高受体结合和低免疫原性的［B1—Ala，B2—Ala］－胰岛素

通过化学半合成从天然猪胰岛素得到［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］胰岛素。这一胰岛素类似物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＨＰＬＣ鉴定证明是均一的,氨基酸组成与理论值相符生物活性测定结果表明：［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素的体内活力与天然猪胰岛素相同,而与人胎盘细胞膜胰岛素受体的结合能力为天然猪胰岛素的１３２％。这一结果进一步说明胰岛素Ｂ链Ｎ端肽段参子与受体相互作用。此外,［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素的免疫活性很低,远小于天然猪胰岛素的４％。     

［B3－Lys］－胰岛素的研究：受体结合及生物活性

本文用１２５Ｔ－［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和１２５Ⅰ－胰岛素研究了［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜（ＨＰＭ）胰岛素受体结合特性并进行了比较。实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＥＰＭ胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和猪胰岛素的ＩＣ（５０）值分别为０．６５和１．１１ｎｍｏｌ／Ｌ。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析得出［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素受体中高亲和位点和低亲和位点结合的亲和常数分别为１．７２×１０９和２．２７×１０６Ｌ／ｍｏｌ,而猪胰岛素分别为１．２６×１０９和１．４７×１０６／ｍｏｌ。促脂肪细胞合成脂肪实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素也同样具有比天然猪胰岛素更高的离体生物活力,ＥＣ（５０）分别为０．１７５和０．３０１ｎｍｏｌ／Ｌ。可见［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素的受体结合能力和高体生物活力都为猪胰岛素的１．７倍。     

[B_1Ala,B_2Ala,B_3Lys]-胰岛素的制备和生物活性(英文)

本文报道了胰岛素分子中Ｂ１～３序列（Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ａｓｎ）为Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ取代的胰岛素类似物制备及其生物性质。［Ｂ１Ａｌａ,Ｂ２Ａｌａ,Ｂ３Ｌｙｓ］－胰岛素仍保留天然胰岛素的全部体内活性和受体结合能力,但体外促脂肪生成活性和免疫活性分别只为胰岛素的７０％和０．８８％。本文还就胰岛素Ｂ链Ｎ端肽段对其结构和功能的影响进行了讨论。     

高受体结合和低免疫原性的[Bl—Ala,B2—Ala]—胰岛素

通过化学半合成从天然猪胰岛素得到［Ｂｌ－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素,这一胰岛素类似物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＨＰＬＣ鉴定证明是均一的,氨基酸组成与理论值相符,生物活性测定结果表明：［Ｂｌ－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素的体内活力与天然猪胰岛素相同,而与人胎盘细胞膜胰岛素受的结合能力为天然猪胰岛素的１３２％。这一结果进一步说明胰岛素Ｂ链Ｎ端肽段参予与受体相互作用,此外,［Ｂｌ－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ     

[B1Ala,B2Al2,B3Lys]—胰岛素的制备和生物活性

本文报道了胰岛素分子中Ｂ１￣３序列（Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ａｓｎ）为Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ取代的胰岛素类似物制备及其生物性质。［Ｂ１Ａｌａ,Ｂ２Ａｌａ,Ｂ３Ｌｙｓ］－胰岛素仍保留天然胰岛素的全部体内活性和受体结合能力,但体外促脂肪生成活性和免疫活性分别只为胰岛素的７０％和０．８８％。本文还就胰岛素Ｂ链Ｎ端肽段对其结构和功能的影响进行了讨论。     

[B3—Lys]—胰岛素的研究：受体结合及生物活性

本文用＾１２５Ｉ－［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和＾１２５Ｉ－胰岛素研究了［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合物性并进行了比较。实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和猪胰岛素的ＩＣ（５０）值分另为０．６５和１．１１ｎｍｏｌ／Ｌ。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分别得出［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素     

金属内肽酶底物Glutaryl－Ala－Ala－Phe－2NA的合成

文本以苯丙萘胺（Ｐｈｅ－２ＮＡ）为原料,通过Ｂｏｃ－Ｎ－羟基丁二酰亚胺活化酯法合成了金属内肽酶底物Ｇｌｕｔａｒｙｌ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－２ＮＡ     

抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ, 与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ 基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为２８ｋＤ, 前者占细胞总蛋白的６ ％ , 后者为０ ．３ ｍｇ／ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化, 前者纯度可达９０％ 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ 结合活力, 其亲和常数分别为５ ．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１ , 略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０ ２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 。     

