磁场对牲畜精子和植物发芽过程的影响--日本生物磁学研究简介之一

前言在１９９０年的时候，就见到了关于动物精子磁场效应的研究报告。其后，菅大助等又发表了一系列文章，报道了关于稳恒磁场（１０００mT）对牛精子存活率、游动率以及平均速率的影响以及弱磁场（６０mT）和含磁粒空间对牛精子的存活率、游动率、平均速率和人工授精的影响结果犤１，２犦。龟田裕孟等，在１９９０发表了人的精子垂直于磁场方向的取向研究犤３犦。芝田信之等，在１９９６年发表了牛的精子垂直于磁场方向取向的研究犤４犦。结果表明，人的精子，只在５０．５mT磁场下垂直取向率就达到７０％；牛的精子，在１００mT下开始受…     

POLG1外显子1、3、4、7突变与弱精子症的相关性及其对mtDNA和4977bp缺失的影响

为了探索POLG1外显子1、3、4、7突变与弱精子症的相关性及对mtDNA序列突变和4977bp缺失的影响,按WHO标准收集了120例弱精子症和101例精子活力正常的精液标本,经PCR测序分析POLG1外显子1、3、4、7突变,继而测序检测9例外显子4c．948G〉A突变的弱精子症标本、9例无C．948G〉A突变的弱精子症标本和9例正常对照标本的mtDNA全序列,利用巢式PCR技术分析94Pie．948G〉A突变标本、9例无C．948G〉A突变的弱精子症标本和9例对照标本的4977bp缺失。结果显示：在120例弱精子症中发现P说G,外显子4c．948G〉A突变9例（7．5％）,显著高于对照组（0％,P〈0．05）。c．948G〉A突变组mtDNA全序中突变率与对照组比无统计学差异俨〉0．05）。作者关注的两组中,突变数有差异的位点累积突变频次突变组显著高于对照组俨〈0．05）,但与无C．948G〉A突变的弱精子症标本的累积突变频次比较无统计学意义;突变组mtDNA4977bp缺失率（7／9,77．8％）显著高于对照组（2／9,22．2％,P〈0．05）和无c．948G〉A突变的弱精子症组（2／9,22．2％,P〈0．05）。以上结果提示,弱精子症的发生可能与POLG,c．948G〉A突变有相关性,弱精子症线粒体DNA某些位点的累积突变率增高,但可能不是POLGlc．948G〉A突变引起;c．948G〉A突变可能会增加mtDNA4977bp缺失,从而影响精子线粒体功能,导致精子活动力下降。     

线粒体呼吸功能与精子活力、核DNA损伤的相关性分析

为探讨线粒体呼吸功能与精子活力、核DNA损伤程度之间的相关性,按WHO标准收集34例不同活力的精液标本,采用蔗糖差速离心法或密度梯度离心法提取精子线粒体,通过铂氧电极-溶氧仪测定线粒体呼吸耗氧率并计算状态III呼吸、状态IV呼吸、呼吸控制率（RCR）、磷氧比（P／0）及氧化磷酸化效率（0PR）;应用精子染色质扩散（sperm chromatin dispersion,SCD）实验检测精子DNA损伤情况。结果表明：不同活力精子线粒体状态Ⅲ呼吸耗氧量之间具有显著差异俨〈0．01）;弱精子症组RcR和OPR与正常对照组比较,分别降低了17．03％（P〈0．05）和40．74％（P〈0。01）;精子DNA损伤程度与精子活力、状态III呼吸及OPR均呈极显著负相关（r值分别是-0．812、-0．788和-0．696）。以上结果提示：精子线粒体呼吸耗氧和氧化磷酸化功能与精子活力之间存在着密切的联系;精子DNA（包括mtDNA）损伤可能影响精子的正常功能。     

苯甲基磺酰氟（PMSF）在犬精子4℃保存中的作用

目的探讨4℃保存的条件下,苯甲基磺酰氟（phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF）对犬精子的保护作用。方法犬精子以含不同浓度PMSF的Tris-卵黄液（Tris-egg yolk,EYT）处理后,于4℃低温保存,在24、48、72、96 h分别以伊红、瑞-吉和吖啶橙染色检测精子活率、顶体膜和DNA完整性。结果低温保存24 h后,吖啶橙染色检测DNA断裂率（%）：对照组（5.93±0.32）,实验组：20μg/mL（4.50±0.38）、40μg/mL（4.20±0.25）、80μg/mL（4.21±0.46）、160μg/mL（3.87±0.67）,P〈0.05;各浓度组之间没有明显差异;72 h后,犬精子活率仍〉30%;96 h内,对照组和实验组犬精子在活率、顶体膜完整性上未见明显差异。结论PMSF于4℃低温保存条件下对犬精子具有保护作用,24 h内能有效保护精子DNA双链的完整性,4℃低温保存72 h后,犬精子仍符合人工授精要求。     

