两个缺陷型TMV粒子在烟草中的互补表达

根据对ＴＭＶ高效复制和基因表达的顺式作用元件的分析,在体外重组包装了２个缺失型ＴＭＶ粒子：ＴＭＶＲＰ和ＴＭＶＣＰ。前者缺失了ＴＭＶ外壳蛋白ＣＰ基因的３′端及后序区域,后者缺失了大部分复制酶基因。把两者分别或共同电击感染烟草原生质体：１．用ＣＰ抗体进行免疫印渍检测,单独感染的原生质体内的ＣＰ在１６小时内无增加,而在共同感染的原生质体内,ＣＰ在感染２小时后就开始明显增加。２．用ＲＴ一两次ＰＣＲ法专一地检测新生负链ＲＮＡ的合成情况,在单独感染的原生质体内没有检测到,但在混合感染的原生质体内在感染１小时后就检测到ＣＰ基因特异的负链ＲＮＡ的形成,并用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交得到进一步验证。这些结果表明,复制酶缺失型ＴＭＶＣＰ内的ＣＰ基因不能表达,但可以在ＴＭＶＲＰ存在时,通过其所表达的复制酶互补作用得到复制从而有效表达．     

美洲拟鲽抗冻肽基因在E.coli中的表达

动物抗冻肽(AFP)能降低动物体液冰点而使其能在寒冷的环境中生活,因而AFP在防寒抗冻方面有较大的应用潜力。根据美洲拟鲽AFP基因的cDNA序列,人工合成了AFP及其含前导序列的proAFP的cDNA,并构建成pAFP及pPAFP原核表达载体。由于AFP表达量少且蛋白分子很小,用SDS-蛋白电泳难以检测。为了提高检测的灵敏度,把报道基因CAT的cDNA按读码框连接到AFP的3′末端,构建成融合基因表达载体pAFP/CAT和pPAFP/CAT。在大肠杆菌表达系统JM109(DE 3)中诱导表达。结果表明,融合蛋白AFP/CAT和proAFP/CAT具有明显CAT活力。这表明AFP和proAFP可以在大肠杆菌中表达。