枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶补料发酵及其特性研究

采用正交实验设计对枯草芽孢杆菌产β－甘露聚糖酶的培养基组成和培养条件进行优化,在此基础上进行摇瓶补料发酵,酶活达223．47U／mL,较未补料的酶活提高了32．09％。酶反应最适pH为6．5,最适温度为70℃,该酶在pH5.0-10.0和70摄氏度以下稳定,水解魔芋胶产物主要为二糖以上低聚糖。     

黑曲霉嗜热β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的克隆表达及其魔芋降解产物分析

根据毕赤酵母密码子偏好性优化设计合成一段来自黑曲霉BK01的嗜热β-甘露聚糖酶基因,通过构建表达载体pPICZαA-man线性化后电转化入不同的毕赤酵母宿主,获得最佳重组菌KM71-MAN,其发酵罐发酵酶活最高达2 318.85 IU/mL。表达产物纯化后的分子量约为40 kD,最适反应温度为80℃,最适pH为5.0。该酶在70℃(pH5.0)保温44 h仍能保留43%的酶活力且在pH3.0-7.0范围内保温70 h(50℃)酶活力仍能保留85%以上。利用发酵罐所产重组酶酶解魔芋胶制备甘露低聚糖,产物以甘露二糖和甘露六糖为主,甘露低聚糖得率为55.6%。该重组β-甘露聚糖酶具有良好的热稳定性和pH稳定性,在魔芋制备甘露低聚糖中具有较好的应用潜能。     

谷胱甘肽硫转移酶(GST)的固定化及酶学特性研究

对谷胱甘肽硫转移酶的固定化、游离酶和固定化酶的酶学特性进行了研究,通过试验,确定谷胱甘肽硫转移酶的最佳固定化条件为先用2％壳聚糖吸附酶,然后再加戊二醛交联,交联用戊二醛浓度为1．2％,交联时间6h;游离酶的最适温度为45—55℃,最适pH值为6．5-7．0：固定化酶的最适温度为45-50℃,最适pH值为7．0;游离酶和固定化酶的最适酶促反应时间为30min。     

一株产甘露聚糖酶菌株的分离鉴定及酶的纯化与性质

【目的】筛选性能良好的产碱性甘露聚糖酶的菌株,对菌株进行多项分类鉴定,分离纯化所产甘露聚糖酶并进行性质研究。【方法】利用碱性魔芋粉培养基分离纯化产甘露聚糖酶的嗜碱菌,通过形态特征观察、生理生化测定、16S rRNA序列分析等实验确定菌株的分类地位。利用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和分子筛层析得到电泳纯的酶,分析了酶的最适温度、最适pH、温度和pH稳定性、NaCl以及金属离子等的耐受性。【结果】从我国内蒙古碱湖样品中分离得到一株产碱性甘露聚糖酶的菌株HMTS15,经过多项分类鉴定显示其是与Bacillus agaradhaerens DSM 8721不同的新菌株。菌株HMTS15所产的甘露聚糖酶反应的最适pH为10.0,最适温度75℃。【结论】多项分类结果鉴定菌株为Bacillus agaradhaerens HMTS15。该菌株产生的碱性甘露聚糖酶与同类其他来源的酶相比具有更好的热稳定性和pH适应性,有进一步的研究价值。     

β-甘露聚糖酶产生菌R10的产酶特性研究

分离出一株能利用魔芋飞粉和魔芋精粉生产β-甘露聚糖酶的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)R10。其摇瓶最适发酵条件为：魔芋飞粉1％(m／m),魔芋精粉2％(m／m),160r/min,37℃培养10h。实验结果表明β-甘露聚糖酶的最适作用温度为60℃,最适作用pH为6．0。魔芋葡甘露聚糖经酶降解后为一系列低聚糖。     

