酵母菌的分离培养及发酵实验方法

通过分离培养得到纯种酵母菌并对其进行观察区分;用几种酵母菌进行糖发酵实验,比较酵母菌对不同糖的利用能力;利用培养所得到的酿酒酵母和假丝酵母酿造葡萄酒,测量葡萄酒的酒精度数,对比确定哪一种酵母菌的酿酒效果更好、产酒率更高。通过平板划线法及稀释涂布法获得纯种的酵母菌种,同时结合菌落形态观察法初步区分酵母菌的种类;通过压滴法区别酵母菌的细胞形态;通过美蓝染色法鉴别酵母菌的死活;采用穿刺接种法分别将酵母接种在带有指示剂的半固体培养基上。3种实验酵母都不发酵乳糖,酿酒酵母的发酵蔗糖和葡萄糖的能力远不及红酵母和假丝酵母。酿酒酵母所酿造出的葡萄酒酒精度数高于假丝酵母。     

“探究酵母菌细胞呼吸方式”的实验探讨

从酸性重铬酸钾溶液的配制、酵母菌培养液与葡萄糖浓度的选择、实验装置的改进等方面对“探究酵母菌细胞呼吸方式”的实验进行优化，进一步指出实验所存在的问题，以期共同改进。     

云南星云湖酵母菌多样性及产类胡萝卜素的评价

【背景】星云湖属云南高原湖泊,对其酵母菌的多样性研究和产类胡萝卜素菌株的筛选有助于开发利用星云湖酵母菌资源。【目的】研究云南星云湖酵母菌群落结构多样性,筛选和评价产类胡萝卜素活性菌株。【方法】采用膜过滤平置培养对星云湖水样进行酵母菌分离;应用26S rRNA D1/D2区域序列分析和形态特征及生理生化指标相结合,对分离获得的酵母菌进行鉴定;运用软件BIO-DAP分析酵母菌类群的多样性;采用酸热法提取类胡萝卜素,紫外分光光度计测定类胡萝卜素含量。【结果】从星云湖湖水中分离得到797株酵母菌,鉴定为18个属37个种。胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)和Naganishia albida是优势种,分别占总菌株数的36.64%和28.86%;有28株酵母菌类胡萝卜素产量可达200μg/g细胞干重以上;有4株类胡萝卜素产量可达300μg/g细胞干重以上;粘红酵母(Rhodotorula glutinis) 2株、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)和Rhodosporidiobolus fluviale各1株。【结论】云南高原湖泊星云湖的酵母菌具有丰富的多样性,湖泊的营养化程度以及地理差异影响酵母菌群落的结构;红冬孢酵母属(Rhodosporidiobolus)和红酵母属(Rhodotorula)是星云湖类胡萝卜素产量可达300μg/g细胞干重以上的主要类群。有进一步开发研究的价值。     

“探究酵母菌细胞呼吸方式”实验的改进

"探究酵母菌细胞呼吸方式"是普通高中生物学必修一中的一个重要探究实验。该实验利用酵母菌属于兼性厌氧菌的这一特性,通过设计和进行对比实验,让学生直观感知了酵母菌细胞呼吸的方式,是一个培养学生的科学探究能力和创造性思维能力的经典实验。人教版和中图版对该实验的处理方式方法不同,人教版是通过探究酵母菌在有氧和无氧条件下产物的不同来说明酵母菌的呼吸方式;中图版则是通过探究酵母菌在有氧和无氧条件下能量的释放不同来说明的。本文以人教版为例说明。     

南极假丝酵母脂肪酶B的酿酒酵母表面展示及其催化己酸乙酯的合成

从南极假丝酵母(Candida antarctica)基因组克隆得到南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B, CALB)全基因片段, 利用连接肽celA Linker将CALB与酿酒酵母细胞表面展示蛋白a-凝集素的C端连接融合, 构建表面展示载体pICAS-celAL-CALB, 转化酵母后获得重组酵母菌Saccharomyces cerevisiae pICAS-celAL-CALB。该重组酵母菌经葡萄糖诱导表达及分析, 表明CALB已在酿酒酵母细胞表面成功展示, 水解活力达26.26 u/(g·dry cell)。重组酵母菌经冻干能有效地实现在非水相中全细胞催化己酸和乙醇酯化合成己酸乙酯。反应物己酸与乙醇的摩尔比为1:1.25, 己酸乙酯的产率为98.0%, 具有较好的操作稳定性。     

