广西眼镜蛇毒细胞毒素-2的分离纯化及其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的作用

目的通过层析法从广西眼镜蛇毒中分离得到电泳纯的细胞毒素-2(CTX-2),探索CTX-2对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用。方法采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析结合的方法分离眼镜蛇毒粗毒;经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;NanoLC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分并测定分子量;CCK-8法检测CTX-2对HSC-T6的增殖抑制作用,确定其最小有效浓度。结果眼镜蛇毒粗毒经分离纯化获得电泳纯的CTX-2,其分子量约为9.548 kD;不同浓度CTX-2作用于HSC-T6细胞24 h后,其增殖抑制作用随浓度增加而增大,呈量效关系,抑制增殖的最小有效浓度为8 mg/L,IC_(50)为11.52 mg/L。结论广西眼镜蛇毒粗毒经三步分离法得到电泳纯且具有高生物活性的CTX-2;广西眼镜蛇毒CTX-2可抑制HSC-T6细胞增殖,抑制作用呈量效关系。     

广西眼镜蛇蛇毒磷脂酶A_2的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

目的对广西眼镜蛇毒中磷脂酶A2(PLA2)进行分离纯化,测定其对肝星状细胞HSC-T6的增殖抑制作用。方法采用Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱结合的方法分离广西眼镜蛇粗毒,经平板法测定各峰的PLA2活性;经SDS-PAGE电泳鉴定终产物纯度并测定分子量,NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其组分;CCK-8法测定PLA2对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,确定其凋亡的最小毒性浓度。结果 Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱层析法,得到第Ⅲ峰具PLA2活性,且达到电泳纯,经NanoLCESI-MS/MS鉴定其为PLA2,分子量约为14.06kD;PLA2在0~1μg/ml的浓度下对HSC-T6细胞具有一定的促增殖作用,2μg/ml时细胞数达到最大值,4~16μg/ml时对细胞生长有抑制作用,且随浓度增大细胞数降低。结论采用Sephadex G-50、CM-Sepharose CL-6B、Macro-prep High S预装柱结合的方法对广西眼镜蛇毒进行分离纯化,得到电泳纯且具PLA2活性的磷脂酶A2;广西眼镜蛇毒PLA2对肝星状细胞HSC-T6增殖有抑制作用,PLA2对HSC-T6细胞的最小毒性浓度为2μg/ml。     

血管紧张素转换酶抑制剂的分子设计

目的:以血管紧张素转换酶(ACE)为受体靶蛋白,设计相应的抑制剂分子。方法:采用计算机辅助药物分子设计的方法,在分析已有的关于ACE及其抑制剂的基础上,确定分子设计软件LigBuilder中的相关参数。结果:设计得出了1500个配体分子,并从中筛选出了1个各项得分最高的新型血管紧张素转换酶抑制剂分子,其分子式为C27H36N2O3,分子量为436,logP值为4.95,与受体靶蛋白ACE的结合力得分为11.71。结论:从计算得分来看,所设计出的分子与ACE的亲和性好,且脂溶性高,为发掘高活性的降压药物提供了线索。     

ACE2及其特殊功能

血管紧张素转换酶2（angiotensin—converting enzyme 2,ACE2）是新发现的与血管紧张素转换酶（ACE）相关的羧肽酶,在肾素-血管紧张素系统（rennin-angiotensin system,RAS）中ACE2可以使AngⅡ转换为Ang1-7,从而产生与血管紧张素Ⅱ相反的效应,同时ACE2还可使Ang I转换为Ang1-9。研究发现：ACE2与高血压、SARS以及肾脏、生殖等系统的疾病有着密切的关系。     

广西眼镜蛇、银环蛇和五步蛇蛇毒的 体外抑菌作用

目的初步研究广西眼镜蛇、银环蛇和五步蛇蛇毒的体外抑菌作用,并比较各种蛇毒对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌的抑菌效果。方法观测4种菌的生长情况。采用微量肉汤稀释法检测广西眼镜蛇、银环蛇和五步蛇蛇毒对4种细菌的抑菌作用,分析比较不同蛇毒的抑菌效果和孵育时间对抑菌效果的影响。结果广西眼镜蛇和五步蛇蛇毒对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌均有一定的抑制作用,而银环蛇蛇毒未见明显抑制作用(1 280μg/mL)。广西眼镜蛇和五步蛇蛇毒对于4种菌孵育48、72 h的MIC_(80)、MIC_(50)值均比孵育24 h提高2倍或以上。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌的抑菌效果:广西眼镜蛇蛇毒五步蛇蛇毒银环蛇蛇毒;甲型溶血性链球菌的抑菌效果:五步蛇蛇毒广西眼镜蛇蛇毒银环蛇蛇毒。结论广西眼镜蛇和五步蛇蛇毒均具有一定的体外抑菌作用,且对于不同种类的细菌抑菌活性不同,银环蛇蛇毒未发现有明显的体外抑菌作用。     