脱硫链霉菌LD48产硫化物氧化酶酶学性质研究

从土壤中分离出1株能氧化硫化物的耐热链霉菌菌株LD48(Streptomyces sp.LD48),对其所产的硫化物氧化醇粗酶液的酶学性质进行了较系统的研究。结果表明:该酶的最适反应温度是37℃以上;该酶极耐高温,在50-100℃范围内处理6h,未见酶活损失,甚至高压蒸汽灭菌(0.1MPa)30min后,亦未见酶活损失;其最适反应体系pH为8.0-10.6;该酶耐受pH范围较广,在pH为3-7时比较稳定,在pH11-13的强碱性环境中仍能保持70%的活性,但不耐受pH8-10的碱性环境;Mn2 对该酶有激活作用,EDTA则100%的抑制,而酶对Al3 、Mg2 、Ca2 及Zn2 等几种金属离子不敏感。     

枯草芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶的产生及性质

由土壤中分离出一株产中性β甘露聚糖酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),编号BM9602。该菌在液体培养条件下,产生中性β甘露聚糖酶。多糖能作为碳源,而单糖不能作为碳源;有机氮源优于无机氮源。产酶最适培养基组成：魔芋粉4%,牛肉蛋白胨和酵母膏各1%。产酶最适培养条件：培养基起始pH85,35℃,振荡培养36〖KG*3]h。以槐豆胶为底物,培养滤液中性β甘露聚糖酶活力为96IU/mL。酶在pH50～100和50℃下稳定;作用最适条件为pH60和50℃;水解魔芋粉和槐豆胶均产生寡聚糖。     

枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶补料发酵及其特性研究

采用正交实验设计对枯草芽孢杆菌产 β-甘露聚糖酶的培养基组成和培养条件进行优化 ,在此基础上进行摇瓶补料发酵 ,酶活达223.47U/mL ,较未补料的酶活提高了 32 90 %。酶反应的最适pH为 6 5 ,最适温度为 70℃ ;该酶在pH 5.0～10.0和 70℃以下稳定。水解魔芋胶产物主要为二糖以上低聚糖。     

β-甘露聚糖酶产生菌的分离、鉴定及产β-甘露聚糖酶最适条件的研究

以采集的土壤样品为试验材料,经过富集培养及分离纯化,筛选出2株产β-甘露聚糖酶的菌株.采用摇瓶培养分别测定其酶活力,其中1株菌株酶活力较高,酶活力达50.36 U/ml.生理生化性质鉴定及16S rDNA序列相似性结果表明该菌为假单孢菌(Pseudomonas sp.).产酶的最适条件研究发现,1 g/100 ml玉米粉,2 g/100 ml魔芋粉,pH6.0,32℃为最优产酶条件,酶活力达185.37 U/ml,是优化前的3.68倍.该菌产酶迅速,培养12 h后已达产酶高峰.粗酶的性质研究发现,该酶是一种酸性的甘露聚糖酶,作用的最适pH为4.0,最适反应温度为55℃;该酶的稳定性较好,在pH4.0～6.0、温度为40～55℃保持较好的稳定性.     

芽孢杆菌β-甘露聚糖酶基因的克隆及表达

从新疆极端干燥环境土壤样品中筛选到具有高β-甘露聚糖酶活性的芽孢杆菌(Bacillus sp.MX).运用PCR技术从该菌基因组中克隆得到β-甘露聚糖酶基因,连接到表达载体pET-28a上.在大肠杆菌BL21中高效表达的基因产物经亲和层析纯化,SDS-PAGE凝胶电泳分析显示该蛋白的相对分子质量为41 kD.酶学性质分析表明该酶在25～95℃,pH3.0～9.6范围内均具有酶活.最适作用温度55℃和pH值5.0,酶比活力为4 572 U/mg.在最适pH 5.0,高温85℃和95℃分别处理10min后,该酶相对酶活力仍保持51%和34%,显示β-甘露聚糖酶具有较好的耐酸性和热稳定性.     