南极假丝酵母脂肪酶B的酿酒酵母表面展示及其催化己酸乙酯的合成

从南极假丝酵母(Candida antarctica)基因组克隆得到南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B, CALB)全基因片段, 利用连接肽celA Linker将CALB与酿酒酵母细胞表面展示蛋白a-凝集素的C端连接融合, 构建表面展示载体pICAS-celAL-CALB, 转化酵母后获得重组酵母菌Saccharomyces cerevisiae pICAS-celAL-CALB。该重组酵母菌经葡萄糖诱导表达及分析, 表明CALB已在酿酒酵母细胞表面成功展示, 水解活力达26.26 u/(g·dry cell)。重组酵母菌经冻干能有效地实现在非水相中全细胞催化己酸和乙醇酯化合成己酸乙酯。反应物己酸与乙醇的摩尔比为1:1.25, 己酸乙酯的产率为98.0%, 具有较好的操作稳定性。     

固定化对酵母细胞发酵产ATP能力的影响

通过试验对酵母菌细胞的固定化方法及固定化酵母细胞在发酵生产ATP方面的应用进行了探讨。综合固定化颗粒的性能指标(粒径、弹性和机械强度)和发酵产ATP的能力,通过正交试验对酵母菌细胞的包埋条件进行了优化,确定了固定化酵母细胞的较优组合为聚乙烯醇3.5%、海藻酸钠2%、CaCl23%及交联时间6h,发酵后ATP含量最高,达到0.716g/L。进一步发酵条件的试验证实,固定化能提高酵母菌细胞对温度适应范围,延长发酵生产周期,从而提高菌体的利用率。     

“酵母菌发酵实验”改进

通过对限制酵母菌发酵的温度、酵母菌浓度、蔗糖浓度、液体量等限制因素进行研究,通过正交实验和方差分析发现,温度和液体量对酵母菌发酵影响非常显著,酵母菌浓度影响显著,而蔗糖浓度影响不大,并得出酵母菌发酵实验的最佳条件为:蔗糖浓度5%,酵母菌浓度3%,温度50℃,液体量300 m L,发酵所需时间为4 min 30 s。同时对实验装置进行了改进,使得检测二氧化碳更加简便。用酸性重铬酸钾检测酒精使整个实验更具科学性。     

PML-C与GINS2蛋白相互作用的胞内验证

目的 通过胞内实验验证PML-C与GINS2蛋白之间的相互作用.方法 将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PML-C和文库蛋白质粒pACT2-GINS2共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证二者之间的相互作用.结果 pGBKT7-PML-C诱饵蛋白质粒和pACT2-GINS2靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆生长;pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀与HA-PML-C相互作用的蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行Western印迹检测,可以检测到Myc-GINS2蛋白.结论 利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术在胞内验证了PML-C与GINS2间存在相互作用.     

絮凝基因(FLOIG)的序列测定及分析

虽然酵母细胞絮凝的确切机制至今尚无定论,但已克隆了多个与絮凝相关的基因,如FLOI、FLO5、FLO11等[1-3].这些基因的表达可以赋予非絮凝酵母细胞以絮凝能力.酵母细胞的絮凝特性在酿造工业、固定化酶、精细化工和物生制药等领域具有广泛的应用价值[4,5].从一株强絮凝酿酒酵母菌株中克隆到一个约4.3kb的NDA片段,酵母转化实验证明该DNA片段能够赋予非絮凝酵母菌株以絮凝能力[6].本文简要报道对该DNA片段进行序列测定和分析的结果.     

重金属离子对酵母影响的研究

本文探讨了培养基中不同浓度的重金属离子（Ｃｒ^＋２、Ｐｂ^＋２）对酵母的影响。实验结果表明,重金属离子的浓度越高,酵母菌的一系列生理生化指标：如每个培养皿的菌落数、细胞直径、蛋白质、核酸及可溶性糖的含量都有不同程度的降低。     

云南5个地区戟叶酸模花中酵母菌和类酵母的多样性

[目的]研究云南5个地区(晋宁、祥云、程海、泸沽湖、洱海)的戟叶酸模(Rumex hastatus)花中的酵母菌和类酵母.[方法]采用涂布平板法对5个地区的戟叶酸模花中酵母菌和类酵母进行分离,通过26S rDNA Dl/D2区域序列分析并结合形态观察对分离获得的酵母菌和类酵母进行鉴定;采用胞外酶定性筛选培养基进行产酶筛选;用苏丹黑B染色法筛选产油脂菌株.[结果]从戟叶酸模花中分离得到82株酵母菌和99株类酵母;82株酵母菌鉴定为6个属16个种和1个潜在新种,99株类酵母鉴定为短梗霉属(Aureobasidium)的普鲁兰类酵母(A.pullulans)及3个变种;戟叶酸模花中的优势属是类酵母短梗霉属,其次为红酵母属(Rhodotorula)和隐球酵母属(Cryptococcus);筛选到134株具有产胞外酶活性和83株产油脂的酵母菌和类酵母.[结论]研究结果显示5个地区的戟叶酸模花中酵母菌和类酵母种类多样性较为丰富,并具有产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶和油脂的特点,有潜在的应用前景.     