周期加载对VEC-304细胞株迁移、增殖分布的影响

在弹性膜上接种VEC－304,融合生长后擦去周边细胞形成一规则圆斑,使用弹性膜周期加载装置,对生长在弹性膜上的VEC－304圆斑施以15％拉伸应变,经显微镜观察,计算机图像处理了解细胞增殖、迁移时间过程及增殖细胞在应变场中的分布,细胞银染了解细胞形态及细胞连接情况,免疫荧光染色观察增殖细胞的分裂极。结果发现：（1）随加载时间延长圆斑沿与应变垂直向伸展成椭圆形,24h两径出现明显差异;（2）随时间增加圆斑面积扩大,但实验组沿与加载垂直方向的增大较沿加载方向为大;（3）细胞有丝分裂器（中心粒）位于细胞短轴即加载方向;（4）加载后细胞较对照组排列紧密,细胞间距更小,且出现较为明显的重叠生长现象。VEC－304在应变场中的运动迁移、增殖具有方向依赖性,周期加载可以促进细胞间连接。     

光系统Ⅱ反应中心CP47／D1／D2／Cyt b—559复合物中色素分子空？…

线二色光谱（ＬＤ）是研究色素分子在光合膜上空间取向和排布的重要手段。采用低温（１００Ｋ）吸收光谱和线二色光谱技术研究光系统Ⅱ核心复合物ＣＰ４７／Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔ ｂ－５５９中色素分子的空间取向。结果表明,在光系统Ⅱ核心复合物ＣＰ４７／Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔ ｂ－５５９中６８０ｎｍ处有吸收的叶绿素分子Ｑｙ跃迁与光合膜平面平行。β－胡萝卜素分子有两种不同的空间取向,其中在４７０和５０５ｎｍ处有吸收的β－     

缺血／再灌注损伤对心肌细胞核膜NTPase活性和mRNA出核转运的影响

目的：观察家兔心肌缺血／再灌注（I／R）损伤对心肌细胞核膜核苷三磷酸酶（NTPase）动力学及mRNA出核转运的变化。方法：制备家兔离体心脏I／R模型,密度梯度离心法制备心肌细胞核膜,按Tiffany等的方法测定NTPase活性及mRNA的转运率。结果：心肌细胞核膜NTPase在以ATP或GTP为底物时,与对照组比较,I／R组最大反应速率（Vmax)分别降低26％及22％（P＜0．01）。Km值分别升高54％及72％（P＜0．01）;而缺血组Vmax及Km值较对照组无明显差异。以ATP或GTP启动反应时I／R组10min内心肌细胞核mRNA转出率分别较对照组降低27％及32％（P＜0．01）;而缺血组与对照组相比并无显著性差异（P＞0．05）。结论：心肌缺血／再灌注损伤时,心肌细胞核膜受损,核膜上NTPase活性降低,导致细胞核膜mRNA出核受阻,从而可能影响蛋白质的合成表达。     

脑动脉粥样硬化患者红细胞膜粘弹性与宏观血液流变学相关性的初步研究

本文采用微管吸吮技术研究了脑动脉粥样硬化患者与正常健康人红细胞在吸进微管的变形过程,采用二维Ｋｅｌｉｖｉｎ模型拟合实验结果,定量地比较患者与正常人红细胞膜的粘弹性,并采用新定义的对数还原复粘度法运用Ｌｏｗｓｈｅａｒ３０等仪器对患者与正常人宏观血液流变学参量之间相关性进行了研究,结果表明：脑动脉粥样硬化患者红细胞弹性系数（（５．７４±１．７７）×１０－３ｄｙｎ／ｃｍ）略高于正常人（（５．３６±０５６）×１０－３ｄｙｎ／ｃｍ）,而粘性系数（（４．１１±１．６８）×１０－４ｄｙｎ·ｓ／ｃｍ）明显高于正常（（１．９１±０．９６）×１０－４ｄｙｎ·ｓ／ｃｍ）,全血粘度及对数还原粘弹性Ｌ１及Ｌ２在由低到高各剪切率下,患者明显高于正常人。红细胞粘滞性增大,变形能力降低,这正是宏观血液流变学指标增高主要原因之一,也可能是造成患者脑硬塞的主要原因。     

