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1.
聚合酶链式反应检测结核杆菌的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
以人型结核杆菌基因组DNA为模板,合成二段引物各20个碱基进行聚合酶链式反应(PCR)。经琼脂糖凝胶电泳证实,获得一条245bp扩增带。PCR检测的敏感性染色体基因组DNA为1pg,菌悬液为13个活菌/ml。在特异性试验中,人型结核杆趋,牛型结核杆菌、BCG可见此扩增带。被试的其它14种扰酸菌以及变铅青链霉菌、大肠杆菌质粒Puc19、星状诺卡氏菌、红球菌均未见该扩增带。54例肺结核痰标本3种方法检查的阳性率分别为:萋尼氏抗酸染色16.7%,培养法14.8%,PCR 37.0%。前2种检查方法分别与PCR比较,经统计学处理均有显著性差异(P<0.01)。12例非结核性肺部疾患痰标本抗酸染色和PCR均为阴性。结果表明,PCR技术是快速、敏感、特异诊断结核病的方法。  相似文献   
2.
用单向薄层层析方法对22种抗酸分枝杆菌及相关细菌的全细胞枝菌酸甲基酯进行了分析。结果表明,人型结核杆菌、牛型结核杆菌、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌和胃分枝杆菌的图谱特征相似,由a、甲氧基和酮基枝菌酸酯组成,还有两种未知成分I和J。微黄分枝杆菌、草分枝杆菌、鸟分枝杆菌.胞内分枝杆菌、蛙分枝杆菌和不产色分枝杆菌等均由带a、酮基和蜡脂枝菌酸组成。其它菌种的层析图谱各不相同。诺卡氏菌、红球菌和棒杆菌的图谱较分枝杆菌属简单,主要含有a枝菌酸,又因其Rf值不同,可以将这4种菌属区别开。从肺结核患者痰中分离出来的9株标本技菌酸图谱与标准人型结核扦菌相同,这和用标准化规程进行鉴定的结果一致。我们认为单向薄层层析对于抗酸分枝杆菌的分类和鉴定具有一定的意义。  相似文献   
3.
母牛分枝杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响李晓明,庄玉辉,李国利,张小刚(解放军结核病研究中心,北京100091)王国治,赵桂芳,刘勇,沈小兵(中国药品生物制品检定所,北京100050)母牛分枝杆菌(Mycbcobacteriumvac...  相似文献   
4.
为了解结核病的致病分子机理和筛选结核病致病菌的毒力基因,利用抑制消减杂交(SSH)技术分析了结核分支杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra间的基因组DNA间差异。通过Southern杂交验证及序列分析得到仅在强毒株H37Rv基因组中有的DNA片段8个,其中一个编码已知的毒力因子mce蛋白,1个编码PE家族蛋白,1个编码purC合成酶,和4个潜在蛋白,另一个为非编码区片段。其中有2个基因经PCR方法已证实在强毒株H37Rv和临床分离的强毒株中存在,而在H37Ra和临床弱毒株中无;仅在弱毒株H37Ra基因组中的DNA片段3个,其中2个为新基因片段,已被GenBank收录。  相似文献   
5.
结核分枝杆菌培养物不同组份蛋白质组研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
将结核分枝杆菌H37RV株在苏通培养基内,37℃培养21d,然后将培养物分成上清液(A)、细胞浆(B)和细胞膜?蛋白质样品。以pH3.0~10.0的IPG预制胶条等电聚焦电泳为第一向,SDSPAGE为第二向进行双向电泳(2DE)、银染。经扫描、计算机处理。A组份的部分蛋白质斑点采用质谱仪进行蛋白质鉴定。A、B和C 3个组份蛋白质斑点总数分别为907、884和681;3个组份蛋白质分子量分布基本相似,约70.5%~74.4%在10~49kD之间;蛋白质等电点(pH)A、B两组份分布基本相似,约80.9%~83.5%在pH3.0~6.4之间,而C组份pH7.6~10.0之间的蛋白质斑点数比A和B两组分略多;A、B和C 3个组份表达丰度较高的蛋白质斑点数占各组蛋白质斑点总数的比例分别为7.8%、27.4%和2.8%,蛋白质等电点90.0%均分布在pH3.0~6.4范围内。B组份蛋白质分子质量73.1%分布在10~49kD之间,比A、B两组份略高。A组份14个蛋白质斑点经肽质量指纹谱分析,其中,9个点有同源性的或推测的蛋白质功能,5个蛋白质功能不清楚。总之,初步获得了结核分枝杆菌H37RV株在上述体外培养条件下收获的培养物的上清液、细胞浆、细胞膜蛋白质组2DE图谱及其特点,为该菌功能基因组研究提供蛋白质组信息。  相似文献   
6.