Armillariella tabescens EJLY2098 β-甘露聚糖酶atMAN47的纯化及酶学性质分析

以魔芋精粉为唯一碳源, 对假蜜环菌(Armillariella tabescens) EJLY2098进行培养, 诱导其产生β-甘露聚糖酶。经DEAE－阴离子交换层析后, 分离纯化出β-甘露聚糖酶atMAN47。酶学性质分析: 该酶分子量约为47 kD, 酶的最适反应温度为50°C, 在pH 5.0~6.5之间该酶的稳定性较好; Na+ 和Ba2+ 对该酶有激活作用, 用TLC对酶产物分析, 表明该酶为内切β-甘露聚糖酶。该酶为偏酸性的内切甘露聚糖酶, 适合发展为饲料的酶制剂, 具有良好的应用前景。     

新型辅酶依赖型立体选择性氧化还原酶性质的初步研究

为了进一步认识立体选择性转化用菌株近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)SYB-1的转化机理及其转化酶系的酶学特性,考察了该菌种来源的粗酶的辅酶依赖型及立体选择性,发现依赖于辅酶NADP ,该酶将(R)-苯基乙二醇氧化为β-羟基苯乙酮;而依赖于辅酶NADH,该酶不对称还原β-羟基苯乙酮为(S)-苯基乙二醇。在研究该粗酶酶学特性后发现该粗酶对5C的伯醇专一性较强;在包括仲醇和二元醇的手性醇中,对于二元醇的专一性较强;而在还原反应中对2-丁酮专一性较强。金属螯合剂及重金属离子会对该粗酶的活力产生抑制作用。该粗酶催化氧化的最适pH为8.0,最适温度为50℃;催化还原的最适pH为6．0,最适温度为40℃。     

枯草芽孢杆菌SA-22β-甘露聚糖酶的纯化及其特性

利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、SephadexG 75凝胶过滤和DEAE 5 2离子交换柱层析的方法 ,将枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶纯化了 30 75倍 ,同时 ,该酶比活达到 34780 5 6u mg ,收率达到 2 3 4 3%。利用SDS PAGE凝胶电泳和SephadexG 75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶的分子量分别为 38kD和34kD。实验发现该酶的最适pH为 6 5 ,在pH 5～ 10的范围内稳定 ;该酶最适温度为 70℃ ,在 5 0℃保温 4h后其活力不变 ,在 6 0℃保温 4h后剩余酶活为 74 2 % ,70℃的酶活半衰期为 3h。实验还发现Hg2 对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的Km 和Vmax值分别为 11 30mg mL ,4 76mg mL和 188 6 8(μmol·mL- 1 ·min- 1 ) ,114 94(μmol·mL- 1 ·min- 1 )     

碱性β-甘露聚糖酶的产生条件及一般特性

由我国内蒙乌杜淖碱湖中分离到一株能产β-甘露聚糖酶的嗜碱芽孢杆菌(AlkaliphilicBacillus sp,),产酶的最适培养基为(％)：槐豆胶2．0,谷氨酸钠1．5,K2HPO.O.1,MgSO47H2O 0.02,NaCl 8.0及Na2CO31.0。产酶的最适温度和pH分别为32℃和10.0,酶的最适反应纬度和PH分别别为70℃和9．5-1 0．0,该酶在pH9．0-10.0范国内稳定。酶对魔芋粉和槐豆胶的水解产物主要为寡糖。     

蕨菜多酚氧化酶的酶学性质

研究了蕨菜[Pteridium aquilinum (L．) Kuhn var．latiusculum (Desv．) Underw．]多酚氧化酶的动力学性质,结果表明：以邻苯二酚为底物,该酶最适pH为7．4,最适温度为25℃,60℃以上使酶迅速失活,动力学方程v=619．08[S]/(0．031 [S]),Vc、异Vc钠、NaHSO3、L-Cys可完全抑制酶活性,饱和NaCl能显著抑制酶活性,蔗糖、SDS对酶有激活作用。该酶能催化邻苯二酚、焦性没食子酸氧化,但对焦性没食子酸亲和力更强。     

