170例婴幼儿中毒型肺炎的病毒分离与血清学试验结果分析

1. 1960年11月至。1961年3月从170例婴幼儿中毒型肺炎患者的咽拭中分离出64株腺病毒,分离阳性率为37．6％。其中42株为3型,18栋为7型,其他4株不能为3型和7型血清所中和。。1961年的特点为3型多于7型。 2. 从10例咽拭分离腺病毒阳性的中毒型肺炎病例的粪便中分离出同型病毒4株,并有1例从咽拭、粪便及结膜拭子均分离出同一型病毒。 3．从同期采集的18例麻疹肺炎病例的咽拭分离出3袜腺病毒,其中2株为7型,1株不能为3型和7型血清所中和。 4．111例患儿双份血清中对腺病毒补体结合抗体有4倍以上增长者43例,阳性率为38．7％。 5．从抗体增长4倍以上的37例中,分离出病毒者24例,分离阳性率为64．8％。病毒分离阳性的33例中,补体秸合抗体增长4倍以上者占24例,血清学阳性率为72．7％。二者结果在多数病例中是符合的。 6. 97例病毒分离与血清学试验综合结果,确定为腺病毒感染者有47．4％,血清学疑阳性者27．8％,另有24．8％确定为阴性。     

武汉地区小儿心肌炎病毒病因初探

本文介绍武汉地区小儿病毒性心肌炎病原调查结果。33例小儿急性心肌炎患者,取其粪便、咽拭子或心肌组织进行病毒分离,并采集患者急性与恢复期血清,用微量中和试验检测对Coxsackie B组6个型病毒的抗体增长情况。结果从26例分离出7株病毒,同时伴有对同型毒株双份抗体四倍或四倍以上增长者4例。1例为CoxsackieB_3,3例为腺病毒。对22例双份血清抗体检测结果:有13例分别对Coxsackie B组2、4、3型抗体有4倍以上增长,阳性率为59％。表明CoxsackieB组病毒为武汉地区小儿病毒性心肌炎重要病因。但腺病毒在病毒性心肌炎中的病原作用亦不容忽视。     

江苏省不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病因学研究

自2004年4月18日起至6月末,江苏省东台市发生以发热、咽部充血、扁桃体肿大为临床表现的原因不明的疫情暴发,发病人群以中小学生、幼儿为主,地域以许河镇、新街镇以及临近乡镇为主。疫情涉及东台市9个镇,合计报告709例,分布在75个学校,240个班级。暴发的特点为传染性强,短期内出现大量的患者,发病有班级聚集性特点,未发现成人感染。临床表现以发烧（100％）、咽部充血（91．40％）、扁桃体肿大（60．22％）、咽痛（50．00％）为主;X线检查可发现肺纹理增强（90．3％）。用Hep-2细胞从患儿20份咽拭子标本中分离到12株病毒,经PCR扩增腺病毒L3部分基因及其PCR产物的序列测定和分析,证实这12株病毒为腺病毒3型;对28份咽拭子标本直接进行DNA提取和PCR扩增,有17份标本PCR扩增L3部分基因呈阳性,经序列测定和分析,也为腺病毒3型。这29个阳性标本L3基因的1446个核苷酸的序列与GenBank上所发表的腺病毒3型序列同源性高达99,5％。双份血IgG检测：对江苏省采集10份患儿急性期和恢复期双份血清,以从患儿咽拭子分离到的腺病毒3型作为抗原,进行病毒抗体测定,6份患儿的双份血清腺病毒总IgG滴度呈4倍以上增高。患儿急性期血IgA检测：对暴发疫情34例患儿急性期血清（发病时间为1～3天）进行腺病毒IgA抗体测定,结果有9份标本为阳性,1份标本为可疑阳性,阳性率为26．47％。IgA阳性率低可能与血清采集时间过早有关,机体还未全部产生IgA。另外,还对江苏省送检的从患儿血培养基培养的细菌毒株进行了鉴定,对其16S rRNA基因进行了基因扩增及序列分析,序列测定和分析提示为A组M3型化脓性链球菌。实验研究结果并结合此次疫情的流行病学和患儿的临床表现,证实腺病毒3型是引起此次儿童不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病原体,部分病例伴有原发或继发化脓性链球菌感染。     

