定乳酸脱氢酶同工酶1的研究

应用免疫沉淀法测定了乳酸脱氢酶同工酶1(LD1).血清与抗血清用量为10:1,加入抗血清5min后再加入与血清量相等的饱和硫酸铵溶液.离心后测定上清液中的LD.总酶活性在618U/L内线性关系良好.二份标本批内精度CV值分别为3.76%和4.70%,批间CV值为7.00%,免疫沉淀法与电泳法高度相关(n=22,r=0.976).72例正常人LD参考值为102.31±16.4U/L,LD1为23.65±4.39U/L,LD1/LD为23.12±3.85%.免疫沉淀法的优点是特异性高,操作简单,可用于自动生化分析仪.精确度高,线性关系好,测定范围宽,是测定LD1的理想方法.     

番石榴叶提取物对高脂性肥胖小鼠的减肥降脂作用的研究

目的:研究番石榴叶提取物对小鼠肥胖模型的减肥、降脂作用。方法:①利用高脂饲料喂养,建立小鼠肥胖模型;②小鼠肥胖模型初步建立后,以体重、热量摄取、腹部脂肪系数、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)为指标,通过普通饲料阴性组,阳性对照药非诺贝特给药组比较,探求番石榴叶提取物的减肥、降脂作用及其剂量依赖关系。结果:①与Nomal组比较,HFD组的小鼠体重、热量摄取、腹部脂肪系数、FBG、TG、TC、LDL-C显著增加;②给药后,3个剂量番石榴叶提取物组的小鼠体重、腹部脂肪系数、FBG、TG、TC、LDL-C均明显低于高脂饲料组,且呈显著或极显著差异,并与阳性对照组无明显差异;③3个剂量番石榴叶提取物组的减肥、降脂作用存在一定的效应-剂量关系,即LD组(50mg/Kg)MD组(100 mg/Kg)HD组(200 mg/Kg)。结论:番石榴叶60%乙醇提物对小鼠肥胖症和高脂血症有一定的预防和治疗作用,3个剂量组中HD组(200 mg/Kg)效果最好,可望开发为减肥降脂的纯天然药物。     

固相抗体放射免疫分析法测尿中微量白蛋白

将抗人白蛋白抗体(或第二抗体)与纤维素偶联,建立了固相放免法。其剂量反应曲线在20—540ng/ml范围内呈一直线,灵敏度为20ng/ml。20例正常人尿中微量白蛋白测定值为5.71±1.39 mg/24 h尿,与液相放免法的7.17±3.70mg/24 h尿的结果相接近。固相一抗放免法和液相或固相二抗放免法均有很好相关。     

沙蜇(Stomolophus meleagris)刺丝囊毒素生物活性的初步分析

从沙蜇触手提取刺丝囊细胞毒素,并对该毒素进行溶血活性、致死活性、SOD活性和抗肿瘤活性的研究。结果显示,沙蜇毒素具有明显的溶血活性,其半溶血率(HU50)约为10.5μg/ml;该毒素还对草鱼显示出较强的致死活性,半致死量(LD50)为50μg毒素/g鱼;同时该毒素具有明显的SOD活性和抗肿瘤活性,当毒素浓度为18μg/ml时其总SOD活性为161 U/mg,而毒素浓度为1 mg/ml时,该毒素对肝癌细胞Bel-7402表现出显著的抑制效果,其抑制率达到54.9%。因此,有必要对沙蜇毒素内的生物活性组分进行深入研究,为沙蜇毒素的开发利用提供依据。     

破伤风类毒素抗体酶联双抗原夹心法定量检测试剂的研制及评价

研制破伤风类毒素抗体酶联双抗原夹心法定量检测试剂,用于破伤风免疫血浆抗体效价检测。以精制破伤风类毒素经Sephacryl S-300柱层析纯化后作为包被抗原,用辣根过氧化物酶以改良过碘酸钠法标记精制破伤风类毒素作为酶标记抗原,以破伤风人免疫球蛋白国家标准品采用小鼠中和试验法标定试剂盒定量标准品,制备双抗原夹心法定量检测试剂;进行试剂盒检测范围、特异性、重复性、精密度及稳定性考核,并与小鼠中和试验法、琼脂双扩散法及国外破伤风类毒素抗体酶联试剂盒进行比较。结果显示,试剂盒的检测范围为10~150mIU/ml,灵敏度为10mIU/ml,线性好(r>0.996),板内孔间变异度小(CV<8%),特异性强(100%),重复性好(CV<13%),于37℃放置6天测定结果无明显差异,与小鼠中和试验法、英国Biding Site酶联试剂有良好的一致性。试验证明所研制的试剂盒适用于破伤风免疫血浆中的破伤风抗体效价定量检测。     

Vero毒素—1的纯化及特性分析

从含有VT1全基因的基因工程菌中纯化出VT1。纯化的步骤包括（NH4）2SO4盐析,两次DEAE Sepharose Fast Flow柱层析。最终从4L培养物中纯化出1.5mg纯毒素,收率为8．6％,梯度Native-PAGE测定毒素的分子量为70kD,SDS－PAGE电泳表明毒素有两个亚基,分子量分别是32kD和7.7kD。对VT1的多种生物学特性进行了研究;经测定VT1对Vero细胞的半数致死量CD50为1pg,对小鼠的半数致死量LD50为18ng,引起兔肠襻积液的最小毒素量是1．25μg/肠襻。     

基于CdSe阳离子交换的玉米赤霉烯酮新型荧光免疫检测方法的建立及应用

作为镰刀属真菌的次级代谢产物,玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)具有强烈的生殖毒性和免疫毒性,严重威胁动物和人类健康。本研究通过采用羧基修饰的CdSe水溶性量子点(quantum dots,QDs)标记ZEN单克隆抗体,并基于CdSe阳离子交换信号增强原理,建立了ZEN新型荧光免疫检测方法(CdSe QDs-FLISA),检测下限(IC₁₀)和半数抑制率(IC₅₀)分别为0.006 ng/mL和0.17 ng/mL,检测区间(IC₂₀-IC₈₀)为0.01-0.45 ng/mL。与ZEN的结构类似物(α-zearalanol、zearalanone、α-zearalenol、β-zearalenol and β-zearalanol)交叉反应性依次为22.3%、13.1%、6.2%、1.6%和3.9%,与农产品中其他真菌毒素如黄曲霉毒素B₁ (AFB₁)、赭曲霉毒素A (OTA)、呕吐毒素(DON)和伏马毒素B₁ (FB₁)几乎不存在交叉反应。该方法在玉米样本中加标回收率较高,且实际样本中ZEN的定量检测结果与LC-MS/MS一致性较好。本研究建立的CdSe QDs-FLISA操作简单,可实现对样本中ZEN的快速定量检测与分析,便于基层单位推广使用,具有较好的应用前景,同时也可为其他病原微生物检测技术的开发提供参考。