球孢白僵菌Bb174固态发酵产几丁质酶产酶及酶学特征研究

对球孢白僵菌(Beauveria bassiana)Bb174产几丁质酶进行了固态发酵条件及酶学特征的研究．结果表明,以4：1麸皮：蚕蛹粉、蛋白胨1g·L^-1作为产酶最适培养基,在7．5g培养基中接种3ml液态种子,自然pH下28℃培养2d,酶活可达最高,为126U·g^-1(干培养基)．粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH5．0,在30-70℃保温1h,得半失活温度48℃．在30--40℃、pH4～6范围内,酶的性质最稳定．根据Lineweaver-Burk作图法,得到该酶的动力学参数Km为0．52mg·ml^-1,Vm为0．7△E680·h^-1．     

一株全基因合成耐热甘露聚糖酶的表达及酶学性质分析

根据已知耐热甘露聚糖酶ManAd3氨基酸序列与毕赤酵母密码子使用偏爱性,设计并合成了甘露聚糖酶ManA全基因(Accession No.KJ806637),与表达载体pPIC9k重组后,转化毕赤酵母GS115,筛选获得重组菌株ManA-GS115。该重组菌株发酵产物经SDS-PAGE鉴定,其中甘露聚糖酶ManA含量达到电泳纯级别,分子量大小约为30 kDa。其酶学性质检测结果显示该酶最适反应温度为75℃,最适反应pH为6.0,比活力高达3200 IU/mg,并且在75℃下处理30 min仍能维持90%以上相对酶活力。该甘露聚糖酶ManA表达量较高,在偏酸性环境下仍能够维持较高的相对酶活力,且热稳定性显著,可广泛应用于食品、酿造、饲料、纺织和医药等工业领域。     

一株全基因合成耐热甘露聚糖酶的表达及酶学性质分析

根据已知耐热甘露聚糖酶ManAd3氨基酸序列与毕赤酵母密码子使用偏爱性,设计并合成了甘露聚糖酶ManA全基因(Accession No.KJ806637),与表达载体pPIC9k重组后,转化毕赤酵母GS115,筛选获得重组菌株ManA-GS115。该重组菌株发酵产物经SDS-PAGE鉴定,其中甘露聚糖酶ManA含量达到电泳纯级别,分子量大小约为30 kDa。其酶学性质检测结果显示该酶最适反应温度为75℃,最适反应pH为6.0,比活力高达3200 IU/mg,并且在75℃下处理30 min仍能维持90%以上相对酶活力。该甘露聚糖酶ManA表达量较高,在偏酸性环境下仍能够维持较高的相对酶活力,且热稳定性显著,可广泛应用于食品、酿造、饲料、纺织和医药等工业领域。     

苯甲酸1，2-双加氧酶高活力菌株的筛选和发酵条件的研究

从176株细菌中,筛选出苯甲酸1,2-双加氧酶的高活力菌株假单胞菌(Pseudomonas)137。进行了该菌产酶的发酵条件试验。产酶的最适温度为32℃,最适起始pH为6．5—7．0。葡萄糖、麦芽糖和甘油对产酶有明显的抑制作用,苯甲酸钠对产酶有促进作用。氨态氮对菌体生长和产酶是必需的。琥珀酸钠是酶形成的有效诱导物,采用0．1％苯甲酸钠和0．2％琥珀酸钠培养基(pH6．5—7．0),于32℃振荡培养72小时,可获得高活力的苯甲酸1,2-双加氧酶,每克菌体酶活力可达5-8单位。     

高活力β-淀粉酶菌种的选育和发酵条件的研究

产β一淀粉酶的腊状芽孢杆菌(Bacillus cereus)Asl．447,通过紫外线、亚硝基胍和利福平的反复处理诱变,获得一株具有高活力β-淀粉酶的变异菌株M一3,产酶活力从74u／ml提高到5000—7000u／ml。牛肉汁液体培养基成分为：每100ml牛肉汁中加人蛋白胨1g,可溶性淀粉1g,酵母膏0．5g,NaCl 0．5g pH6．0。该变异菌的最适培养条件是：pH6—6．5 30℃48小时。酶的最适反应条件是：温度40℃,pH7 0,pH稳定范围是6—9,酶的抗热性较差,对可溶性淀粉水解率达85％以上。