实验性胃肠道功能紊乱症G、D细胞的变化及其意义

探讨G细胞（分泌Gas）、D细胞（分泌SST）与胃肠道功能紊乱发生的关系。用抗－Gas、抗－SST的多克隆抗体和免疫组织化学技术标记胃窦、十二指肠粘膜G、D细胞,运用医学图象分析系统（MIPS）对G、D细胞进行定量分析,并用四君子汤反证,实验表明胃肠道功能紊乱模型大鼠与正常对照组相比,胃窦、十二指肠粘膜G、D细胞数均减少（P＜0.05）,D细胞面积缩小（P＜0.05）,G细胞灰度值增高（P＜0.05）,G／D细胞数和细胞面积比值均增高（P＜0.05）。经四君子汤预防和治疗的胃肠道功能紊乱模型大鼠,G、D细胞数有所增加,D细胞面明显增大,G细胞灰度值、G／D细胞数和细胞面积比值均接近或略低于正常。自然恢复大鼠也有一定程度的改善。但也经四君子汤预防和治疗的大鼠相比有显差异。研究结果从形态学上揭示D细胞分泌SST亢进、G细胞释放Gas不足、G／D细胞比值失调,是导致胃肠道功能紊乱症发生的一个重要病理机制。     

粗糙沼虾精子的超微结构研究

利用电镜及细胞化学方法,研究了粗糙沼虾（Ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍ ａｓｐｅｒｕｌｕｍ）精子的形态和超微结构。结果表明：精子无鞭毛、不运动,由后主体部、中间帽状体和前端棘突组成。主体部呈浅状,内有非浓缩的核,核内含有许多泡囊造近帽状体的核部,分布着许多膜本,膜层体与帽状体紧密相连。棘突具有间隔约３１ｎｍ的珏纹。环纹由直径为４～６ｎｍ的丝状体组成并与环纹相垂直。精子无明显的顶体区。     

家养双峰驼卵巢卵母细胞的体外受精与早期发生的初步研究

本研究将采自屠宰母驼的卵卵母细胞在含有促性腺激素和胎牛血清的Ｍ１９９培养液中培养成熟后,将公驼附睾精子于含有咖啡因和牛血清蛋白的ＢＯ培养液中进行获能培养２小时,然后将成熟卵母细胞移入经过培养的精子悬液中,６－７小时以后将卵子移入含有胎牛血清及及丙酮酸钠的Ｍ１９９中继续培养。结果表明,经过成熟培养后有４６．７％（１４／３０）的卵母细胞发育为成熟卵子,并获得了４３．２％（１６／３７）的体外受精率,实验     

脑动脉粥样硬化患者红细胞膜粘弹性与宏观血液流变学相关性的初步研究

本文采用微管吸吮技术研究了脑动脉粥样硬化患者与正常健康人红细胞在吸进微管的变形过程,采用二维Ｋｅｌｉｖｉｎ模型拟合实验结果,定量地比较患者与正常人红细胞膜的粘弹性,并采用新定义的对数还原复粘度法运用Ｌｏｗｓｈｅａｒ３０等仪器对患者与正常人宏观血液流变学参量之间相关性进行了研究,结果表明：脑动脉粥样硬化患者红细胞弹性系数（（５．７４±１．７７）×１０－３ｄｙｎ／ｃｍ）略高于正常人（（５．３６±０５６）×１０－３ｄｙｎ／ｃｍ）,而粘性系数（（４．１１±１．６８）×１０－４ｄｙｎ·ｓ／ｃｍ）明显高于正常（（１．９１±０．９６）×１０－４ｄｙｎ·ｓ／ｃｍ）,全血粘度及对数还原粘弹性Ｌ１及Ｌ２在由低到高各剪切率下,患者明显高于正常人。红细胞粘滞性增大,变形能力降低,这正是宏观血液流变学指标增高主要原因之一,也可能是造成患者脑硬塞的主要原因。     

