轮状病毒疫苗有效性及其影响因素的研究进展

A组轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起5岁以下儿童腹泻的主要病原体之一。世界卫生组织建议将轮状病毒疫苗纳入计划免疫程序,但同一种疫苗在不同国家或地区的免疫反应和有效性表现不同。现就已上市的轮状病毒疫苗的有效性及影响因素予以综述,为新的轮状病毒疫苗研发、临床设计及免疫策略的制定提供参考。     

儿童轮状病毒感染的诊断

<正>轮状病毒感染在儿童和成人之间广泛传播。在秋冬季节,占急性肠道疾病发病率的36—70%。除此之外,在医院内轮状病毒感染是在儿童间传播的一个严重问题。 由于这些原因,采用实验室方法诊断轮状病毒感染,并进行深入的研究具有重要意义。已经知道,在粪便中检查轮状病毒或它们的抗原的不同方法:直接电镜、免疫电镜、免疫扩散和酶免疫方法,以及分子杂交法。但是,所有这些方法都要专门的,价值昂贵而又操作繁重的设备,大多数实验室达不到这种要求。在粪便中,借助于凝集反应查明轮状病毒抗原的快速方法具有重大意义。只要这些方法的灵敏度和特异性高,经济,简易可行,即可很快地得出结果。尤其重要     

中国南部地区接种与未接种轮状病毒疫苗儿童的轮状病毒胃肠炎感染状况调查

感染轮状病毒是全球5岁以下儿童严重腹泻的最常见的原因。在引入轮状病毒疫苗接种以前,几乎每一名婴儿至少经历过一次轮状病毒感染。据统计,2000年全球5岁以下儿童死于轮状病毒感染者达52.8万例(范围为46.5万~59.1万例),2013年这一数据为21.5万例(范围为19.7万~23.3万例)。2009年世界卫生组织策略咨询专家工作组建议将轮状病毒疫苗接种纳入各国国家免疫规划(NIPs),尤其是非洲和亚洲那些具有高度腹泻病相关性儿童死亡率的国家应首当其冲地引入轮状病毒疫苗接种。至2018年3月,已有95个国家将轮状病毒疫苗免疫纳入国家免疫规划,23个国家已经宣布计划将轮状病毒疫苗引入国家免疫计划。     

轮状病毒四价灭活疫苗的制备及在小鼠的免疫原性研究

制备轮状病毒四价灭活疫苗,观察其在小鼠体内的抗体应答情况。实验采用轮状病毒原液经凝胶过滤层析纯化,灭活后配制四价疫苗,肌肉注射免疫小鼠,ELISA法测定小鼠血清IgA、IgG。将单价G1、G2、G3、G4型灭活病毒原液及四价轮状病毒灭活疫苗免疫小鼠后,均可刺激产生针对RV的高水平的特异性IgG抗体,但IgA应答较弱。表明四价轮状病毒灭活疫苗在小鼠中具备很好的免疫原性。     

轮状病毒灭活疫苗和减毒活疫苗序贯免疫的体液免疫应答效果

目的:评价采用轮状病毒灭活疫苗进行初始免疫,减毒活疫苗进行加强免疫的序贯免疫方案的体液免疫应答效果。方法:将实验小鼠随机分为4组(口服疫苗组、序贯疫苗组、口服对照组及序贯对照组),按相应方案免疫后,ELISA检测血清轮状病毒特异性IgG和IgA、肠道轮状病毒特异性IgA;微量中和实验检测血清病毒特异性中和抗体;同时采用ELISA分析口服活疫苗后病毒排出情况。结果:与对照组相比,序贯疫苗组小鼠产生的轮状病毒特异性血清IgG、IgA、中和抗体及肠道IgA水平显著升高。与口服疫苗组相比,序贯疫苗组的免疫方案诱发的轮状病毒特异性血清IgG、IgA、中和抗体水平显著升高,肠道IgA水平两组间没有显著差异。同时,与口服疫苗组相比,序贯疫苗组中轮状病毒灭活疫苗进行的初始免疫未影响第一次口服活疫苗后病毒的排出量和排出时间,但序贯疫苗组第二次口服活疫苗后病毒的排出量迅速减少,排毒时间快速缩短,与口服疫苗组第三次服苗后病毒的排出量和排出时间相似。结论: 轮状病毒灭活疫苗和减毒活疫苗序贯免疫可有效诱发小鼠全身和黏膜局部的体液免疫应答,该方案将有可能成为轮状病毒疫苗临床应用的候选方案。     

猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7在乳酸菌中的表达及免疫原性分析

[目的]在乳酸菌中表达猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7,并检测其抗原性,为进一步制备猪轮状病毒乳酸菌疫苗奠定基础.[方法]摸索电转化条件,将已构建的重组质粒pW425et-Vp7转化至thyA基因缺陷型的嗜酸乳杆菌中.筛选阳性克隆,采用SDS-PAGE和Westernblot检测其表达情况.并将BALB/c小鼠口服免疫该重组菌,间接ELISA检测其免疫原性.另外,给免疫后小鼠攻以纯化的猪轮状病毒(蛋白含量15 mg/mL),初步检测该重组菌的免疫保护作用.[结果]Vp7基因在乳酸菌中获得表达,大小约40.77 kDa,且该蛋白可与猪轮状病毒抗体反应,具有反应原性.ELISA检测小鼠肠黏膜样品结果显示免疫后小鼠能产生明显的抗轮状病毒SIgA抗体,表明该重组菌具有较好的免疫原性.且攻毒后,免疫组仅23%的小鼠发生腹泻,初步证明该重组菌对猪轮状病毒的攻击具有较好的保护作用.[结论]在乳酸菌中成功地表达了猪轮状病毒Vp7基因,制备了猪轮状病毒Vp7重组乳酸菌,该重组菌具有较好的抗原性,初步证明其作为疫苗的可行性.     

人类轮状病毒基因 DNA免疫的初步研究

本文研究人类轮状病毒基因DNA免疫及应用.通过构建重组质粒pCI/vp7,pCI/vp4及pCI/vp6,以肌注法导入BALB/c小鼠肌肉组织,其中pCI/vp7及pCI/vp4能有效引起机体免疫应答,而且对轮状病毒Wa株有一定中和效应.从本次试验的结果来看,人类轮状病毒DNA疫苗能作为预防病毒性小儿腹泻的一种手段.     

轮状病毒疫苗研究现状

轮状病毒自上世纪70年代初发现至今,仍是婴幼儿病毒性腹泻最主要的病原体。每年约60万婴幼儿因轮状病毒感染导致严重脱水死亡。轮状病毒疫苗从上世纪90年代初开始研制,至今已有三种疫苗用于预防轮状病毒感染。这三种疫苗均为减毒活疫苗:其中包括单一血清型Rotarix、罗特威和重组5价疫苗RotaTeq。它们已在全球多国使用,有些国家已将其纳入免疫规划。疫苗的使用使人群轮状病毒感染下降,特别是死亡率明显减少。但也出现了一些问题,因此除了减毒活疫苗,也有一些实验室研究其他形式的疫苗,例如重组疫苗、灭活疫苗等。本文主要介绍轮状病毒疫苗的研究现状,为我国轮状病毒疫苗的研究、使用和推广提供一定理论依据。     

表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。     

用重组腺病毒表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7可获得良好的免疫学效果

为探索利用重组腺病毒表达轮状病毒的结构抗原以制备轮状病毒基因工程疫苗的可行性,构建了一株可表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7的重组腺病毒AdEasyCVP7.AdEasyCVP7感染293细胞后,RT－PCR证明VP7基因有转,Western blotting试验可检测到VP7的表达。随后,用AdEasyCVP7通过灌胃和滴鼻两种不同途径免疫小鼠,并对免疫后小鼠的血清抗体和粘膜抗体进行了比较。初次免疫后,两组小鼠均有应答,但血清抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后,滴鼻组小鼠显示出明显的加强效果。对肺灌洗液中的sIgA及肺、肠粘膜组织匀浆中的IgA进行检测发现滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对血清中和抗体的检测表明,初次和再次免疫后,两组小鼠血清中均有中和抗体产生。该研究为轮状病毒基因工程疫苗的免疫方案、免疫途径及免疫保护作用等的进一步研究奠定了基础。     

