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应用鼠-鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α2a型干扰素(rHu-IFN-α2a)单克隆抗体细胞系1A5、1B5和27A7。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价1∶256~1∶4096,腹水1∶26×105~1∶27×108。Ig亚类测定,1A5和1B5McAb为IgG1,27A7为IgG2a。三系McAb均识别rHu-IFN-α2a和-α2b,与rHu-IFN-α1和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ELISA试验,三系McAb分别针对rHu-IFN-α2a上三个不同表位。同McAb建立双抗体夹心ELISA对rHu-IFN-α2a和-α2b均可检测到150pg/ml,约10IU/ml的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率95%以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制rHu-IFN-α2a提纯到97%以上纯度。平均回收率为:1A5单抗柱902%,1B5单抗柱953%,27A7单抗柱947%。比活性平均值依次为194×108IU/mg,197×108IU/mg和164×108IU/mg,残余鼠IgG量均符合规程要求。纯化rHu-IFN? 相似文献
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在大肠杆菌中提高人α1b型基因工程干扰素的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将人α1b型干扰素(IFN-α1b)基因插入带有原核增强子样序列的新型载体Pbv322,使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体,达到1.6×108u/L培养液。重组质粒的特点是:含增强子序列X,trp启动子控制。利用DEAE-Sepharose、CM-Sepharose离子交换层析及单克隆抗体亲和层析纯化IFN-α1b,获得了电泳纯产品,其比活性为2×107u/mg,分子量为19kDa。此外,用Pat153代替Pbv322,构建了带有和不带有X序列的两种表达载体,平行对比表明增强子X序列可以将IFN-α1b表达提高4倍 相似文献
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不同功能位点介导α干扰素的免疫调节和中枢镇痛作用 总被引:6,自引:0,他引:6
细胞因子α干扰素(IFNα)具有中枢镇痛作用。抗内源性阿片肽血清与IFNα能发生明显的交叉反应,提示IFNα与内源性阿片肽之间存在着共同的抗原决定基。采用基因定点突变技术,获得系列IFNα突变体,并分别测定其免疫学活性和镇痛能力。结果显示,IFNα突变体Y129S-IFNα免疫学活性显著下降,但仍然保留了很强的镇痛能力,阿片受体拮抗纳洛酮能够阻断Y129S-IFNα的镇痛作用。实验结果表明,IFN 相似文献
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基因工程干扰素(IFN—α2b)抗柯萨奇和单纯疱疹病毒效应 总被引:1,自引:0,他引:1
本文采用微量细胞病变抑制法在Wish 及Vero 细胞上研究了IFN—α2b 抗CoxB3 型及HSV—1 型和HSV—Ⅱ型病毒的作用。结果表明,安达芬和干扰能IHNα2b 在Wish 或Vero 细胞上500IU/ml 分别可以抗3log4 或1000TCID50 ,50IU/ml 可以抗2log4 或100 TCID50 ,5IU/ml 可以抗1log4 或10 TCID50 的CoxB3 型或HSV—1 型和HSV—Ⅱ型病毒感染细胞。提示安达芬和干扰能均显示明显的抗病毒效应,且二者无明显差别 相似文献
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重组人a2b型干扰素的纯化与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用单克隆抗体亲和层析一步纯化法对大肠杆菌表达的重组人a2b型干扰素进行了纯化,然后利用凝胶过滤高压液相层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和N端25个氨基酸的序列测定等方法对纯化产品进行了鉴定。表明一步纯化的IFN-a2b达到95%以上的统一计划,其比活性为2.54×10×8u/mg.但重组IFN-a2b产品N端不均一,含有约30%的去Met分子和约70%的带Met分子。从蛋白质序列的水平上证实,本 相似文献
