蛋白质特异性降解技术的研究进展

蛋白质顺序分析在生物学和医学研究中是揭示生命本质,阐明结构与功能的关系,研究酶的活性中心和蛋白质高级结构的基础,也是基因工程中研究基因表达、克隆和DNA（或RNA）顺序分析的重要内容。而对蛋白质进行特异性降解是顺序分析成败的关键。若采用常规的酸解方法裂解多肽链,其非特异性酸解会产生很多小肽,不仅难以分离纯化,又因为重叠切点太多,要连成整个肽链顺序困难很大,所以采用酶或特异性化学试剂进行特异性降解是必要的,这样不仅提高了测序效率也为大分子量蛋白质的顺序分析创造了有利条件。l蛋白酶降解1．1常用蛋白酶胰蛋…     

逆转录现象的发现及其意义

现代遗传学已经证明,I）NA是生物遗传的主要物质基础。生物体的遗传特征是以遗传密码的形式编码在＊＊A分子上,表现为特定的核音酸排列顺序,并且通过DNA的复制,把遗传信息由亲代传递给予代。在后代的个体发育中,遗传信息由DNA转录给RNA,然后通过mRNA翻译合成特异的蛋白质以执行各种生命功能,从而使后代表现出与亲代相似的遗传性状。这就是本世纪SO年代末所确定的蛋白质合成的“中心法则”。“中心法则”确定后,人们发现并不是所有RNA都是在DNA模板上复制的。许多病毒并没有DNA,只有单链的RNA作为遗传物质。当这些病毒…     

《蛋白质构象》

《蛋白质构象》(Protein conformation)是锡伯基金会专题论文集第161卷,1991年威利父子出版公司出版,269页。生物学和化学中一个悬而未解的问题是怎样从蛋白质的氨基酸顺序去确定其三维结构,该种结构是酶、通道、和受体功能及机制的基础。     

人类基因组研究新进展

人类基因组研究新进展柴建华（复旦大学遗传学研究所人类基因组实验室上海２００４３３）人类基因组研究在全世界范围内展开已经是第八个年头了。研究任务分为两个：一是染色体ＤＮＡ的大片段克隆、排序和核耷酸顺序分析;另一个是全部基因的顺序识别及功能研究,包括突变...     

蛋氨酸含量丰富的野生大豆

<正> 一、蛋氨酸的营养价值与大豆品质育种蛋白质由氨基酸构成,比糖或脂类有更大的变异性。人类的饮食并不要求蛋白质自身,而是制造蛋白质的原材料,即大部份以氨基酸的形式吸取。在天然的食物中氨基酸很少以游离形式存在,而多半是以蛋白质形式存在。由于约有20种氨基酸的组合和排列,使产生的蛋白质多的不计其数,而每一个蛋白质的独特的氨基酸顺序和长度的构成不同,所以蛋白质的功能是多种多样的。蛋白质的合成,所有的氨基酸成份都必须具备,但作为食物它们之中的个别的氨基酸不是人体所必需的。     

如何改造蛋白质

1.前言 蛋白质是由20种L-α-氨基酸通过肽键接连起来的多肽链组成的。不同的蛋白质,其氨基酸的组成数目、种类、顺序也不一样。蛋白质的氨基酸顺序(也称一级结构)是由每种蛋白质的基因(DNA)的核苷酸序列决定的。生物机体产生的蛋白质是生物个体维持其生命、进行繁殖不可缺少的物质。     

蛋白质分泌信息与基因工程

蛋白质分泌信息存在于自身氨基酸排列顺序内,上溯到DNA分子中。信号顺序引发蛋白质分泌的早期过程,成熟蛋白顺序决定最终分泌结果。它们相互作用并离不开细胞输出环境的配合。信号顺序启发人们对分泌性载体的构建,对蛋白质分泌信息的全面了解,肯定了基因工程中全方位研究的必要。     

DABITC／PITC双偶合法在蛋白质手工固相顺序分析中的应用

Edman化学降解法迄今仍然是蛋白质(或多肽)顺序分析中最基本和最有效的方法。根据蛋白质(或多肽)在反应中的状态不同,可分液相顺序分析法和固相顺序分析法。固相顺序方法,由于操作方便,洗涤干净,肽不会因洗涤和抽提而受损失等优点而迅速发展。但是由于Edman降解反应产物PTH-氨基酸检出的局限性,影响了Edman液相和固相顺序法的灵敏度和精确度。近十年来,发展的高灵敏的顺序方法,主要集中于二点:一是采用放射性同位素,荧光基团或有色Edman试剂;二是     