SARS-CoV中和抗体保护恒河猴等感染SARS-CoV研究

[目的]阐明SARS病毒感染后能否再次感染,疫苗产生的抗体中长期保护效果,被动免疫是否真正安全有效等,为防治SARS提供实验依据。[方法]实验分4组,分别为一组(SARS恒河猴恢复组):用感染SARS-CoV发病12月后的4只恒河猴,均有中和抗体产生。二组(SARS食蟹猴恢复组):用感染SARS-CoV发病12月后的3只食蟹猴,均有中和抗体产生。三组(SARS血清输入恒河猴组):3只恒河猴,病毒接种时中和抗体阴性。病毒接种两天后输入抗体阳性血清(恒河猴血清,感染获得,效价为:1:128),用量10ml/只,分别经肌肉和静脉输入,各5ml。四组(恒河猴SARS-CoV感染组):2只恒河猴,病毒接种时中和抗体阴性。SARSCo-V经鼻腔接种,在感染的第1天开始到7天安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和中和抗体测定。[结果]一组(SARS恒河猴恢复组):接种SARS-CoV后未见发热等异常临床表现。血清生化无ALT、LDH、CK、总蛋白和血清白蛋白异常。3只猴在接种病毒后的咽拭子中,RT-PCR分别未检出、第1天检出、第1-3天中检出病毒。第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。2只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎。二组(SARS食蟹猴恢复组):接种3只未见任何不良临床表现,血清生化5项正常。3只猴在接种病毒后的咽拭子标本中,RT-PCR分别未检出SARS病毒、在第1-2天检出、在第1-3天中检出病毒。第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。3只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎等。三组(SARS血清输入恒河猴组):3只恒河猴在病毒接种的第2-5天时有一过性的体温升高,3940℃。血清生化5项正常。3只猴在接种病毒后的咽拭子标本中,RT-PCR分别在第1-3、第1-4天和第1-2天检出SARS病毒。2只猴第7天咽拭子中病毒分离阳性。另外1只在第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。3只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎等。四组(SARS恒河猴SARS-CoV感染组):2只猴病毒接种后,第2-4天时有一过性的体温升高,3940℃。2只进行接种病毒后1-7天安乐死时,RT-PCR在恒河猴的咽拭子标本中连续检出SARS病毒。在第2、5天咽拭子中、7天安乐死时肺组织中病毒分离阳性。2只猴肺等组织病理学检查发现肺组织表面局部有轻度发灰实变现象,可见到间质性肺炎病变,内皮细胞受损,出血和水肿。大多数肺泡没有完整的内衬细胞残留,肺泡间隔变宽并被以吞噬细胞为主的单核炎症细胞浸润,同SARS肺炎改变。实验表明,前期感染产生中和抗体的恒河猴、食蟹猴再次感染病毒,和模型对照猴比较,动物肺组织等只出现轻微或无病理变化,RT-PCR检出时间大大缩短,病毒培养未能分离出病毒,所有这些指标,均证实中和抗体有明显的保护作用,是有效的。被动免疫从结果来看,有一定的作用,但保护作用弱。     

婴幼儿毛细支气管炎的病毒病原学研究

1．从1974年冬—1976年春对北京地区婴幼儿毛细支气管炎80例患儿的咽拭子标本进行了病毒分离工作,结果共分离出合胞病毒12株,阳性率占15％。 2．以65例患儿的双份血清中和试验结果证明：其恢复期对合胞病毒{倍中和抗体升高的有39例,阳性率占56．5名。首次确证了北京地区婴幼儿毛细支气管炎和合胞病毒的病原关系。 3．北京地区农村于1976年春首次分离出合胞病毒,其双份血清恢复期中和抗体4倍升高的阳性率为75％。初步证明合胞病毒也是北京地区农村婴幼儿毛细支气管炎的重要病原。 4．对北京地区合胞病毒新分离株进行了一些培养特性和分离特性的研究,为今后中西医结合防治本病提供了一定的依据。     

肾综合征出血热胸部并发症的CT 表现

目的:总结肾综合征出血热(EHF)胸部并发症的CT表现和探讨胸部CT表现对肾综合征出血热的诊断价值。方法:分析60例经HFRS-IgM阳性确诊的HFRS的胸部螺旋CT表现,其中轻型5例、中型20例、重型28例、危重型7例。结果:肺部感染22例,肺水肿12例,胸腔积液41例,心包积液17例,其中,心包积液合并肺水肿者4例,肺部感染并胸腔积液者4例,胸腔积液合并下肺局部膨胀不全18例,胸部CT检查正常8例。结论:肾综合征出血热,胸部并发症发生几率较高,以胸腔积液及胸腔积液并下肺膨胀不全发生几率最高,HFRS的胸部CT表现对于临床有很好的治疗意义,早期CT检查可准确显示肾综合征出血热病人胸部改变的特征。     