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人IL-2/IFNα2b融合基因在肝癌细胞中靶向表达 总被引:5,自引:0,他引:5
根据细胞因子之间协同作用的特点,采用重组 D N A 技术设计并构建了人 I L 2 与 I F Nα融合基因,并用肝癌组织特异的 A F P增强子/ A L B启动子调控融合基因在肝癌细胞中的靶向表达.实验结果表明,克隆的 E A F P P A L B联合转录调控序列能调控细胞因子基因在 A F P阳性人肝癌细胞中靶向表达, I L 2/ I F Nα2b 融合基因的表达水平与感染肝癌细胞的 A F P表达水平呈正相关性.实验证明表达的融合蛋白具有 I L 2 和 I F N 两种生物学活性的细胞因子.这可能为肝癌基因治疗开辟新途径. 相似文献
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用人重组肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α,TNF-α)和人天然α干扰素(Interferon-α-,IFN-α)在人胚胎肺纤维母细胞(HEF)和Hep-2细胞系上对常见呼吸道病毒所致细胞病变抑制进行比较观察。病毒包括不同型别的腺病毒5株,单疱病毒Ⅰ型(HSV-I)1株,鼻病毒1株,仙台病毒1株,VSV1株。结果提示TNF-α和IFN-α均具有广谱抗病毒活性。TNF-α的抑毒作用能被TNF-α申抗和IFN-β单抗完全去除,被IFN-α单抗部分去除TNF-α的抗病毒效应。TNF--α中和试验的结果提示:TNF抗病毒活性仍为IFN-β诱生所介导。 相似文献
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目的和方法:本文采用人妊娠6~8周胎盘组织块的体外培养方法,通过检测干扰素免疫活性和抗病毒活性研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对人滋养层干扰素(IFN)分泌的影响。结果:TNFα可显著促进人滋养层IFNα的分泌,并呈剂量和时间依赖关系。同时各浓度的TNFα还可促进βHCG的分泌,并呈一定的剂量依赖关系。此外,我们还证明INFα可显著抑制人滋养层细胞的生长,而TNFα则无明显作用。结论:TNFα可通过促进人滋养层干素α和βHCG的分泌,从而影响人胎盘的功能活动 相似文献
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用磷酸钙——DNA共沉淀法, 将pREP8IFNγ真核表达质粒或/和ρREP8IL2 真核表达质粒直接注射至经大剂量化疗后的小鼠腹腔内, 成功地转染腹腔巨噬细胞(Mφ)。IL2 基因和IFNγ基因联合转染Mφ较IL2 或IFNγ基因转染Mφ, 其基因表达产物水平更高, 显著地刺激脾脏增生, 增强淋巴细胞的增殖, 增强腹腔Mφ的细胞毒活性, 促使腹腔Mφ分泌白细胞介素1 (IL1)、肿瘤坏死因子(TNF) 和NO。结果表明, 双基因转染效果优于单基因转染, IL2 和IFNγ基因联合转染Mφ更有助于由放疗、化疗所致受损的免疫功能恢复。 相似文献
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采用荧光染料 Di B A C4(3), Fluo3/ A M 和 S N A L F Calcein/ A M 分别标记小鼠骨髓基质细胞( B M S C),在激光扫描共聚焦显微镜下直接监测重组人白细胞介素1β( I L1β)刺激后细胞膜电位,细胞内游离 Ca2+ 浓度和胞浆 p H 的实时动态变化. 结果发现: I L1β加入测定体系后浓度依赖性地引起 B M S C 膜电位的迅速改变. 低浓度时发生去极化反应,高浓度时发生超极化反应. 非受体方式作用的 I L1β肽段 163171 对膜电位无影响. I L1β不影响细胞内 Ca2+ 的浓度和胞浆p H. 研究表明膜电位的变化为 I L1 受体后早期事件,它与细胞内 Ca2+的浓度和胞浆 p H 的调节无关. 相似文献