人类轮状病毒基因DNA免疫的初步研究

本文研究人类轮状病毒基因ＤＮＡ免疫及应用。通过构建重组质粒ｐＣＩ／ｖｐ７,ｐＣＩ／ｖｐ４及ｐＣＩ／ｖｐ６,以肌注法导入ＢＡＬＢ／ｃ小鼠肌肉组织,其中ｐＣＩ／ｖｐ７及ｐＣＩ／ｖｐ４能　有效引起机体免疫应答,而且对轮状病毒Ｗａ株有一定中和效应。从本次试验的结果来看　,人类轮状病毒ＤＮＡ疫苗能作为预防病毒性小儿腹泻的一种手段。     

小儿副轮状病毒的检出

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,从婴幼儿急性腹泻粪便中检出轮状病毒RNA电泳阳性293份,发现一株副轮状病毒(青-27株),此株病毒经电泳观察,呈典型的轮状病毒形态,但易破碎。ELISA检测表明不具有一般轮状病毒的特异性群抗原,病毒RNA基因组由11个片段组成,但电泳图型特殊,吴4:3:2:2排列模式,本文证实,此一小儿副轮状病毒与国外报道的,散发罕见的小儿副轮状病毒RNA电泳图型相同,提示此病毒的重要意义。     

轮状病毒非结构蛋白NSP1与宿主的相互作用

轮状病毒（rotavirus,RV）非结构蛋白1（nonstructural protein 1,NSP1）是轮状病毒逃避宿主天然免疫应答的关键蛋白质。它可以与干扰素调控因子家族（interferon regulatoryfactor family,IRFF）的共同区域结合,阻断干扰素表达的信号通路,降低宿主细胞I型干扰素（type I interferon,IFN-I）的表达,从而抑制宿主天然抗病毒免疫机制的建立。因此,NSP1被认为是轮状病毒的一种重要毒力因子。本文综述了近年来轮状病毒NSP1与宿主相互作用的研究进展。     

轮状病毒腹泻患儿检测结果分析

目的:探讨轮状病毒感染与天气因素之间的关系,以指导临床采取合理的防治策略.方法:采用免疫胶体金法对1155例腹泻患儿进行轮状病毒检测;收集2005年到2007年的天气资料;分别分析轮状病毒阳性患儿人次与温度、湿度之间变化的规律.结果:501份标本轮状病毒阳性,6m-24m年龄段婴幼儿阳性检出率最高.每年秋季(第33周时)随着周平均气温缓慢下降患儿人次开始逐渐上升,到第41周患儿人数达到最高峰,之后回落,达高峰前几周湿度也略有下降,表明天气因素与轮状病毒的传播有密切的关系.结论:秋季周平均气温、相对湿度是影响轮状病毒传播流行的自然因素.     

轮状病毒的动物感染模型

本文综述了以小鼠和兔为主的动物研究模型对轮状病毒（ＲＶ）感染与免疫的研究。根据感染动物排出病毒、血清学免疫反应等指标,可以间接评价ＲＶ口服疫苗、亚单位疫苗肠道外免疫、粘膜－肠道外联合免疫等对肠道的保护作用以及确定保护作用的相关因素和添加佐剂等新方法的效果。     