化学诱发大鼠肝癌的亚细胞组分中两类丝氨酸蛋白激酶的动态变化

用二乙基亚硝胺大鼠肝癌,隔周测定肝脏胞液、膜性和胞核中的蛋白激酸Ａ和蛋白激酶的活力,发现胞液ＰＫＡ在诱癌过程中活力改变不大,胞淮ＰＫＣ则逐步增高,在第１３周和２０周形成两个活力高峰。膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都呈双相变化,即在癌前期（１０－１４周）增加,癌形成期（１７－２０周）反而降至正常以下,胞核ＰＫＡ和ＰＫＣ也都在癌前期升至高峰,而癌形成期则低于癌前期,但仍高于正常或接近正常,因只有膜性ＰＫＣ在大鼠老     

400例消化系统恶性肿瘤患者血清TSGF检测的临床分析

目的探讨肿瘤特异性生长因子（TSGF）在消化系统恶性肿瘤诊断上的价值及其临床意义。方法用生化比色定量法及TSGF检测试剂盒测定血清中TSGF的含量。结果400例消化系统恶性肿瘤患者血清TS-GF的含量（71．37±11．24u／ml）显著高于正常对照组血清TSGF的含量（59．75±4．45u／ml）（P〈0.01）,阳性检出率达79．80％。另外,在60例进行化疗的患者中,18例有效者化疗后血清TSGF的含量（61．28±6．05u／ml）较化疗前（83．01±4．57u／ml）明显下降（P〈0．01）,6例化疗无效者化疗后血清TSGF的含量（86．51±5．82u／ml）显著高于化疗前（65．76±5．92u／ml）（P〈0．01）。结论TSGF是一种新的、敏感性高的肿瘤标志物,对于消化系统恶性肿瘤的诊断、评价疗效和判断预后,均有临床意义。     

利用不同稀释剂对长期保存的猪精液质量检测

目的：由于冷冻保存的猪精液在解冻后会出现低成活率和低繁殖率的情况,本项目研究猪精液的低温长期保存和保存后的精子质量评定。方法：本实验选用目前常用的BTS,ANDROHEP,KIEV,ZORLESCO等四种稀释剂,将猪新鲜精液进行稀释（1：1）后分别于17℃保存15天,每天取样对精子的质量进行评价,利用荧光染料Hoechst 33258和SYBR－14／碘化丙碇（PI）分别检测精子死活;利用活体荧光染料JC－1检测精子线粒体活性;利用考马斯亮兰染色检测精子顶体状态;利用金霉素（CTC）检测精子是否获能。结果：SYBR－14／PI和Hoechst 33258两种方法检测精子死活都很灵敏,前检测的活精子比例较后稍高,但都低于JC－1检测的线粒体有活性的精子比例,说明精子线粒体活性损失要慢于质膜完整性的破坏;活精子比例和线粒体活性在保存的前8天都是缓慢减少,获能比例和顶体状态分别在第9－14天和第11天变化较大,利用AN和ZO保存13天,BTS保存10天以及KIEV保存9天的精液中精子的活率,顶体完整率及线粒体有活性的比例仍高于50％,提示这些精液仍可用于人工授精或体外受精,这四种稀释剂保存15天后的精子获能比例接近70％,Hoechst33258,SYBR-14,JC-1,考马斯亮兰检测结果亮度相关。结论：这四种稀释剂对精子的低温保存效果依此为：AN＞ZO＞BTS＞KIEV。     

内皮素和bFGF对MC的促增殖作用及胰岛素的协同效应

采用３Ｈ－ＴｄＲ参入法,测定碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、胰岛素和内皮素－１（ＥＴ－１）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖的影响,以及胰岛素与ｂＦＧＦ或ＥＴ－１促ＭＣ增殖的协同作用。结果表明,不同浓度的ｂＦＧＦ（５－２００ｎｇ／ｍｌ）和胰岛素（０．１－２．４Ｕ／ｍｌ）均显著升高ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入值（ｃｐｍ值）（Ｐ＜０．０１）。ＥＴ－１对ＭＣ的ｃｐｍ值的影响依剂量不同呈现两种不同的效应,在１０－９－１０－７ｍｏｌ／Ｌ时,随着浓度的升高,ＭＣ的ｃｐｍ值明显升高（Ｐ＜０．０１）,并以１０－８ｍｏｌ／Ｌ作用最强;当升高到１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＣ的ｃｐｍ值出现降低趋势。胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度ＥＴ－１（≤１０－８ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值明显高于二者单独作用之和（Ｐ＜０．０１）,与高浓度ＥＴ－１（＞１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值小于二者单独作用之和（Ｐ＞０．０５）。上述结果说明,胰岛素、ｂＦＧＦ和ＥＴ－１均能显著促进ＭＣ增殖;胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度的ＥＴ－１促ＭＣ增殖具有正协同作用,与高浓度ＥＴ－１呈现负协同作用。     