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本实验用人重组r-干扰素(rhu-IFN)作用HEP-2细胞后HLA-DR抗原和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的检测来探讨r-干扰素对HEP-2细胞HLA-DR抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体CR3/43(抗HLA-DR)和Ki-67(抗PCNA)。以链霉素一生物素技术(LSAB)检测HEP-2细胞HLA-DR抗原和PCNA表达,结果显示:r-IEN诱导HLA-DR抗原和抑制PCNA表达其强弱与r-IFN剂量有关。资料提示:r-IFN不仅对HEP-2细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。 相似文献
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TNF—α在PMA和IFN—γ诱导U937细胞生长和分化过程中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了佛波酯(PMA)和γ-干扰素(IFN-γ)对U937细胞生长和分化的调控作用及其机制。PMA和IFN-γ能以剂量依赖的方式诱导U937细胞向成熟单核/巨噬细胞样细胞分化,同时抑制其细胞的生长。实验发现PMA和IFN-γ可诱导U937细胞表达TNF-α特异性mRNA和蛋白质。U937细胞培养中加入特异性抗TNF-α抗体可以抑制PMA和IFN-γ诱导U937细胞的分化和生长。这说明内源性的T 相似文献
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为探讨Th1 反应如白介素2 (IL-2) 产生在尖锐湿疣(CA) 发病及消退中的作用。本实验采用逆转录——聚合酶链反应(RT-PCR) 技术检测了CA患者皮损组织IL-2 的基因表达, 实验分为三组: 正常对照组(n= 10), 单纯病例组(n= 18) 及γ- 干扰素(IFN-γ) 诱导组(n= 6)。结果发现正常皮肤组织未检测到IL-2 m RNA, 在18 例单纯病例的CA患者有2 例皮损IL-2 m RNA阳性, 6 例CA患者注射IFN-γ前局部皮损未检测到IL-2 m RNA, 而在皮损内注射IFN-γ72 小时后有4 例阳性。研究结果提示了IFN-γ可诱导Th1 应答, Th1 应答在抵抗人类乳头瘤病毒(HPV) 感染及清除HPV中可能起着重要作用, 为临床应用IL-2 及IFN-γ治疗CA提供了理论依据。 相似文献
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神经肽Y可减轻大鼠血管α1肾上腺素受体亚型的脱敏作用 总被引:2,自引:0,他引:2
以离体大鼠主动脉与肾动脉对去甲肾上腺素(NE)的收缩反应分别代表α1B与α1A亚型肾上腺素受体(AR)激动时的生物学效应。血管经NE10μmol/L温育2h后,α1-AR介导收缩效应的敏感性显著降低,其中α1B亚型AR的脱敏程度显著大于α1A亚型AR。上述经NE温育的血管,在神经肽Y(NPY)0.5μmol/L存在时,α1B亚型AR的脱敏程度显著减轻。NE收缩主动脉的两时相分析表明,脱敏时主要表现为相性收缩时间延长,收缩幅度降低,而紧张性收缩并无显著改变;在NPY存在时上述相性收缩改变消失。提示α1B亚型AR脱敏的机制主要与细胞内Ca2+动员减慢减少有关。 相似文献
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干扰素α—2b的高效表达及原核增强子效应研究 总被引:5,自引:0,他引:5
本文利用含原核增强序的表达载体pBV321对干扰素α-2b片段进行了高效表达,获得了比原表达载体高10倍的抗病毒活性,经纯化获得了电泳纯的表达产物。此外,还利用pAT153代替pB321,构建了带有和不带有原核增强序列的两种表达干扰素α-2b的质粒,对原核增强序列的增强效应进行了比较,结果表明原核增强序列px使干扰素α-2b的表达活性提高了14倍。 相似文献
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目的和方法:本研究采用离子探针Fura2/AM 结合计算机图象分析技术,并通过施加NO合酶抑制剂LNNA和NO的作用靶———鸟苷酸环化酶(GC)的抑制剂美兰(Methylene Blue;MB),观察经培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞和平滑肌细胞中的[Ca2+]i 在低氧作用后的变化以及与有关血管舒张因子NO和cGMP之间的关系。结果:低氧时大脑微血管内皮细胞和平滑肌细胞内的Ca2+ 浓度有所下降,变化幅度的大小与低氧的程度及低氧作用的时间有关,且可以被LNNA和MB所抑制。结论:低氧时大脑微血管的舒张反应与NO的产生有关,NO通过细胞内的多种机制,最终使得胞内Ca2+ 下降而导致血管舒张 相似文献