马蜂内生酵母种群结构分析及Metschnikowia pulcherrima的分离和鉴定

本文以新疆石河子西公园的马蜂Vespa velutina为研究对象,结合基于26S rDNA的高通量测序技术和稀释平板分离的方法,研究马蜂内生酵母物种组成及其多样性.结果 显示,马蜂体内包含Cutaneotrichosporon、Torulaspora、Pichia等10个属内生酵母;含有Cutaneotrichosporon cutaneum、Torulaspora delbrueckii、Sporidiobolales sp.等10种内生酵母.Shannon指数、Simpson指数、ACE指数和Chao1指数分别为0.619215、0.681265、84.38456和76.利用稀释平板分离方法分离获得一株内生酵母,结合菌落和细胞形态观察、生理生化检测以及26S rDNA分子鉴定等方法,该酵母菌株为美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima.本研究可为后续的内生酵母菌功能研究及酵母菌资源开发与利用奠定基础.     

三种拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的抑制效果

从苹果果实上分离获得的50余种酵母菌中筛选出了能够有效地抑制苹果青霉病(Penicilium expansum Link)的丝孢酵母(Trichosporon pullulans (Lindner.) Diddens and Lodder)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii (Kuffer.) Skinner)和粘红酵母(Rhodotorula glutinis (Fresen.) F. C. Harrison).其中,抑病效果最好的T. pullulans 是一种用于采后果实生物防治的新型拮抗菌.研究了这三种拮抗菌不同浓度处理和外加营养物质以及与钙配合使用对苹果青霉病的抑病效果.实验结果表明:酵母菌浓度越高,抑病作用越强;外源营养物质的加入削弱了酵母菌的拮抗效果;在C. laurentii的细胞悬浮液中加入0.18 mol/L 的CaCl2能显著提高其抑病能力,但增加CaCl2 对T. pullulans 和R. glutinis 的抑病效果却没有明显作用.     

三种拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的抑制效果

从苹果果实上分离获得的50余种酵母菌中筛选出了能够有效地抑制苹果青霉病（Peniclium expansum Link)的丝孢酵母（Trichosporon pullulans(Lindner.)Diddens and Lodder)。罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii(Kuffer.)skin-ner)和粘红酵母（Rhodotorula glutinis(Fresen.)F.C.Harrison)。其中,抑病效果最好的T.pullulans是一种用于采后果实生物防治的新型拮抗菌,研究了这三种拮抗菌不同浓度处理和外加营养物质以及与钙配合使用对苹果青霉病的抑病效果。实验结果表明;酵母菌浓度越高,抑病作用越强;外源营养物质的加入削弱了酵母菌的拮抗效果;在C.laurentii的细胞悬浮液中加入0.18mol/L的CaCl2能显著提高其抑病能力。但增加CaCl2对T.pullulans和R.glutinis的抑病效果却没有明显作用。     

日本脑炎病毒E蛋白在酵母双杂交系统中的表达及其对报告基因激活作用的检测

用日本脑炎病毒(JEV)E蛋白基因片段构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用。用RT—PCR从JEV感染的鼠脑中扩增出JEV E蛋白基因片段,克隆入pUCl9质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。将重组质粒导入酵母菌AHl09,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用。成功获得JEV E蛋白基因片段,表达的E蛋白对酵母菌AHl09无毒性,对报告基因亦无激活作用。为利用酵母双杂交GAL4系统3进行JEV细胞受体蛋白的研究奠定了基础。     

H^＋、N^＋、Ar^＋注入对啤酒酵母存活率的影响及SEM和ESR研究

研究了H+、N+、Ar+低能离子注入酵母菌剂量对存活率的影响;离子注入对酵母细胞的刻蚀损伤作用和离子注入后对细胞内自由基产生的影响.结果表明酵母的存活率随着注入剂量的增加而减少,离子注入对其存活率影响程度是H+>N+>     

高压电场灭菌效果研究

本文以乳酸杆菌、枯草杆菌及酵母菌为研究对象,研究了高压交流电场作用对它们的致死率影响及细胞结构的变化。实验表明：在22．5kv／cm的场强下处理ls能导致乳酸杆菌活菌数降低近6个数量级,通过显微摄影可明显观察到枯草杆菌细胞结构的破裂和酵母细胞的死亡。