微生物转谷氨酰胺酶(MTGase)的AOT反胶束纯化研究

研究微生物转谷氨酰胺酶(MTGase)反胶束纯化的工艺和条件,调节MTGase离心上清液等电点,除去部分杂蛋白,MTGase活力升高7.5倍;用截留分子量为10000的超滤膜除去小分子杂蛋白,MTGase活力升高1.33倍;用0.05mol/L的AOT/异辛烷反胶束进一步纯化MTGase,其最适萃取条件是粗MTGase蛋白质浓度20mg/mL,[Na ]0.12mol/L,水相pH4.80～5.20,相比1:1(v/v);荷载MTGase的AOT反胶束用2.0mol/LKCl进行反萃取,MTGase活力为14.2U/g,纯化8.875倍;冷冻干燥脱盐反萃取液,获得MTGase冻干粉,其活力为110.3U/g,与粗酶液相比较,纯化689.4倍。经过AOT/异辛烷反胶束萃取纯化的MTGase,其SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条带。Ca2 与表面活性剂非极性尾上丁二酰羰基氧、极性头磺酸基硫氧基氧及MTGase分子表面具有孤电子对的基团的配位结合放大了AOT反胶束的另一种萃取作用——配位萃取,致使其对MTGase的萃取率高于K 而接近Na 。     

萌发绿豆种子中的一种大豆胰蛋白酶抑制剂钝化酶

通过 30 %～ 6 0 % (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀、DEAE_SepharoseCL_6B离子交换层析、SephacrylS_2 0 0凝胶过滤层析和WatersAP_1离子交换层析 ,从萌发的绿豆 (Vignarabiata (L .)Wilczek)种子中分离纯化出一种可降解大豆胰蛋白酶抑制剂 (STI)的蛋白酶。SDS_PAGE测定该酶的分子量为 2 9.8kD。该酶催化降解STI的Km 值为 76 9.2BAEE/mL ,Vmax为 115 .3BAEE·mL-1·min-1。该酶在 5 0℃、pH 8.0、相对酶活力 5 0 0 0BAEE/mL和 4h的反应时间时可将脱脂大豆粉中的STI活性钝化 90 .91%。该酶在温度低于 5 0℃及pH 6 .5～ 8.5时能保持其活性。     

反胶束体系中脂肪酶催化合成生物柴油

本文采用了实验室自制的Candida sp.99-125脂肪酶, 研究了其在丁二酸二酯磺酸钠(AOT)反胶束体系中, 催化大豆色拉油合成生物柴油的新方法。考察了溶剂极性、AOT浓度、W0(水与表面活性剂质量比)、缓冲溶液pH值、温度等因素对脂肪酶催化合成生物柴油的影响。研究结果表明: AOT/异辛烷反胶束体系为Candida sp.99-125脂肪酶催化提供了较为合适的微环境, 在W0为11, 表面活性剂浓度为50 mmol/L, 温度为40℃, 缓冲液pH值为7的AOT/异辛烷反胶束体系中, 醇油摩尔比为3∶1, 摇床转速为180 r/min, 采用12h3次流加1 mol当量的甲醇, 单批最高酯转化率可以达到90%。     

萱草的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　萱草 (Hemerocallishybrida)。2　材料类别　茎尖。3　培养条件　 ( 1 )愈伤组织诱导培养基 :MS +6 BA 2 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .2 ;( 2 )丛生芽诱导培养基 :MS + 6 BA 4.0 +NAA 0 .4;( 3)生根培养基 :1 /2MS +IBA 1 .5。以上培养基均附加 3%蔗糖、琼脂 0 .6% ,pH 5 .8。培养温度为( 2 2± 1 )℃ ,光照 1 0h·d- 1 ,光照度为 2 5 .1～ 2 5 .3μmol·s- 1 ·m- 2 。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　将清洗干净的萱草茎尖用自来水冲洗过夜 ,在无菌条件下 ,用 75 %酒精消毒1 5s,再转入 0 .1 %升汞溶液浸…     