6-苄氨基嘌呤延缓小麦叶片衰老机制的研究

6-苄氨基嘌呤在0.05 ppm浓度可以延缓离体小麦叶片的衰老,并且阻止游离氧基酸的迅速累积。核酸或蛋白质合成抑制剂当与6-苄氨基嘌呤同时处理离体叶片不能抵消6-苄氨基嘌呤的上述效应。6-苄氨基嘌呤的这种效应不是由于抑制了离体叶片的呼吸。~(14)C-葡萄糖参入实验及放射自显影图谱的比较表明6-苄氨基嘌呤阻止游离氨基酸累积既不是由于抑制了氨基酸以葡萄糖为碳架的合成,也不是通过刺激叶片蛋白质的合成,而是由于阻止了蛋白质的迅速降解。整体小麦幼苗仅仅在遮光下,6-苄氨基嘌呤才可以表现出对叶片游离氨基酸的累积的阻止作用。在自然光下则看不到6-苄氨基嘌呤的作用,这可能是由于在遮光下蛋白质降解加强的缘故。综上所述,认为6-苄氨基嘌呤延缓叶片衰老的作用可能主要是通过阻止叶片蛋白质的降解。     

其它药剂

<正>α一1一抗胰蛋白酶缺陷,导致发展成慢性梗阻肺气肿或初期肝硬变。这一缺陷是由于蛋白质中第342氨基酸密码的G一A移换。用寡核普酸探针分析了突变位点,与正常和缺陷基因互补的寡核昔酸是化学合成的,通常用来鉴定纯合隐性个体。在仔细控     

松江鲈鱼体表黏液抑菌效果研究

以松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)体表黏液作为试验材料,分别用水、酸、有机物3种不同的提取剂对其进行粗提取,采用滤纸片法和二倍稀释法确定其抑菌效果,只有酸的粗提物对所检测的6种病原菌有明显的抑制作用,且抑制作用由大到小的排列顺序是:维氏气单胞菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、沃氏葡萄球菌。用SDS-PAGE定量分析酸的粗提物蛋白质表达谱,其蛋白大小95 kD,且在34-55 kD之间含量最高。初步研究表明松江鲈鱼体表黏液酸的粗提物在抵抗上述病原菌入侵方面发挥了主要作用,其抗菌蛋白的确定还有待进一步分析。     

植物油和脂肪酸对灰树花深层发酵的作用*

研究了植物油、脂肪酸和不同氮源对深层培养的灰树花生物量及胞外多糖产量的影响。添加较低浓度的橄榄油有利于胞外多糖的生产,而较低浓度的豆油促进生物量的提高。本实验及文献报道的结果显示不同的脂肪酸对生物量和胞外多糖的作用效果大小顺序为棕榈酸（十六碳饱和酸）>油酸（一烯酸）>亚油酸（二烯酸）>亚麻酸（三烯酸）>硬脂酸（十八碳饱和酸）。豆饼粉和大豆粉作为氮源时对生物量和胞外多糖的作用是蛋白质和脂肪酸共同作用的结果。     

植物油和脂肪酸对灰树花深层发酵的作用

研究了植物油、脂肪酸和不同氮源对深层培养的灰树花生物量及胞外多糖产量的影响。添加较低浓度的橄榄油有利于胞外多糖的生产,而较低浓度的豆油促进生物量的提高。本实验及文献报道的结果显示不同的脂肪酸对生物量和胞外多糖的作用效果大小顺序为棕榈酸（十六碳饱和酸）>油酸（一烯酸）>亚油酸（二烯酸）>亚麻酸（三烯酸）>硬脂酸（十八碳饱和酸）。豆饼粉和大豆粉作为氮源时对生物量和胞外多糖的作用是蛋白质和脂肪酸共同作用的结果。     

混酸法降解植物纤维素技术研究

以单酸正交试验结果为基础,对二酸混合法和三酸混合法降解植物纤维素的最佳工艺条件进行了探讨。二酸混合法的结果表明,酸的添加顺序严重影响纤维素向葡萄糖的转化。强酸与弱酸同时混用均使葡萄糖的转化率降低。但盐酸与乙酸的混用效果则因所选最佳条件的不同而不同,虽然硫酸与盐酸均为无机强酸,与乙酸混用时添加的顺序亦一样即先弱酸后强酸,但其结果差别甚大,前者使葡萄糖的转化率降低,后者则使葡萄糖的转化率由40.9%锰增到62.7%。三酸混合法的结果表明,在本研究所选用的四种酸中,无论是哪三种酸同时混用,均使葡萄糖的转化率降低;当按一定顺序添加时,其结果亦不如二酸混合法,结论：在用多种酸降解植物纤维素时,一定要按一定的顺序添加,最好用两种酸即可。     