2．5分辨率单斜Al－（L－丙氨酸）胰岛素晶体结构研究

空间群为Ｐ２１的Ａ１－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素晶胞内,一个不对称单位含有一个六聚体,应用差值Ｆｏｕｒｉｅｒ技术,立体化学制最小二来技术和Ｘ—ＰＬＯＲ程序并辅以电子密度图的人工拟合,解析了分辨率ＡＩ—（Ｌ－丙氨酸）胰岛素（Ａｌ－Ｌ－ＡｌａⅠ）的晶体结构。最终Ｒ因子为２０．６％,与标准键长与键角的均方根偏差分别为和４．１９°,从电子密度图与模型的拟合来看,六聚体中每条Ａ链的Ａｌ位置替换的Ｌ—Ａｌａ清晰可见,每条Ｂ链Ｎ端Ｂ１—Ｂ８伏段都为α螺旋构象,形成了Ｂ１—Ｂ１９的连续α螺旋段。     

大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化和基本性质

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为ｐＨ８．３和ｐＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别为２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．０μｍｏｌ／Ｌ：Ｖｍａｘ为７６３０单位／毫克;ｋｏａｔ为９Ｓ－１。ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力对ＡＴＰ和Ａｒｇ的Ｋｍ分别为８．３ｍｍｏｌ／Ｌ和９９μｍｏｌ／Ｌ;Ｖｍａｘ为１６３２０单位／毫克;ｋｃａｔ为１８Ｓ－１。     

[A6-Ala,A11-Ala]-人胰岛素突变体的构建及其生物活性

利用 PCR技术 ,将胰岛素原基因中 A6和 A1 1的 Cys序列突变成 Ala序列 ,以去除 A链的链内二硫键 .突变基因连接到质粒 p BV2 2 0 ,构建了表达质粒 p JG40 3,并且在大肠肝菌中得到表达 .经过 Sephadex G- 50层析可得到纯化的突变人胰岛素原 ( Mut- HPI- Ala) .纯化产物用胰蛋白酶和羧肽酶处理 ,并经 Resource Q阴离子交换柱层析可进一步获得纯化的突变人胰岛素 ( Mut- HI- Ala) .Native- PAGE分析表明 Mut- HI- Ala的结构松散 .Mut- HPI- Ala的放射免疫活性和胰岛素受体结合活性是非突变人胰岛素原 ( Met- HPI)的 4.6%和 2 .4% .Mut- HI- Ala的放射免疫活性和胰岛素受体结合活性是非突变人胰岛素 ( Met- HI)的 4.3%和 4.6% .实验结果表明 ,胰岛素 A链内的二硫键对胰岛素的生物活性起着重要的作用     

An observation of non-superimposable stereogeometrical features in a non-chiral one-component beta-Ala model peptide

This paper describes the chemical synthesis and crystal molecular conformation of a non-chiral beta-Ala containing model peptide Boc-beta-Ala-Acc5-OCH3. The analysis revealed the existence of two crystallographically independent molecules A and B, in the asymmetric unit. Unexpectedly, while the magnitudes of the backbone torsion angles in both molecules are remarkably similar, the signs of the corresponding torsion angles are reverse therefore, inclining us to suggest the existence of non-superimposable stereogeometrical features in a non-chiral one-component beta-Ala model system. The critical mu torsion angle around CbetaH2-CalphaH2 bond of the beta-Ala residue represents a typical gauche orientation i.e., mu = 67.7 degrees in A and mu = -61.2 degrees in B, providing the molecule an overall crescent shaped topology. The observed conformation contrasts markedly to those determined for the correlated non-chiral model peptides: Boc-beta-Ala-Acc6-OCH3 and Boc-beta-Ala-Aib-OCH3 signifying the role of stereocontrolling elements since the stereochemically constrained Calpha, alpha-disubstituted glycyl residues (e.g., Acc5, Acc6, and the prototype Aib) are known to strongly restrict the peptide backbone conformations in the 3(10)/alpha-helical-regions ( phi approximately +/-60+/-20 degrees, psi approximately +/-30+/-20 degrees) of the Ramachandran map. Unpredictably, the preferred, phi, psi torsion angles of the Acc5 residue fall outside the helical regions of the Ramachandran map and exhibit opposite-handed twists for A and B. The implications of the semi-extended conformation of the Acc5 residue in the construction of backbone-modified novel scaffolds and peptides of biological relevance are highlighted. Taken together, the results indicate that in short linear beta-Ala containing peptides specific structural changes can be induced by selective substitution of non-coded linear- or cyclic symmetrically Calpha,alpha-disubstituted glycines, reinstating the hypothesis that in addition to conformational restrictions, the chemical nature of the neighboring side-chain substituents and local environments collectively influences the stabilization of folding-unfolding behavior of the two methylene units of a beta-Ala residue.     