AOT/异辛烷反胶束萃取纯化胰蛋白酶及酶变性失活问题的解决

用反胶束技术分离纯化蛋白质,具有高选择性、易于大规模操作等优点,具有良好的工业应用前景。但是离子型表面活性剂形成的反胶束体系萃取蛋白质容易引起蛋白质的变性,这是由于离子型表面活性剂的强电荷作用所导致的。对用AOT/异辛烷反胶束体系从胰酶粗提物中萃取胰蛋白酶进行了研究,通过在反胶束相加入乙醇,解决了反胶束萃取蛋白质时蛋白质变性失活的问题。并且由于乙醇的加入大大减少了分相的时间,简化了实验步骤,优化了实验方法,使此技术在工业上的大规模应用成为可能。通过优化各种实验条件,胰蛋白酶的前萃取率达到90%,反萃取率接近100%。最终得率为88%。纯化后的比活提高了5倍多,从300U/mg左右提高到了1800U/mg。     

溶血卵磷脂对大豆下胚轴质膜H^＋—ATPase ATP和对—硝基苯磷酸水解活性的影响

研究了溶血卵磷脂 (lysophosphatidylcholine,lyso PC)对大豆 (Glycinemax (L .)Merr.)下胚轴质膜H _ATPaseATP和对_硝基苯磷酸 (ρ_nitrophenylphosphate ,PNPP)水解的影响。结果显示 ,lyso_PC可以刺激ATP水解活力 ,当lyso_PC浓度在 0～ 0 .0 3%范围时 ,ATP水解活力明显提高 ,lyso_PC浓度高于 0 .0 3%后增加缓慢 ;当lyso_PC浓度为0 .0 3%时 ,ATP水解活力提高 80 .5 %。动力学分析表明 ,lyso_PC处理可以使ATP水解的Vmax从 0 .46 μmolPi·mg-1protein·min-1升高到 0 .87μmolPi·mg-1protein·min-1;使Km 从 0 .88mmol/L升高到 1.15mmol/L。最适pH也从 6 .5变为 7.0。实验还发现lyso_PC可以促进羟胺对ATP水解的抑制作用 ,lyso_PC处理后ATP水解被羟胺 (2 0 0mmol/L)抑制 84.4% ,而未经lyso_PC处理的对照组则仅被抑制 74.4%。然而 ,lyso_PC处理不影响PNPP水解活力和钒酸钠抑制效应。以上结果表明 ,质膜H _ATPase的激酶结构域可能是其C末端自抑制结构域的作用位点或调节区域     

用乙醇消除AOT/异辛烷反胶束体系萃取过程中蛋白质的变性失活

用反胶束技术分离纯化蛋白质,具有高选择性、易于大规模操作等优点,具有良好的工业应用前景。但是离子型表面活性剂形成的反胶束体系萃取蛋白质容易引起蛋白质的变性,这是由于离子型表面活性剂的强电荷作用会导致蛋白质发生变性,从而在两相界面上产生沉淀。这也是离子型反胶束体系用于蛋白质萃取所存在的最大的困难。本文对用AOT/异辛烷反胶束体系从胰酶粗提物中萃取胰蛋白酶进行了研究,通过在反胶束相加入乙醇,解决了反胶束萃取蛋白质时使蛋白质变性失活的问题,并且大大减少了分相的时间。前萃取和反萃取之后的分相时间只需要10分钟左右,简化了实验步骤,优化了实验方法,在工业上的大规模应用成为可能。在本研究中,胰蛋白酶的前萃取率达到90%,反萃取率接近100%。最终得率为88%。纯化后的比活提高了5倍多,从300U/mg左右提高到了1800U/mg。     

珍珠菜提取物抗肿瘤作用的初步研究

观察灌服珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S1 80 )的抑制作用 ,用相同方法跟踪珍珠菜的抗肿瘤有效部位。用紫外分光光度法 ,观察了珍珠菜提取物对环磷酰胺造成骨髓抑制的保护作用 ;采用 MTT法观察不同浓度珍珠菜提取物对人白血病 HL - 6 0及 K 5 6 2细胞的体外抑制作用。结果表明珍珠菜浸膏 ( 40 0 0 m g/ kg· d)、石油醚部位 ( 2 0 0 m g/kg· d)、氯仿部位 ( 2 0 0 m g/ kg· d)、乙酸乙酯 ( 2 0 0 mg/ kg· d)部位、正丁醇部位 ( 2 0 0 mg/ kg· d)及水溶性部位 ( 2 0 0mg/ kg· d)对小鼠肉瘤 ( S1 80 )抑瘤率分别为 5 2 .74%,16 .5 1%,2 8.41%,42 .17%,48.2 1%,2 5 .2 4%;小鼠灌服环磷酰胺 ( 2 5 mg/ kg· d)能引起骨髓抑制而使骨髓中 DNA含量下降 ,如同时灌服珍珠菜浸膏 ( 2 0 0 0 m g/ kg· d)则可使小鼠骨髓 DNA含量恢复至接近正常水平 ;珍珠菜总黄酮提取物 ( 2 10μg/ m L )、乙酸乙酯部位 ( 180μg/ m L )、正丁醇部位 ( 2 10μg/ m L )作用 48h对 HL - 6 0细胞的抑制率分别为 35 .6 6 %,45 .85 %,42 .36 %;IC5 0分别为 92 .85 ,16 4.93,40 2 .6 1μg/ m L ;对 K5 6 2细胞抑制率为 5 9.94%,70 .34%,77.98%;IC5 0分别为 17.6 4,5 2 .5 3,6 4.70μg/ m L。因此 ,珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180 )有显     