【目的】探讨异烟肼(isoniazid,INH)、链霉素(streptomycin,SM)单耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)与INH/SM多耐药MTB蛋白质组差异。【方法】应用i TRAQ结合Nano LC-MS/MS定量蛋白质组学技术,分析临床分离INH、SM或INH/SM耐药MTB与H37Rv标准株间均表达差异蛋白;并以INH/SM耐药MTB与H37Rv比值为对照,相对定量分析单耐药与多耐药MTB蛋白表达差异倍数;运用DAVID 6.7分析差异蛋白生物功能;STITCH 5.0分析差异蛋白与INH和SM相互作用。【结果】与H37Rv标准株比较,58个蛋白在INH、SM耐药与INH/SM耐药MTB间均有表达差异,共同差异蛋白生物功能主要为氧化还原酶活性和转移酶活性;主要参与丙酸代谢信号通路。共同差异蛋白中,与INH/SM耐药MTB比较,Rv2986c和Rv1908c在INH、SM耐药MTB均表达上调1.25倍;Rv3133c和Rv0577则均表达下调0.7倍;生物信息学预测发现以上4种蛋白可直接或间接与INH、SM进行相互作用。【结论】INH、SM单耐药和INH/SM多耐药MTB蛋白表达谱有较大差异,蛋白Rv2986c、Rv1908c、Rv3133c和Rv0577表达水平及相互作用可能与INH和SM耐药有关。  相似文献   
7.
两种DNA探针杂交检测结核分支杆菌方法的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
为改进结核杆菌DNA探针的特异性与实用性,研制了以生物素标记的两种对结核分支杆菌特异的DNA探针:一个5’端标记的20bp的寡核苷酸探针和一个采用PCR方法合成的188bp长链探针。两种探针分别与结核分支杆菌的全染色体DNA,以及基因组上IS6110序列的一段317bp的PCR扩增产物进行斑点杂交,以碱性磷酸酶(AP)催化的染色反应检测,测试了两个探针的敏感性和特异性。系统地比较研究了两种探针杂交检测条件:探针的浓度选择,杂交温度与洗膜温度的选择,以及杂交与洗膜温度对检测的敏感性与特异性的影响。寡核苷酸探针和188bp探针杂交检测纯化结核分支杆菌基因组DNA的敏感性分别为100ng与6ng,杂交检测PCR产物的敏感性分别是400pg与50pg。两探针的最佳杂交浓度均为40~160ng/ml,最佳杂交温度分别是42℃与68℃,最佳洗膜温度分别是60℃与60~68℃之间。两种探针均仅与结核分支杆菌及BCG有杂交信号,而与其它受试分支杆菌及非分支杆菌杂交结果都呈阴性。它们的特异性都很强,但188bp探针的敏感性约是寡核苷酸探针的7~16倍,而且188bp探针检测本底较低,是检测结核分支杆菌的较佳选择  相似文献   
8.
Immune response and protective efficacy for the combination of four tuberculosis DNA vaccines were evaluated in this study. We obtained 1:200 antibody titers against Ag85B 21d after mice were vaccinated for the first time by four recombinant eukaryotic expression vectors containing coding sequences for Ag85B, MPT-64, MPT-63 and ESAT-6. The titers of Ag85B were elevated to 1:102400 after the second injection and decreased to 1:12800 after the third injection. Antibody titers for MPT-64 and MPT-63 reached 1:25600 21 d after the first vaccination, and were then decreased following the second and third injections. No antigen-specific antibody titer against ESAT-6 was detected in sera harvested from immunized mice at any time. These DNA vaccines evoked specific IFN-λ responses in the spleens of vaccinated mice as well. When challenged with M. tuberculosis H37Rv, we found that the lungs of the vaccinated mice produced 99.8% less bacterial counts than that of the empty-vector control group and the bacterial counts were also significantly less than that of the BCG group. Histopathological analyses showed that the lungs of vaccinated mice produced no obvious caseation while over 50%-70% of the pulmonary parenchyma tissue produced central caseation in the vector control group. Our results indicated that the combination of four tuberculosis DNA vaccines may generate high levels of immune responses and result in better animal protection.  相似文献   
9.
结核分枝杆菌四联核酸疫苗免疫原性和保护效率   总被引:9,自引:0,他引:9  
对结核杆菌四联DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价. 用结核分枝杆菌Ag85B, MPT-64, MPT-63和ESAT-6等4个分泌蛋白基因的表达载体首次免疫小鼠21 d后, Ag85B抗体滴度达到1︰200, 二次免疫后为1︰102400, 三次免疫后为1︰12800. MPT-64和MPT-63的抗体滴度在首次免疫21 d后即高达1︰25600, 二、三次免疫后呈下降趋势. 三次免疫21 d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体. 用该DNA四联苗免疫小鼠后, 4种蛋白都诱导脾脏细胞产生较高水平的细胞应答(产生了特异性g-干扰素). 三次免疫后经静脉强毒攻击, 四联苗免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了99.8%, 保护水平显著高于BCG疫苗组. 对肺组织的病理形态特征观察表明, 空载体pJW4303 的对照小鼠, 肺部严重损伤, 肺实质干酪样坏死, 坏死结节占肺实质的50%~70%, 而四联苗免疫的小鼠, 肺组织结构正常, 实质无肉芽肿, 肺泡轮廓清晰. 研究证实, Ag85B, MPT-64, MPT-63和ESAT-6四种分泌蛋白编码基因组成的四联DNA疫苗具有很高的免疫应答水平和保护效率.  相似文献   
10.
本文测定了从复治肺结核病人痰标本中分离的3株耐药结核菌(耐R株、耐R+K株和耐R+S+H株)对豚鼠的致病力,其结果与对照株(H37RV和结核菌敏感株)基本相似,毒力无明显变化。5株菌的6周总致病指数分别为75.2,72.0,71.1, 72.6和73.3,p值是0.15。毒力根指数分别是1.33、1.39、1.39、1.41和1.36, F值是0.27。3株菌经血行播散到豚鼠肺、肝、脾等脏器内,均有形成菌血症的能力。  相似文献   
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