P3 cap modified Phe*-Ala series BACE inhibitors

With the aim of reducing molecular weight and adjusting log D value of BACE inhibitors to more favorable range for BBB penetration and better bioavailability, we synthesized and evaluated several series of P3 cap modified BACE inhibitors obtained via replacement of the P3NHBoc moiety as seen in 3 with other polar functional groups such as amino, hydroxyl and fluorine. Several promising inhibitors emerging from this P3 cap SAR study (e.g., 15 and 19) demonstrated good enzyme inhibitory potencies (BACE-1 IC(50) <50 nM) and whole cell activities (IC(50) approximately 1 microM).     

人B7—1和B7—2cDNA的克隆及鉴定

目的：为探索性构建全新型重组人B7－PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中隆N－末端分别缺失34和16个氨基酸的人B7－1和B7－2基因胞外区,并构建含此基因的重组质粒。方法：根据B7－1和B7－2基因序列设计合成可增B7－1和B7－2cDNA的特异性引物,用RT－PCR的方法从Raji细胞总RNA中扩增B7－1和B7－2cDNA,并克隆至pGEM－T载体中,经酶切鉴定后再进行序列分析。结果和结论：从Raji细胞中扩增出预期 的624和675bp的B7－1和B7－2cDNA,将其克隆至pGEM-T载体中,分别经EcoRI/HindⅢ和BamHI/SphI双酶切电泳和序列分析确证,为进一步构建人B7－PE40外毒素融合蛋白奠定了基础。     

B7家族的新成员

T细胞的活化需要共刺激分子和其受体及特异性抗原与T细胞受体的双信号作用。B7家族成员是重要的共刺激分子,除B7－1和B7－2,新近又发现了一些新成员：B7RP－1（又名B7h,GL50或ICOSL）为鼠ICOS（inducible costimulator,CD28家族的第三位成员）的配体,其人的同源物命名为B7－2（也称为GL50或ICOSL）,它对TG细胞生长及细胞因子产生的共刺激作用已明显,B7－H1（也称PD－1L）,B7H3是一类不与ICOS结合的B7家族新成员。现已证实。现已证实,这些分子与其受体之间的作用在T细胞增殖及发挥效应中扮演重要角色,它们在许多疾病中的作用也引起学者的普遍关注。     

乙型肝炎病毒受体研究进展

肝细胞是乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要靶器官,病毒黏着并进一步侵入肝细胞是感染启动的关键步骤。近几年的研究发现,肝细胞膜上的受体在病毒感染中起着至关重要的作用。我们对近年来几种可能的HBV受体的研究情况进行综述,对阐明HBV入侵肝细胞的机制具有一定的意义。     

TNFα诱导激活NF-κB上调抑癌基因CDKN2B表达

NF-κB通过转录调控其靶基因,在肿瘤发生发展和精准治疗中起关键作用。过表达抑癌基因细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B（CDKN2B）可抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡,但是否受NF-κB调节尚无报道。本文发现,NF-κB直接结合并上调CDKN2B基因：在TNFα处理的HeLa细胞内,CDKN2B的基因区覆盖大量NF-κB结合峰,其中富集倍数大于20的结合峰有14个。TRANSFAC软件分析发现,NF-κB结合峰内包含大量经典的κB位点。ChIP-qPCR证明,TNFα诱导NF-κB结合CDKN2B基因。将NF-κB结合峰中心区DNA片段插入荧光素酶报告基因载体中,发现该DNA片段的插入使荧光素酶相对活性上调至7.88倍,TNFα处理又使其相对活性提高到2.37倍,且NF-κB/p65 siRNA显著干扰其相对活性的升高。免疫荧光检测显示,TNFα诱导激活NF-κB进入细胞核,而NF-κB/p65 siRNA阻止它入核。此结果提示,我们成功构建了具有NF-κB转录活性差异的细胞模型,qPCR检测两个已知的NF-κB靶基因NFKB2和STAT5A的表达,进一步验证该细胞模型构建成功。利用此细胞模型,发现受TNFα诱导激活的NF-κB,能够上调CDKN2B基因。总之,本文发现抑癌基因CDKN2B是NF-κB新的靶基因,NF-κB直接结合并上调CDKN2B基因在转录水平的表达。本研究为抑癌基因CDKN2B的抗肿瘤应用奠定了基础。