根据蛋白质的氨基酸组成实现其快速鉴定

常规进行蛋白质鉴定的方法是测定其氨基酸顺序,它需要蛋白质顺序分析仪,对蛋白质的纯度要求高,费时和花费大,与之相比,蛋白质的氨基酸组成和分子量是容易实验测定的。本文描述了一个基于蛋白质的组成和分子量进行其快速鉴定的方法。其基本出发点是,通过统计蛋白质序列数据库中每个序列的氨基酸组成和分子量,得到一个含蛋白质长度、组成和分子量的数据库,将靶蛋白质的组成等数据与该数据库进行对比,可以检出组成和分子量与之接近的蛋白质。从而对该蛋白质进行初步鉴定。在有些情况下,甚至能相当准确地确定靶蛋白质与数据库中的某个（些）蛋白质相关。根据这一原理本文设计了根据氨基酸组成检索蛋白质组成数据库的程序,通过对胰岛素原、细胞肿瘤抗原Ｐ５３和泛肽等多种蛋白质的组成分析,证实根据氨基酸组成能较好地进行蛋白质鉴定。     

氨基酸新的分离方法的研究

<正> 一氨基酸发现的历史众所周知,最初发现的氨基酸大部分是来自蛋白质水解产物。象从天门冬的根单独分离出天门冬氨酸及从膀胱结石中发现了胱氨酸这两种氨基酸最初虽不是作为蛋白质的组成而发现的。但后来发现它们也是蛋白质的组成成份。从而肯定了氨基酸是蛋白质的方式存在于自然界。1820年从明胶的水解液中分离出了甘氨酸,又名氨基乙酸。(当时,由于具有甜味曾被认为是糖)。后来,发现它是组成蛋白质成分。从而得知甘氨酸是构成蛋白质的第一个被发现的氨基酸。     

医学分子遗传学讲座 第五讲限制性片段长度多态性

每个个休在溃传上是不同的,而不同的本质不是 在基因产物＿匕而是在DNA水平上的差异。这些差异 大多数都是由于不编码蛋白质的区域和没有重要调节 功能的区域发生了中立突变,这些中立突变所构成的 DNA变异称为DNA多态性。DNA多态性本质是 由于进化过程中的各种原因引起染色体DNA中核营 酸排列顺序发生了改变,当这种改变涉及到限制性内 切酶识别位点时,利用限制性内切酶可将DNA切割 成不同长度的限制性片段。这类不同长度的限制性片 段类型在人群中所呈现的多态频率分布现象,就称为 限制制性片段长度多态性（RFLP)o RFLP具有广泛 的用途,它可以作为一种“遗传路标”,对人类基因组制 图提供必要的标记,当多态性顺序与人类遗传性疾病 位点连锁时,可作为遗传缺陷的产前诊断或是鉴别携 带者的标记,还可以应用于亲子鉴定和群体研究等方 面。     

核酸资料在植物系统与进化研究中的意义

对系统与进化学家来说,化石的作用是十分重要的,但目前普遍缺乏化石材料。在这种情况下,比较形态解剖学发挥了很大作用,但这类方法不能获得进化的时间尺度。近年来,分子钟(molecular clock)概念的出现使分子生物学为系统与进化的研究提供了新的工作方法。这种方法是基于核酸的碱基顺序及蛋白质的氨基酸顺序的变化速率的稳定性。由于在亿万年的进化历程中,核酸顺序和蛋白质顺序的变化相当缓慢,所以这些遗传语言(demantides)     

大壁虎线粒体基因组全序列及其结构(英文)

采用长PCR扩增、克隆和引物步行等方法,测定了大壁虎(Gekkogecko)线粒体基因组全序列。序列全长16435bp,共有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因和22个tRNA基因。基因组的组成、顺序、编码链的选择、tRNA的结构、较低的碱基G含量、对碱基T的偏好以及GC和AT偏斜,都与大部分脊椎动物相同或相近。但有些特征揭示了壁虎类的原始性蛋白质编码基因密码子第3位表现为对碱基A的偏好,更接近两栖类和鱼类而不是羊膜动物;标准终止密码子(TAA)只出现于3个蛋白质编码基因中,比大部分脊椎动物少。tRNA基因核苷酸长度为63～76nt,除了tRNACys和tRNASer(AGY)缺少D臂,其余的二级结构均呈典型的三叶草状。     

应用两种不同的酸水解方法水解纯蛋白质、食物和饲料时氨基酸的测定

<正> 为比较快速酸水解(由Gehrke推荐)和经典的酸水解方法,对含有不同量的蛋白质与非蛋白质组分的十五种动物和植物来源样品,用6N HCl 110℃24小时和145℃4小时两种酸水解方法进行了氨基酸测定。因高温、短时水解(HTST)方法曾仅用于纯蛋白质,此项工作的目的是证实这一水解方法能够应用于任何物质,特别是食物和饲料,