高效液相色谱(HPLC)用于微生物中醌的分析

醌是微生物化学分类指征之一,它是原核生物原生质膜上的组份,在电子传递和氧化磷酸化中起重要作用。醌主要有两种类型:甲基萘醌和泛醌。在革兰氏阳性细菌和放线菌中主要合成甲基萘醌。醌作为分类指征的基础在于其异戊烯基侧链的长度和氢的饱和度。美国、日本、英国、德国等都先后开展了这方面的研     

C群脑膜炎球菌多糖-rP64K结合物的制备及免疫原性

用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(CDAP)活化C群脑膜炎球菌多糖(GCMP),以己二酰肼(ADH)作为连接子,与重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白64 KD(rP64K)在碳二亚胺的(EDAC)作用下结合,制备GCMP-P64K结合物。纯化后免疫NIH小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GCMPIgG抗体水平,并GCMP-TT结合物比较载体诱导的免疫抑制。所制备多糖-蛋白结合物(GCMP-P64K)保持了GCMP抗原特异活性,结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GCMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。     

VTIQ结合CDFI极大提高对乳腺BI-RADS 4类良恶性病变的诊断效能

为探讨声触诊组织成像定量技术(VTIQ)联合彩色多普勒血流成像(CDFI)在乳腺BI-RADS4类良恶性病变中的诊断价值,本研究选取66个经病理证实的BI-RADS 4类乳腺结节患者,根据VTIQ、CDFI图像资料,获取患者乳腺结节剪切波速度平均值及血流分级,分析良恶性结节之间剪切波速度平均值及血流分级的差异,分析VTIQ、CDFI单独使用及联合应用对乳腺BI-RADS 4类良恶性结节的诊断价值。研究结果显示66例病灶中良性32例,恶性34例,CDFI诊断灵敏度、特异度、准确度分别为85.3%、53.1%、69.7%;良恶性结节剪切波速度平均值分别为(3.14±1.06) m/s、(5.44±1.58) m/s,两者差异有统计学意义(p0.05),构建受试者工作特征曲线(ROC曲线),得到良恶性结节最佳截断点为4.07 m/s,以此诊断的敏感度、特异度、准确度分别为67.6%、87.5%、77.3%;乳腺恶性肿瘤中有38.2%(13/34)的病灶在弹性图像上出现周边高硬度彩色区域,呈"硬环征",以此诊断的敏感度、特异度、准确度分别为38.2%、93.8%、65.2%;VTIQ与CDFI联合应用诊断乳腺BI-RADS 4类良恶性结节的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值、阴性预测值分别为91.2%、93.8%、92.4%、93.9%、90.9%。结果表明VTIQ、CDFI对乳腺BI-RADS4类良恶性病变的诊断具有一定参考价值,弹性图像上硬环征的出现有助于乳腺恶性肿瘤的诊断,VTIQ与CDFI合应用明显提高对BI-RADS 4类乳腺良恶性病变的诊断效能。     

甲型副伤寒沙门氏菌LPS提取和O-SP纯化

提取甲型副伤寒沙门氏菌脂多糖(LPS)和纯化特异多糖(O -SP),为制备副伤寒结合疫苗奠定基础。采用大罐培养,菌体热酚法提纯去蛋白,乙醇分级沉淀冷冻离心去核酸,乙酸水解脱毒,高速离心,柱层析等方法纯化。纯化O SP核酸含量低于 1%,蛋白含量低于 1. 5%,O 乙酰基含量 0. 5~0. 8mmol/L,与甲型副伤寒超免血清形成明显沉淀线,核磁共振图谱(NMR)显示甲型副伤寒O SP的特征谱。建立了实用的纯化甲型副伤寒O -SP工艺。     

Frankia基因文库的构建及与根瘤菌结瘤基因区同源克隆的筛选

应用无色肽酶(Achromopeptidase)加溶菌酶系统破壁,提取分别来自色赤杨、细枝木麻黄和沙棘的3株代表性Frankia菌株的总DNA。以可在很多革兰氏阴性细菌中稳定复制和诱动转移的广谱寄主性质粒pLAFR1为载体,构建了其基因组文库。基于经EcoRI酶切后的Frankia总DNA中有与根瘤菌结瘤基因同源性的片段,以豌豆根瘤菌结瘤基因为探针,通过菌落原位杂交对文库进行了筛选,较强杂交克隆经斑点杂交复筛,初步得到了几个阳性克隆,为进一步研究Frankia的结瘤基因及有关共生固氮的其它基因奠定了基础。     