湖南烙铁头蛇毒中一个新的舒缓激肽增强肽（TmF）

通过 70 %冷甲醇抽提、SephadexG 15分子筛和反相高效液相色谱C1 8层析 ,从湖南产烙铁头蛇毒 (Trimeresurusmucrosquamatus)冻干粉中纯化得到一个新的舒缓激肽增强肽 (BPP) ,命名为TmF。该小肽的氨基酸序列为pGlu Gly Arg Pro Leu Gly Pro Pro Ile Pro Pro (pGlu表示焦谷氨酸 )。序列结果分析表明 ,TmF和已经分离得到的BPPs有很高的序列同源性。MSI MS测定其分子量为 1.110 7kD。TmF的生物学活性和药理学活性检测的结果表明 ,它增强舒缓激肽 (BK) ( 1mg L)诱导的离体豚鼠回肠纵行肌收缩的活性为 ( 1.13± 0 .3)单位 (mg L) ;TmF ( 5 .0× 10 - 4mg kg)可以增强约 ( 14± 2 )mmHg的由BK( 5 .0× 10 - 5mg kg)诱导的舒张压下降 ;在抑制剂试验中 ,不同剂量的TmF和 5× 10 - 2 mg的血管紧张素转化酶保温 30min ,结果表明大约2 .0× 10 - 3mg的TmF表现出对ACE水解活性的半数抑制率 (IC50 )。     

血管紧张素在人子宫蜕膜化中的作用

我们用放免测定和放射自显微证明人早孕蜕膜组织中存在免疫活性的血管紧张素Ⅱ和丰富的血管紧张素Ⅰ型受体。离体细胞培养实验显示,血管紧张素Ⅱ以剂量依赖方式刺激蜕膜细胞催乳素的分泌,而血管紧张素转换酶抑制剂对催乳素分泌似乎有微弱的抑制作用,但未显示统计学差异。以上结果表明AngⅡ可以促进人子宫蜕膜化反应,推测它在胚胎植入和妊娠维持中可能发挥重要的作用。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞中大电导钙激活钾通道的多重调节作用（英文）

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)是影响血管平滑肌细胞张力的重要因素。RAS主要活性物质血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)可通过激活血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor, AT1R)升高胞内Ca~(2+)浓度,收缩平滑肌细胞。大电导钙激活钾(large-conductance Ca~(2+)-and voltage-activated potassium, BK)通道是血管平滑肌细胞中分布最广、表达最多的钾离子通道,在维持细胞膜电位和胞内钾钙平衡中发挥重要作用。血管平滑肌细胞上的BK通道主要包含α与β1两种亚基。其中功能亚基BKα上分布有膜电位及Ca~(2+)感受器。因此当膜电位或细胞内Ca~(2+)浓度升高时会反馈性引起BK通道开放。然而,越来越多的研究显示,尽管Ang Ⅱ可升高胞内Ca~(2+)浓度,但却通过激活PKC通路、促进AT1R与BKα通道形成的异源二聚体内吞、加快α与β1亚基解离等途径抑制BK通道的表达和功能。在一些情况下,Ang Ⅱ对BK通道也可表现出激活作用,但机制尚不完全明确。该综述总结了Ang Ⅱ对BK通道抑制或激活两方面效应的可能原因,为改善细胞内离子失衡提供理论依据。     

一种简化的人血浆徐缓激肽放射免疫测定法

徐缓激肽(Bradykinin,简称BK)是一种具有很强生物活性的九肽,它是由血浆激肽释放酶作用于激肽元(属于α_2-球蛋白)使之水解而释放的。实验证明,BK参与许多重要的生理及病理过程。它可使回肠、子宫及支气管平滑肌收缩,使十二指肠舒张;具有很强的扩血管作用,与血管紧张素共同调节微循环。它还与凝血因子有关,特别值得提出的是它作为炎症的介质参与许多病理过程。研究BK的这些作用,对于深入了解中毒性休克、冠心病、高血压以及肺、肾等器官病变,将有重要意义。通常血中有两种很强的酶(生成BK和破坏BK的酶),所以BK的代谢极快,半衰期仅为16秒,因而使血中BK的测定十分困难,国外曾采用多种     

血管紧张素转换酶2-血管紧张素1-7-Mas轴对血管作用的研究进展

血管紧张素转换酶2（ACE2）和Mas受体的发现使人们对肾素-血管紧张素（RAS）有了更全面的认识。ACE2可水解血管紧张素Ⅰ和血管紧张素Ⅱ直接或间接生成血管紧张素1-7（Ang 1-7）,并与高血压的形成密切相关。Ang 1-7主要通过Mas受体引起血管舒张、抑制细胞增殖。ACE2-Ang1-7-Mas轴的发现为RAS的研究、高血压等心血管疾病的防治和新药开发提供了新的思路和方向。     