化学诱发大鼠肝癌的亚细胞组分中两类丝氨酸蛋白激酶的动态变化

用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌,隔周测定肝脏胞液、膜性和胞核中的蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力。发现胞液ＰＫＡ在诱癌过程中活力改变不大,胞液ＰＫＣ则逐步增高,在第１３周和２０周形成两个活力高峰。膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都呈双相变化,即在癌前期（１０－１４周）增加,癌形成期（１７－２０周）反而降至正常以下,胞核ＰＫＡ和ＰＫＣ也都在癌前期升至高峰,而癌形成期则低于癌前期,但仍高于正常（ＰＫＡ）或接近正常（ＰＫＣ）。因只有膜性ＰＫＣ在大鼠老化时降低,故这些变化不是鼠龄变化的结果,而是ＤＥＮ诱癌所引起,其变化机理可能与下降调节、细胞内转位或两型同工酶相反的升降变化有关。     

P物质对大鼠DRG神经元胞体膜的作用

本文在大鼠ＤＲＧ神经元标本上应用细胞内记录,以确定ＳＰ对ＤＲＧ细胞的膜反应及其可能的离子机制。实验所测ＤＲＧ细胞静息膜电位为－５８．９±８．２ｍＶ（Ｘ±ＳＥ,ｎ＝８１）。传导速度：Ａ_（α／β）细胞为２０．４±４．８ｍ／ｓ（Ｘ±ＳＥ）,范围１４．１－２８．７ｍ／ｓ（４７／６０）;Ａδ及Ｃ类细胞为９．８±５．２ｍ／ｓ,范围１．２－１３．７ｍ／ｓ（１３／６０）。浴槽滴加ＳＰ（１０￣（－７）－３×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）在大多数细胞可引起明显的膜去极化反应（５６／６０）。少数细胞对ＳＰ无反应（４／６０）。在ＳＰ去极化期间膜电导值有所增加,从平均值２．７２×１０￣（－８）ｍｈｏ增加２４．６％（ｎ＝３）。所测逆转电位值在＋４０－＋５０ｍＶ之间（ｎ＝３）。浊流平衡液（ＢＳＳ）中ＮａＣｌ以氯化胆碱置代,或用含ＴＴＸ（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）的ＢＳＳ灌流,可使ＳＰ－去极化幅值大大减小但不能完全消除。而高（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）和低（０ｍｍｏｌ／Ｌ）Ｃａ￣（２＋）的ＢＳＳ灌流时,使ＳＰ－去极化幅值相应的增加和降低。用含１０￣（－４）ｍｏｌ／ＬＣｄ￣（２＋）及１０￣（－２）ｍｏｌ／ＬＴＥＡ的ＢＳＳ灌流,均使ＳＰ－去极化明显减小。     

多色荧光原位杂交检测小鼠精子非整倍体

比多色荧光原位杂交技术评价了２－（４－噻唑）苯丙咪唑（ＴＢ）在雄性小鼠生殖形成过程中的非整倍体诱发效应。根据小鼠精子发育周期,以口饲法处理动物１１天,间隔２２天后取小鼠精子涂片,聚合应用８号,Ｘ及Ｙ染色体特异性ＤＮＡ探针进行多色ＦＩＳＨ,检测精子中出现的二倍体、双体、和缺本频率。结果发现：在２００ｍｇ／ｋｇ剂量组,上述３类异常精子频率均显著高于溶剂对照,其他２个剂量组的非整倍体精子频率与对照无显著     

牛体外受精的程序及超微结构研究

牛体外成熟卵母细胞体外受精后３小时精子入卵,８小时原核形成,２４小时的核多到卵中央。精子发生顶体反应的部位主要在透明表面,方式是顶体外膜自身囊经,发生顶体反应的粗子可斜向或垂直穿过透明带。卵丘细胞可吞噬大量精子,在阻多精受精中发挥重要作用。高尔基得合体,线料体、环状片层和滑面内质网等在原核周围形成细胞器集团。牛体外受精卵的雌雄原结合比体内受精的要延迟,胞吐到卵周隙中的皮质颗粒内容物扩散不完全。