抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析

制备抗麻痹性贝毒GTX2,3单克隆抗体。利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。免疫小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。将筛选的阳性细胞株制备腹水。获得三株稳定分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株F4、F10、G9。间接ELISA法检测F10细胞株腹水抗体效价为1.4×10^-5。半抗原GTX2,3与载体蛋白偶联后,作为免疫原,可制备高滴度的抗GTX2,3抗血清和单克隆抗体。该抗体对于藻毒素具有高特异性和高亲和力,可用于污染海产品的麻痹性贝毒的检测。     

乙氧基磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体的制备与鉴定

制备针对乙氧基磷酸酯类有机磷农药的单克隆抗体,以此为基础建立该类农药的快速免疫筛选检测方法．以二乙基磷酸乙酸为通用结构半抗原,分别使之与牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白共价偶联,合成免疫原和包被原并对其进行结构鉴定．偶联成功后的免疫原用于免疫Balb/c小鼠．将免疫成功小鼠的脾细胞与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选能稳定分泌抗乙氧基磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株．获得的小鼠腹水用辛酸-硫酸铵法纯化,所得纯化抗体以琼脂双扩散法鉴定其免疫球蛋白类型,间接竞争ELISA方法测定其对半抗原的灵敏度、特异性和亲和性．结果表明,该抗体分泌IgG1亚类的单克隆抗体,且与二乙基磷酸乙酸的亲和性较高(1.4×10⁷ L/mol),所得抗体对毒死蜱、对硫磷、丙溴磷、氧化乐果、除线磷、二嗪农、溴硫磷、辛硫磷、喹硫磷、三唑磷等农药有特异性反应．该检测技术可用于上述农药的快速定性或定量检测．     

抗微囊藻毒素单克隆抗体的制备与鉴定

构建了微囊藻毒素(Microcystin-LR , MC-LR)完全免疫原 MCLR-KLH, 免疫 BALB／ c 小鼠 , 采用杂交瘤技术制备抗 MCLR 单克隆抗体, 用间接竞争 ELISA 方法筛选抗体。经过 3 次克隆, 获得 2 株可稳定分泌抗 MCLR 单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 腹水效价达 1:8×104; IC50 为 0.81 ng⋅mL−1, 最低检测限 0.10 ng⋅mL−1, 亲和常数 3.8×108 L⋅mol−1,电泳结果显示抗体由 1 条重链和 1 条轻链组成, 与 MC-LR 同系物 MC-RR、 MC-YR 有较强的交叉反应, 与 MC-LW 有弱交叉性反应, 与河豚毒素无交叉反应。实验结果表明该抗体质量较好, 将在微囊藻毒素的快速检测、产生机理等方面具有较大的科研和应用价值。     

抗鸡新城疫病毒单克隆抗体的研制

我们于1984年开始以鸡新城疫病毒(NDV)强毒株F48E8为抗原,研究抗鸡新城疫病毒单克隆抗体,得到两株杂交瘤细胞系:NDV-Hy-23和NDV-Hy-33。经3次克隆后,这两株杂交瘤细胞系均能稳定地分泌高滴度抗鸡新城疫病毒特异抗体,培养上清中McAb的免疫荧光滴度为1:50～1:100,小鼠腹水中Mc-Ab的免疫荧光滴度为1:100,000～1:1,000,000。免疫扩散试验证明:NDV-Hy-23分泌小鼠IgG1型抗     

人生长分化因子15单克隆抗体制备、鉴定及药用价值初探

目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的m Ab,用间接ELISA检测m Ab腹水效价。结果:获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水m Ab效价可达1×104~1×109。结论:获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性m Ab,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。     

肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)单克隆抗体制备及检测方法的建立

该文通过制备出特异性高的单克隆抗体,初步建立了双抗夹心ELISA定量测定CK-MB的方法,为CK-MB试剂和原料的国产化奠定重要的基础。以购入的CK-MB抗原为免疫原,对随机选取的5只6～8周龄Balb/c健康雌性小鼠进行免疫。采用有限稀释法、间接ELISA、捕获ELISA方法,最终筛选出了3株能够稳定分泌抗体的细胞株,分别命名为2F6、2H3和2H9,其分泌的单克隆抗体亚型均为IgG3,腹水效价分别为1:102000、1:51200和1:102000。采用亲和层析法对3株杂交瘤细胞产生的小鼠腹水进行纯化,分光光度计测定纯化后的单克隆抗体2H3、2F6、2H9的浓度分别为5 mg/mL、6 mg/mL、6 mg/mL, SDS-PAGE结果表明,成功纯化了小鼠腹水,能够清晰地观察到轻链和重链两条带。Western blot结果表明,单克隆抗体2F6、2H3和2H9均能特异性识别CK-MB蛋白。间接ELISA及捕获ELISA方法检测显示,单克隆抗体2H3只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应;单克隆抗体2H9只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应;单克隆抗体2F6只与CK-MB及CK-MM发生捕获ELISA方法反应。稳定性实验表明, 3株杂交瘤细胞都能稳定分泌抗CK-MB单克隆抗体。高质量单克隆抗体的获得,为建立CK-MB检测方法奠定了基础。     

抗甲型肝炎病毒单克隆抗体的研究

我们于1984年开展研究抗甲型肝炎病毒(HBV)的单克隆抗体(McAb),得到了3株能连续传代,稳定分泌抗-HAAg的杂交瘤细胞系,抗体在组织培养上清液中的ELISA滴度为1:800～1:1600,腹水为1:10,000—1:100,000。 用ELISA方法检测三株杂交瘤细胞分泌的抗体与经免疫粘附血凝(IAHA),免疫电镜(IEM)证实的5份甲肝抗原和Abbott公司的甲肝抗原均产生特异性反应。但不与正常人     

幽门螺杆菌尿素酶单克隆抗体的研制及鉴定

应用杂交瘤技术 ,建立稳定分泌抗幽门螺杆菌尿素酶单克隆抗体 (HPU McAb)的细胞系。用纯化幽门螺杆菌尿素酶 (HPU)抗原加福氏佐剂免疫BALB/c小鼠 ,按常规方法进行细胞融合 ,以纯化HPU抗原包被 ,间接ELISA方法筛选 ,并经多次有限稀释法克隆。获得 6株抗HPU的杂交瘤 ,腹水效价达 1∶6 .4× 10 4～ 1∶2 .5 6× 10 5,特异性专一 ,并对其进行体内外连续传代 3个月 ,分泌抗体能力稳定。IgG亚类分型主要为IgG1型。该细胞系能稳定分泌幽门螺杆菌尿素酶单抗。     

鸡传染性贫血病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备

以原核表达的鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP3蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用间接ELISA方法检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株能稳定分泌抗CIAV VP3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为AG2、BC11、FG1。三株杂交瘤细胞株产生的细胞培养液上清和小鼠腹水的ELISA效价分别为2.5ⅹ102、1.5ⅹ102、1ⅹ102和2ⅹ106、1ⅹ106、2.5ⅹ105。与其它禽类病毒的交叉实验表明：这三株单抗具有良好的抗CIAV VP3蛋白特异性。该特异性单克隆抗体的研制成功为进一步研究VP3的生物学特性打下了基础。     

利用基因工程表达核心抗原转化的E抗原制备抗HBeAg单克隆抗体

采用两种变性剂将大肠杆菌基因工程高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)转化成为E抗原(HBeAg),其ELISA滴度达1:1000以上,而核心抗原滴度为零。用此抗原免疫小鼠,一次融合即获十四株抗乙型肝炎病毒E抗原的单克隆抗体。细胞培养上清抗体滴度为1:10-1:1000以上,腹水滴度为1:1000-1:100,000以上。十三株IgG、一株IgM。其中十株为抗HBeAg(b)决定簇,四株抗(a)决定簇。它们的敏感性及特异性与日本用血清E抗原制备的单克隆抗体效果完全一致。这是国内外首次应用基因工程表达核心抗原转化E抗原成功 地建立分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株。