肾综合征出血热胸部并发症的CT表现

目的：总结肾综合征出血热（EHF）胸部并发症的CT表现和探讨胸部CT表现对肾综合征出血热的诊断价值。方法：分析60例经HFRS-IgM阳性确诊的HFRS的胸部螺旋cT表现,其中轻型5例、中型20例、重型28例、危重型7例。结果：肺部感染22例,肺水肿12例,胸腔积液4l例,心包积液17例,其中,心包积液合并肺水肿者4例,肺部感染并胸腔积液者4例,胸腔积液合并下肺局部膨胀不全18例,胸部CT检查正常8例。结论：肾综舍征出血热,胸部并发症发生几率较高,以胸腔积液及胸腔积液并下肺膨胀不全发生几率最高,HFRS的胸部CT表现对于临床有很好的治疗意义,早期CT检查可准确显示肾综合征出血热病人胸部改变的特征。     

婴幼儿中毒型肺炎的病原学研究

根据1958—1959年冬、春长春市婴幼儿中毒型肺炎流行与1959—1960年冬、春类倒的散发例的病原学研究结果,认为7型与3型腺病毒是本病的主要病原体。 本文从患儿咽拭和肺组织的病毒分离与鉴定,长春、北京、沈阳三地所分离的病毒型刖的一致性,患儿血清的补体结合与中和试验,从婴幼儿其他疾病或其他类型肺炎中病毒分离基本阴性的结果,并从排除其他病原体等各个方面论证了这一结论。并对7型与3型腺病毒引起中毒型肺炎流行的可能因素,加以讨论。后配：本文完成砌稿时,国内对婴幼儿腺病毒肺炎的病原学研究工作尚元系统报导。于修稿期间,见到任贵方等在中华医学杂志发麦的报告(任贵方等：中华医学杂志,48(2)：71—76,1962：戴瑩等：中华医学杂志,4B(2)：77—82,1962),其结论与我们所报告的基本一致。     

用重组腺病毒表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7可获得良好的免疫学效果

为探索利用重组腺病毒表达轮状病毒的结构抗原以制备轮状病毒基因工程疫苗的可行性,构建了一株可表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7的重组腺病毒AdEasyCVP7.AdEasyCVP7感染293细胞后,RT－PCR证明VP7基因有转,Western blotting试验可检测到VP7的表达。随后,用AdEasyCVP7通过灌胃和滴鼻两种不同途径免疫小鼠,并对免疫后小鼠的血清抗体和粘膜抗体进行了比较。初次免疫后,两组小鼠均有应答,但血清抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后,滴鼻组小鼠显示出明显的加强效果。对肺灌洗液中的sIgA及肺、肠粘膜组织匀浆中的IgA进行检测发现滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对血清中和抗体的检测表明,初次和再次免疫后,两组小鼠血清中均有中和抗体产生。该研究为轮状病毒基因工程疫苗的免疫方案、免疫途径及免疫保护作用等的进一步研究奠定了基础。     

直接荧光抗体技术在婴幼儿腺病毒肺炎早期和快速诊断上的应用

本研究用标记异硫氰酸荧光黄的3型和7型腺病毒高价免疫兔血清抗体球蛋白或精制的3型和7型腺病毒混合免疫马血清球蛋白,检查临床诊断为病毒性肺炎的婴幼儿咽壁剥落细胞中的腺病毒抗原,得到较高的阳性率。在临床诊断为其他肺炎的婴幼儿病例中,大多数的结果为阴性。在患其他痰病的一些婴幼儿都是阴性。标记的腺病毒免疫球蛋白对麻疹病毒、流感病毒和副流感病毒没有交叉反应。封闭实验说明发出的荧光是特异的。同分离腺病毒和测定双份血清内腺病毒抗体的比较,大多数符合。     

狂犬病病毒糖蛋白重组人腺病毒的构建及免疫效果的初步研究

构建表达狂犬病病毒弱毒SRV9糖蛋白(GP)的重组人5型腺病毒,检测其对小鼠的免疫效果。将狂犬病病毒SRV9株GP基因的完整开放阅读框克隆到腺病毒表达系统中的穿梭质粒多克隆位点,构建重组穿梭质粒pac-Ad5CMV-Gs9,以罗氏转染液介导线性化骨架质粒和重组穿梭质粒共转染293AD细胞,细胞病变后取培养物进行PCR鉴定并电镜观察,在293AD细胞上测定病毒滴度。以106 TCID50重组腺病毒腹腔接种昆明小鼠,免疫后不同时段采尾静脉血通过荧光抗体病毒中和试验(FAVN)检测小鼠血清狂犬病中和抗体效价。正确构建重组穿梭质粒pacAd5CMV-Gs9;获得表达狂犬病病毒SRV9株GP蛋白的缺陷型重组人5型腺病毒;病毒滴度达到106 CFU/mL以上;腹腔接种小鼠14d后均产生了抗狂犬病中和抗体,有效保护率达90%。成功获得了表达狂犬病病毒GP基因的重组腺病毒,该腺病毒免疫小鼠可产生保护性中和抗体,为进一步开发新型兽用狂犬病疫苗奠定了物质基础。     

