高效液相色谱法测定红景天甙含量方法的研究

以高效液相色谱法作为红景山甙含量检测方法,系统探讨了用超声法从高山红景天根中提取红景天甙用以制备分析样品的方法。确定的最佳提取条件,以蒸馏水为提取溶剂在６０℃超声提取４０min。     

帕里红景天的化学成分研究

从帕里红景天根茎的石油醚和乙醇提取部分共分得１４种结晶性化合物,经光谱分析和化学反应,分别鉴定为二十二醇、二十六酸、十九醇、β－谷甾醇、二十九醇、红景天甙、麦芽糖、棉皮素－８－葡萄糖甙、胡萝卜甙、酪醇、咖啡酸、没食子酸、形花内酯和新化合物帕里甙。     

不同来源高山红景天材料中有效成分的HPLC分析

本文用HPLC测定、比较了5种不同来源的高山红景天材料中有效成分—红景天甙及其甙无酪醇的含量,并建立了高山红景天有效成分分析的样品制备方法,结果表明:固体培养、液体培养及反应器培养的高山红景天组织中均含有上述两种有效成分.其中固体培养的材料中有效成分的含量最高.三种提取方法比较表明,用索氏提取器连续回流提取明显优于冷浸提取和批式回流提取.     

保健食品中红景天甙含量测定及其稳定性研究

测定保健食品中红景天甙的含量以控制产品质量。采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;以乙腈-水（1：9）为流动相,流速为1.0mL／min,检测波长为280nm。结果表明红景天甙在0．4—4．0μg范围内呈线性关系,平均回收率（n=6）为98．96％（RSD=1.16％）。该方法简便、准确、重现性好,可用于保健食品中红景天甙的质量控制。     

不同地区红景天植物红景天苷含量比较研究

采用高效液相色谱法(HPLC)测定了6种不同地区红景天植物红景天苷含量.以甲醇为提取溶剂,室温超声提取45 min,HPLC测定条件:岛津C18柱(4.6×250 mm,5 μm);流动相为甲醇∶水=3∶7;柱温25℃;检测波长为275 nm.结果表明,红景天苷含量分别为:大花红景天0.36%,狭叶红景天(狮子七)0.32%,宽果红景天0.14%,白三七0.04%,在小丛红景天、洮河红景天中未检测到红景天苷.     

大海林地区不同生境高山红景天根部红景天甙含量的差异

在黑龙江省大海林地区海拔1400~1620m的高山上,依据高山红景天的生境于岳桦林内、高山草甸、苔原上选择了6个样地,测定了高山红景天根部的红景天甙含量。生境不同的高山红景天,根部红景天甙的含量有明显差异,红景天甙含量范围为0.101%~0.684%。从测定结果看,光照条件好、土壤肥沃的生境下高山红景天根部的红景天甙含量较高。     

大海林地区不同生境高山红景天根部红景天甙含量的差异

在黑龙江省大海林地区海拔１４００－１６２０ｍ的高山上,依据高山红景天的生境于岳桦林内、高山草甸、苔原上选择了６个样地,测定了高山红景天根部的红景天甙含量。生境不同的高山红景天,根部红景天甙的含量有明显差异,红景天甙含量范围内０．１０１％－０．６８４％。从测定结果看,光照条件好、土壤肥沃的生境下高山红景天根部的红景天甙含量较高。     

高效毛细管电泳法测定高山红景天中红景天甙含量的比较研究

采用高效毛细管电泳法对采集于两个野生产地不同居群和两个人工栽培地的高山红景天中红景天甙的含量进行了对比研究,实验结果表明,该方法高效、简便、灵敏、可靠;人工栽培高山红景天和自然生境下高山红景天中红景天甙含量有差异,不同天然居群高山红景天中红景天甙含量也有差异。     

温室栽培光强和光质对高山红景天生物量和红景天甙含量的影响

为探讨光强及光质对高山红景天(Rhodiola sachalinensis)生物量和红景天甙含量的影响。于2000年4月至6月在东北林业大学温室内以移栽于大兴安岭加格达奇圃地人工种植生长3a的高山红景天为材料,通过纱布遮荫及遮以不同颜色的滤光膜分别进行了光强、光质控制实验(处理45d)。随着光强的降低,高山红景天全株生物量、根生物量、根的红景天甙含量和产量以及叶中叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素的含量均有降低的趋势,但叶绿素含量变化很小,不同光强及对照之间的差异均未达到显著水平。相对光强为67．75％和44．71％的两种处理下的全株生物量、根生物量、根的红景天甙含量和产量差异不显著,它们的全株生物量和红景天甙含量与对照(全光照)的差异也不显著,但根生物量和红景天甙产量与对照的差异显著。当相对光强减弱至31．96％,全株生物量、根生物量、根的红景天甙含量和产量均大幅度下降,根冠比显著增加。4种滤光膜处理均使高山红景天的全株生物量及根生物量显著降低,蓝膜和绿膜处理的降低幅度大于红膜和黄膜处理的。红膜处理的红景天甙的含量和产量均高于对照,但黄膜、蓝膜和绿膜处理的红景天甙含量和产量则低于对照。通过计算去除4种滤光膜的光强因素,仅从光质的作用看。4种滤光膜处理仍是减小了全株生物量和根生物量,红膜和绿膜处理提高了红景天甙的含量和产量,而黄膜处理降低了红景天甙的含量和产量,蓝膜处理几乎没有效果。4种滤光膜处理均使叶绿素含量增加,但只有蓝膜处理的与对照差异显著。红膜处理不仅显著提高根中红景天甙的含量(为对照的3．42倍),而且对根生物量的影响较小(为对照的90．24％)。因而提高了高山红景天根的红景天甙产量,这意味着在生产上可能会有一定的实践意义。     