眼镜蛇毒对大鼠弓状核nNOS表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠弓状核神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响。方法采用免疫组织化学方法分别显示眼镜蛇毒组、生理盐水组和正常对照组弓状核的nNOS表达。结果与生理盐水组和正常对照组相比,眼镜蛇毒组弓状核nNOS阳性神经元数量明显减少,细胞平均灰度值明显升高(P0.05)。结论眼镜蛇毒能够使大鼠弓状核nNOS表达降低。     

眼镜蛇毒对成年大鼠下托Nestin表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对成年大鼠下托巢蛋白（Nestin）阳性神经细胞表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较Nestin阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠下托的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠下托Nestin阳性神经细胞比生理盐水组、正常对照组表达明显增强（P〈0.01）.结论眼镜蛇毒对大鼠下托Nestin表达有上调作用.     

眼镜蛇毒对大鼠脑桥网状核c-fos表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠脑桥网状核c-fos阳性神经元表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性神经元在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠脑桥网状核的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠脑桥网状核c-fos阳性神经元比生理盐水组、正常对照组表达明显增强(P<0.05).结论眼镜蛇毒对大鼠脑桥网状核c-f...     

Monoclonal antibody immunoaffinity chromatography of the nerve growth factor from snake venoms

1. Pure monoclonal antibodies to Vipera lebetina venom nerve growth factor have been isolated by affinity chromatography using CNBr-agarose bound antigen. 2. Nerve growth factors from ten snake venoms (Vipera lebetina, Vipera russellii, Vipera berus berus, Vipera ursini, Echis carinatus, Agkistrodon halys, Bungarus caeruleus, Naja naja oxiana, Naja naja, Naja naja atra) were purified using monoclonal antibodies against NGF linked to BrCN-activated agarose.     

眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠延髓中的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠延髓外侧网状核c-fos阳性细胞明显多于生理盐水组和正常对照组(P＜0.01).结论 眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达有上调作用.     

眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠脊髓中的表达。结果眼镜蛇毒组大鼠脊髓内c-fos阳性细胞明显多于生理盐水组和正常对照组。结论眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达有上调作用。     

Purification and characterization of nerve growth factor from the venom of Bungarus multicinctus.

The nerve growth factor from Bungarus multicinctus venom was purified by means of successive chromatography on Sephadex G-50, carboxymethyl-cellulose, carboxymethyl-Sephadex C-50 and Sephadex G-50. The purified nerve growth factor was homogeneous by polyacrylamide disc gel electrophoresis. The molecular weight was estimated to be about 21 000 by gel filtration. Compared with the nerve growth factors from the venoms of other Elapidae, namely Naja naja and Naja naja atra, this protein showed high isoelectric point of approximately pH 10. A characteristic of the nerve growth factor of B. multicinctus venom is that the protein consisted of two subunits of equal molecular weight which are linked covalently to each other by a disulfide bridge. The purified B. multicintus nerve growth factor elicited its maximal neurite outgrowth from embryonic dorsal root ganglia at the concentration interval from 30 to 100 ng/ml.     

Amino acid sequence of a less-cytotoxic basic polypeptide (LCBP) isolated from the venom of the Indian cobra (Naja naja)

A less-cytotoxic polypeptide, designated as LCBP, was isolated from the venom of Naja naja by gel filtration on Sephadex G-50 followed by CM-cellulose chromatography. The cytotoxicity toward Yoshida sarcoma cells and lethal toxicity toward mice of LCBP were both one order of magnitude lower than that of cytotoxins and that of toxin A, respectively. LCBP is a single polypeptide consisting of 61 amino acid residues with four intramolecular disulfide linkages, and the amino acid sequence is the same as that of cardiotoxin-like basic polypeptide (CLBP) isolated from the venom of Naja naja atra. This is the first time that the same polypeptides were isolated from different cobra venoms.     

眼镜蛇毒对成年大鼠海马CA3区Nestin表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对成年大鼠海马CA3区巢蛋白(Nestin)阳性细胞表达的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察并比较Nestin阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠海马CA3区的表达。结果眼镜蛇毒组大鼠海马CA3区Nestin阳性细胞较生理盐水组、正常对照组表达明显增强(P0.01)。结论眼镜蛇毒对成年大鼠海马CA3区Nestin表达有上调作用。     

眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-fos表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-fos阳性神经元表达的影响。方法采用免疫组织化学方法观察并比较c-fos阳性神经元在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠丘脑网状核的表达。结果眼镜蛇毒组大鼠丘脑网状核c-fos阳性神经元比生理盐水组、正常对照组表达明显增强(P0.01)。结论眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-fos表达有上调作用。