EGFR在晚期肺腺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在晚期肺腺癌患者中的表达及其意义。方法收集60例晚期肺腺癌患者的胸腔积液及活检肺癌组织,采用免疫组化检测EGFR的表达,并探讨其表达与临床病理特征的关系。结果 EGFR在胸腔积液及肺癌组织中的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、63.3%(38/60),两者差异无统计学意义(P0.05)。结论 EGFR均高表达于肺腺癌胸腔积液及腺癌组织,且与年龄、性别、吸烟史、分化程度及肿瘤的大小无明显相关,可指导肺腺癌患者的靶向治疗。     

表达轮状病毒G2和G3型vp7基因重组腺病毒的免疫效果

为探索以非复制型腺病毒为表达载体的多价轮状病毒(Rotavirus,RV)基因工程疫苗的可行性,在前期工作的基础上,对表达我国G2和G3型RV流行毒株vp7基因的重组腺病毒的免疫效果进行了研究。分别用表达G2和G3型vp7基因的重组腺病毒rvAdG2VP7、rvAdG3VP7经滴鼻和灌胃两种途径免疫Balb/c小鼠,对免疫后小鼠的血清抗体、黏膜抗体和相关的细胞因子水平进行了检测和比较。结果表明,用表达G2和G3型vp7基因的重组腺病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠后,均可诱导机体产生较强的RV特异性免疫反应,包括体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫,并能产生中和抗体。但免疫反应以Th2类为主,Th1类反应也占有相当的比例。本研究为新型RV基因工程疫苗的深入研究奠定了基础。     

长春地区引起婴幼儿肺炎的3、7型腺病毒分子流行病学研究

本文对长春地区1976年—1988年引起小儿肺炎的135株3.7型腺病毒核酸进行了限制性内切酶图谱分析,结果表明:75株7型腺病毒经BamHⅠ、BelⅠ、BglⅠ、XbaⅠ、SmaⅠ、HindⅢ分析后表现为二个基因组型—7b和7d。其中60株7b(88％),流行于1976—1988年;15株7d(12％)自1982年出现逐年增加,到1987—1988年的5株都是7d。60株3型腺病毒被BglⅡ、BamHⅠ分析后表现为三个基因组型,我们用3Ⅰ、3Ⅱ、3Ⅲ代表它们,其中S6株3Ⅰ(93.3％)流行于1976—1888年;3Ⅱ、3Ⅲ散在分布。通过临床资料整理,发现该地区3.7型腺病毒的不同基因组型在毒力致病性上存在着差别。     

胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的疗效观察

目的探讨胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的临床疗效。方法选择我院收治的晚期肺癌恶性胸腔积液患者50例,随机分为观察组和对照组各25例。对照组患者给予胸腔注射顺铂,观察组患者给予胸腔注射重组人5型腺病毒,比较两组患者临床疗效、生活方式评分以及不良反应发生情况。结果观察组总有效率为72.00%,明显高于对照组的52.00%(P0.05);治疗后,观察组患者的生活方式各项因素评分均明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的临床效果显著,能有效提高患者的生活质量,且不良反应少,值得推广应用。     

利用报告基因的人7型腺病毒中和抗体检测方法的建立

目的:构建表达萤光素酶报告基因的重组人7型腺病毒(HAdV7)Ad7-dE1-dE3-Luc(Ad7-Luc)病毒,用于检测人群中HAdV7的中和抗体水平。方法:利用同源重组方法构建E1区和E3区部分缺失,并在E1区嵌入萤光素酶基因表达框的pAd7-Luc重组质粒,转染HEK-293细胞,包装出能够表达萤火虫萤光素酶的Ad7载体重组病毒(Ad7-Luc);选取HAdV7阳性血清样本对新建立的报告基因检测方法的准确性和稳定性进行验证;最后,利用该方法对北京地区60份血清样本进行HAdV7中和抗体检测。结果:获得能够表达萤火虫萤光素酶的Ad7-Luc重组病毒,病毒滴度可达4.85×10~8IFU/mL,Ad7-Luc检测法与传统细胞病变效应(CPE)法具有很好的一致性(R~2=0.8612,P0.0001),批内和批间差异分别在10%和20%以内。北京地区60例血清样本的检测结果显示,HAdV7血清阳性率约为60%(36/60),明显低于HAdV5血清阳性率75%(45/60),75%的HAdV7阳性血清中和抗体滴度集中于低滴度水平(12～200)。结论:与传统的细胞病变方法相比,HAdV7中和抗体报告基因检测方法更快速、灵敏、准确,适用于人群中HAdV7血清流行病学调查及其疫苗的中和抗体研究。     