高山红景天细胞悬浮培养中红景天甙生物合成代谢调控Ⅱ:真菌诱导物的影响

考察了6种真菌诱导物对高山红景天(Rhodiola sachalinensis A. Bor)细胞生长与红景天甙积累的影响。其中以黑曲霉诱导物效果最好。在细胞培养初期添加浓度为10mg(carbohydrate)/L的黑曲霉诱导物能使培养细胞中红景天甙含量提高到0.995％。前体与诱导物调控组合运用最终使红景天甙产量达到167.4mg/L,是对照培养的3.5倍。另外,对真菌诱导物的作用机理也进行了探讨,真菌诱导物添加促进红景天甙的积累应该与激活培养细胞中的苯丙烷类代谢途径有关。     

超临界CO2萃取红景天中红景天苷、苷元酪醇的研究

采用超临界CO₂ 萃取法和乙醇常温浸提法相比较, 研究从红景天中提取红景天苷、苷元酪醇的工艺条件, 结论是:采用超临界CO₂ 萃取法能萃取出红景天生药中红景天苷的1.2%, 提取率不高, 但该方法能萃取出80%的苷元酪醇, 萃取液中苷元酪醇的相对含量可达45.68%;乙醇常温浸提法能将红景天苷、苷元酪醇同时有效萃取, 且得率较高, 但是萃取液中两物质相对含量较低, 进一步分离纯化将有难度。本研究结果表明, 将超临界CO₂ 萃取法和乙醇常温浸提法有效结合, 可实现两物质的有效分离, 推进红景天有效成分的产业化进程。     

High yield production of salidroside in the suspension culture of Rhodiola sachalinensis

Salidroside has been identified as the most potent ingredient of the Chinese medicine herb, Rhodiola sachalinensis. Since the natural supply of this herb is rapidly decreasing, we established a compact callus aggregate (CCA) strain and culturing system for high yield salidroside production. Several callus strains induced from the explants originated from root, stem, leaf and cotyledon of R. sachalinensis were established and screened for rapid growth rate, high salidroside content and easy propagation in suspension culture condition. The CCA strain was established from a callus strain initiated from the cotyledon. The kinetics of dry weight accumulation and cellular salidroside content in various culture conditions for the strain was determined. For high salidroside production, the optimal inoculum amount was 10% and the optimal concentration for 6-benzylaminopurine and indole-3-butyric acid added in the liquid medium was 5 and 2.5 mg l-1, respectively. The acidic culture medium and a faster shaking speed favored the salidroside accumulation. The addition of 2,4-D, in the liquid MS medium and the utilization of L-tyrosol for chemical feeding enhanced salidroside production. Using a proper combination of culture condition and treatment, salidroside accumulation could reach 57.72 mg g-1 dry weight, that was 5-10-fold higher than that detected in field-grown plants. The corresponding salidroside yield was 555.13 mg l-1, a level suitable for cost effective commercial production to compensate the natural resource shortage of R. sachalinensis.     

高山红景天年龄与根部红景天甙含量的关系

对1998年8月和1999年7月采自吉林省长白山自然保护区内共14个天然居群和人工栽培于黑龙江省大兴安岭的高山红景天的年龄和根部红景天甙含量的关系进行了研究。高山红景天的年龄根据其根茎上芽磷痕的数量判断。结果表明,人工栽培的高山红景天的年龄与其根部红景天甙的含量呈显著正相关,而长白山自然保护区内自然生境下的高山红景天,其根部的红景天甙含量与年龄的正相关性则较弱。     

高山红景天细胞悬浮培养中pH值对红景天甙胞外释放及细胞活性的影响

高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor.)细胞悬浮培养中,通过降低培养基pH值能有效地诱导培养细胞中红景天甙的胞外释放。红景天甙的跨膜运输是一个与H~ 对运的动态过程,培养基pH值决定了红景天甙在胞内外含量的分布。细胞组织在pH值大于3的培养基中处理3h以内,对细胞活性的影响不大。将诱导释放处理过的细胞组织转入到新鲜的生产培养基中,细胞仍具有合成红景天甙的能力。     

红景天甙生物合成途径：酪醇合成的起始反应及其糖基化

红景天甙(Salidroside)生源途径分子机制的解析是利用基因工程、代谢工程技术合成目标化合物的基础。糖基化是红景天甙生物合成的最后一步反应。在前期工作中,本课题组率先报道了与红景天甙生物合成相关的3个尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(UGTs)基因,在体外酶学性质研究的基础上,利用根癌农杆菌和发根农杆菌介导分别建立了相关转基因体系,鉴别了红景天甙生物合成最适UGT及植物和毛状根生物反应器系统合成红景天甙的效率差异;酪醇(Tyrosol)是红景天甙糖基化反应的甙元底物分子,其具体的代谢通路及其调控机制仍不明确。针对酪醇生物合成来源主要存在两种观点:一是酪醇可能来自于苯丙烷代谢途径产生的4-香豆酸,该途径起源于苯丙氨酸;二是生物碱代谢途径的中间产物酪胺可能是酪醇生物合成的前体,该途径则起源于酪氨酸。在后续工作中,否定了酪醇来源于苯丙烷代谢途径的可能性,进一步的工作证实酪氨酸脱羧酶(TyrDC)在酪醇生物合成的起始反应中担负着重要功能,酪醇作为一种苯乙烷类化合物衍生物,其生物合成来源于生物碱代谢途径。