环状芽孢杆菌几丁质酶基因序列分析、表达和生物活性测定

真菌病害一直是影响作物的主要病害之一 ,每年造成巨大经济损失。几丁质酶可水解许多病原真菌细胞壁所含有的主要成分—几丁质 ,是研究得最多的抗真菌蛋白质。许多几丁质酶基因已从微生物中克隆到 ,芽孢杆菌是一类重要的几丁质酶产生菌。环状芽孢杆菌可产生并分泌多种多糖降解酶类 ,包括几丁质酶、β 1 ,3 葡聚糖酶、β 1 ,6葡聚糖酶和半纤维素酶[1] 。Ｗａｔａｎａｂｅ克隆了环状芽孢杆菌ＷＬ 1 2菌株的几丁质酶基因ｃｈｉＡ和ｃｈｉＤ ,对该几丁质酶基因的结构和功能进行了深入研究[2～ 4 ] 。我国的陈三凤克隆了黄杆菌的几丁质酶基因 ,…     

幽门螺杆菌动物感染模型的建立及较适感染剂量的确定

尝试在SPF级KM鼠胃内定植HP ,并确定其定植的较适感染菌量。采用幽门螺杆菌 (HelicobacterPylori,HP)SydneyStrain 1株 (简称SS1)攻击 ,连续 5次 ,分别于最后一次感染后第 2、4、8、12、16、2 6周处死小鼠 ,取胃粘膜组织分别进行病理切片 ,尿酶试验、涂片镜检和HP分离培养。结果　试验组动物HP定植率可达 10 0 % ,对照组未有定植 ,感染量越大越易定植 ,定植菌量随时间的延长有增加的趋势 ,定植时间可达 2 6周 ,12周龄小鼠感染的较适菌量 5× 10 8。病理组织学检查显示 ,小鼠有轻至中度浅表性胃炎改变 ,随时间延长有加重趋势 ,对照组未见炎症反应。HPSS1株能在SPF级KM鼠胃内较长期定植 ,并能引起胃部炎性病变     

伤寒结合疫苗免疫原性和动物安全性研究

伤寒V i多糖与白喉类毒素(DT)蛋白以己二酰肼(ADH)作连接臂,在碳二亚胺(EDAC)的作用下结合成V i-DT结合物,进行抗原性、免疫原性和动物安全性试验。结果显示,3批结合物抗体阳转率均为100%,加强免疫一针后GMT值明显升高(p<0.001),免疫剂量以0.75μg/只抗体增长最为明显,甚至以低剂量0.375μg/只仍能获得较高的抗体滴度,多项动物试验证明该结合物是安全的。显示V i-DT结合物有很好的动物安全性和免疫原性,为临床试验提供实验室依据。     

共生固氮放线菌研究的进展

生物固氮是当前生物科学研究的重要内容,弗兰克氏放线菌(Frankia)与其它固氮生物相比,具有独特的优点:它具有广泛的寄主范围和与根瘤菌相似的固氮能力.并且能形成防止固氮酶受氧损伤的专门结构——顶囊(vesicle).因此,对该类放线菌的研究受到了普遍的重视,被认为是发展新的共生体系的希望.本文就近年来国内外学者在弗兰克氏菌的形态学、生理学和遗传学等方面的研究成果作一概述.     

幽门螺杆菌尿素酶单克隆抗体的研制及鉴定

应用杂交瘤技术 ,建立稳定分泌抗幽门螺杆菌尿素酶单克隆抗体 (HPU McAb)的细胞系。用纯化幽门螺杆菌尿素酶 (HPU)抗原加福氏佐剂免疫BALB/c小鼠 ,按常规方法进行细胞融合 ,以纯化HPU抗原包被 ,间接ELISA方法筛选 ,并经多次有限稀释法克隆。获得 6株抗HPU的杂交瘤 ,腹水效价达 1∶6 .4× 10 4～ 1∶2 .5 6× 10 5,特异性专一 ,并对其进行体内外连续传代 3个月 ,分泌抗体能力稳定。IgG亚类分型主要为IgG1型。该细胞系能稳定分泌幽门螺杆菌尿素酶单抗。