间接免疫荧光用于病毒性下呼吸道感染多病原的鉴别

在50例病毒性肺炎幼儿的鼻咽部剥落细胞内,检测出24例有3或7型腺痫毒抗原(48％),在其中2例的肺组织内也检测出同样病毒的抗原,并分离出7型腺病毒;5例有呼吸道融合细胞(Rs)病毒抗原(10％);3例有I、lI或III型副流行性感冒(副流感)病毒抗原(6％),其中l例的肺组织内也检测出同样病毒的抗原,井分离出1型副流感病毒。在7例毛细支气管炎婴儿的鼻咽部剥落细胞内,检测出3例有3或7型腺病毒抗原,一例有Rs病毒抗原。在一例胸膜炎儿童的鼻咽部剥落细胞内,检测出副流感病毒抗原。在11例非呼吸道感染的儿童中,检测这三种病毒抗原的结果都是阴性。     

水痘疫苗接种的初步经验

<正>众所周知,水痘是一种高度接触传染的疾病,但病情轻微并很少有并发症。许多病例,靠临床就能诊断。如作实验室诊断,必须用补体结合试验。而测定个体能否予防水痘的免疫能力,补体结合试验往往不很敏感,需用其它测定方法;蚀斑抑制中和试验或较方便的荧光抗体试验。近来,我们在瑞土用     

免疫细胞化学方法对胸腔积液中恶性肿瘤细胞的分类与诊断

目的应用免疫细胞化学对胸腔积液中的肺非小细胞癌分类与恶性间皮瘤的鉴别诊断。方法利用液基薄层细胞学自动涂片技术方法对筛查出的胸腔积液可疑瘤细胞及瘤细胞标本1158例进行细胞包埋连续切片,分别作肺非小细胞癌（NSCLC）肿瘤细胞标记物CK7、CK5＆6、TTF-1、E—Ca及恶性间皮瘤标记物MC（MesothelialCell,MC）、CR（Calfetinin,CR）、P53、Vimentin免疫细胞化学染色。结果1158例胸腔积液患者确诊为肺腺癌581例,鳞癌509例,腺鳞癌48例,恶性间皮瘤20例。TTF-1在腺癌中有明显高表达,阳性表达率为92．43％;CK58L6在鳞癌中有明显高表达,阳性表达率为97．45％;MC、CR在恶性间皮瘤中有明显高表达,阳性表达率为100．00％和95．00％。结论液基细胞学与免疫细胞化学技术相结合在胸腔积液鉴别诊断中有很重要的临床意义,CK7、CK58L6、TTF-1、E—ca联合应用可用于胸腔积液中NSCLC之间的分类与诊断,CK58L6、MC、CR、P53、Vimentin联合应用可用于胸腔积液中间皮瘤的定性诊断,值得在临床细胞病理学诊断中推广应用。     

婴幼儿肺炎的病毒病原学

1．1976年冬—1978年春对北京地区临床诊断疑似病毒性肺炎22l例患儿的咽拭标本进行了病毒分离,结果分离到合胞病毒29株,阳性率占13．1％。腺病毒42株,阳性率占19％。单纯癌疹病毒8株,阳性率占3,6％。血球吸附病毒2株,阳性率占0.9％。 2．对155例同上患儿的双份血清检查结果表明,其恢复期对合胞病毒Lon株≥4倍中和抗体升高的有68例,阳性率占43.9％。首次证明了北京地区婴幼儿病毒性肺炎和合胞病毒的病原关系。从155例同上患儿的双份血清血凝抑制试验结果证明,恢复期对腺病毒≥4倍血凝抑制抗体升高的有20例,阳性率占12.9％。145例婴幼儿病毒性肺炎患儿的双份血清检查结果表明,恢复期对流感病毒4倍血凝抑制抗体升高的阳性率占16．5％。恢复期血清对副流感病毒4倍血凝抑舒抗体升高的阳性率占13．1％。