A组人轮状病毒NSP3基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:获得轮状病毒NSP3基因的表达产物及其抗血清。方法:将TB-Chen株轮状病毒NSP3基因插入质粒pETL,构建重组表达质粒pET-NSP3,并转化大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白NSP3;用凝胶分离回收的方法纯化该蛋白,免疫豚鼠制备该蛋白的抗血清。结果:构建了重组表达质粒pET-NSP3,并在大肠杆菌中高效表达了重组蛋白NSP3,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的28.6%;有效地纯化了目的蛋白并制备了该蛋白的抗血清,Western印迹表明该抗血清能与重组蛋白NSP3发生特异性免疫反应。结论:通过质粒pETL能高效表达轮状病毒NSP3蛋白,该重组蛋白具有较好的免疫反应性,为进一步研究其结构、功能及免疫学性质奠定了基础。     

轮状病毒肠炎患儿T细胞和红细胞免疫功能动态观察

报道４０例轮状病毒肠炎患儿急性期和恢复期外周血Ｔ细胞亚群和红细胞免疫功能的变化,并与同龄正常儿童进行了比较。结果表明急性期患儿ＣＤ３、ＣＤ４细胞及ＣＤ４／ＣＤ８比值均明显降低,ＣＤ８不变,至恢复期随着临床症状的改善,ＣＤ３、ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８逐渐正常。轮状病毒肠炎患儿急性期红细胞Ｃ３ｂ受体花环率显著下降,恢复期接近正常。结果提示细胞免疫参与了轮状病毒肠炎的感染过程,ＣＤ４／ＣＤ８与该病的预后有关。轮状病毒肠炎急性期可有继发性红细胞免疫功能下降,治疗时,有必要维持患儿的红细胞免疫功能,以提高其抗感染能力     

在我国患急性腹泻成人中发现一种新轮状病毒

从3例急性成人腹泻患者粪便中,经电镜观察,成人腹泻轮状病毒—酶联免疫吸附试验(ADRV-ELISA)、普通轮状病毒—酶联免疫吸附试验(Rota-ELISA),猪抗C型(组)轮状病毒和鸡抗D型(组)轮状病毒血清分别与本病毒的免疫电镜试验以及RNA电泳等实验结果,发现了一种新轮状病毒,该病毒的形态结构与普通轮状病毒(Rotavirus)、成人腹泻论状病毒(Adult Diarrhoea Rotavirus,简称ADRV)极为相似,但抗原性与普通轮状病毒(A组),成人腹泻轮状病毒(B组),C型轮状病毒(C组),D型轮状病毒(D组)显然无关。基因分析表明,该病毒基因组由11个双链RNA片段组成,但其RNA电泳图型具有独自的特点,与目前公认的A组、B组、C组、D组论状病毒韵RNA电泳图型均不同,免疫电镜证实,该病毒能被人恢复期血清所凝集,表明该病毒可能是腹泻病人的病因。     

表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

目的：应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4（NSP4）的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法：构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果：获得了滴度为10^8.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1：320 和1：1436.8;中和抗体效价1：45.3和1：71.8。结论：表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。     

腹泻患儿粪便中A群轮状病毒抗原阳性率及其相关因素分析

目的回顾性分析我院腹泻患儿粪便中A群轮状病毒抗原检测情况,为临床提供快捷、准确、可靠的诊断依据。方法收集腹泻患儿粪便标本2 869例,应用免疫层析双抗体夹心法检测A群轮状病毒抗原,对阳性率及其影响因素进行统计分析。结果2 869例检测结果中阳性946例,总阳性率为32.9%。1~2岁患儿阳性率最高,为36.5%;0~1岁阳性率其次,为32.3%;2~6岁患儿阳性率相对较低,为27.0%。不同年龄段间比较差异具有统计学意义(χ2=11.17,P0.05)。秋冬季节为轮状病毒感染率的高峰期,春夏季节较低,分别为39.5%和22.6%。不同季节两组间比较差异具有统计学意义(χ2=10.15,P0.05)。并且发现粪便以黏液便或水样便为特征的患儿A群轮状病毒感染率较高。结论轮状病毒是婴幼儿急性重症腹泻的主要病原体之一,及时进行轮状病毒抗原检测,对腹泻患儿的及时诊断和合理预防治疗具有重要意义。