球根秋海棠的快速繁殖

1　植物名称　球根秋海棠 (Ｂｅｇｏｎｉａｔｕｂｅｒｈｙｂｒｉｄａ)。2　材料类别　种子、茎段、茎尖。3　培养条件　 ( 1 )种子萌发培养基 :ＭＳ 2 %蔗糖 ;( 2 )茎段、茎尖初始培养基 :1 /3ＭＳ 6 ＢＡ 0 .2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＩＢＡ 0 .0 2 2 %蔗糖 ;( 3)增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5～ 1 .0 ＩＢＡ 0 .2 2 .5 %蔗糖 ;( 4 )生根培养基 :1 /2ＭＳ ＩＢＡ 0 .5 3%蔗糖。上述培养基中均加入ＰｏｌｙＧｕｍ 4.5 ｇ·Ｌ- 1(ＰｏｌｙＧｕｍ是河北省林业科学院和河北省科技大学轻工系联合研制的微生物多糖培养基固化剂 )…     

袋鼠花的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　袋鼠花 (Anigozanthosflavidus) ,又名袋鼠藤。2　材料类别　茎尖、幼嫩的茎段。3　培养条件　以MS为基本培养基。丛生芽诱导培养基 :( 1 )MS + 6 BA 2mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .2 ;( 2 )MS + 6 BA 1 .5 +NAA 0 .2 ;( 3)MS+ 6 BA 0 .5 +IBA 0 .2。增殖培养基 :( 4 )MS + 6 BA 1 +NAA 0 .2。生根培养基 :( 5 ) 1 / 3MS +IBA0 .1～ 0 .5 + 0 .7%琼脂粉 + 0 .5 %活性碳 + 1 .5 %蔗糖 ;( 6) 1 / 2MS +NAA 0 .5。除培养基 ( 5 )外 ,其它均加 3%的蔗糖。培养基 ( 1 )～ ( 4 )琼脂含量均为0 .7%。pH 5 .8。培养…     

吊篮矮牵牛的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　吊篮矮牵牛 (Petuniaspreding)。2　材料类别　茎尖、带腋芽的茎段、叶片。3　培养条件　芽诱导培养基 :( 1 )MS + 6 BA 2 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .5 ,( 2 )MS + 6 BA 1 .0 ,( 3)MS + 6 BA 0 .5 ,( 4 )MS + 6 BA 1 .5 +NAA0 .2 ;增殖培养基 :( 5 )MS + 6 BA 0 .5 ;生根培养基 :( 6) 1 /2MS +NAA 0 .0 5。以上培养基均附加蔗糖3%、卡拉胶 0 .62 % ,pH 5 .8。培养温度 ( 2 5±1 )℃。光照 1 0h·d- 1 ,光照度 2 0 0 0lx。4　生长与分化情况　取盆栽于温室中的植株枝条约 1 0cm ,在室内用自来水冲洗干净 ,…     

彩叶草的组织培养

1　植物名称　彩叶草 (Coleusblumeivar.ver schaffeltii)。2　材料类别　茎段 (shoots)。3　培养条件　培养基 :( 1 )MS ;( 2 ) 1 /4MS + 6 BA0 .3mg·L- 1 (单位下同 ) ;( 3) 1 /4MS +NAA 0 .0 5 +6 BAl.0 ;( 4 ) 1 /4MS +NAA 0 .1 + 6 BA 2 .0 ;( 5 )1 /2MS + 6 BAl.0 ;( 6) 1 /2MS +NAA 0 .0 5 + 6 BA2 .0 ;( 7) 1 /2MS +NAA 0 .1 + 6 BA 0 .3;( 8)MS +6 BA 2 .0 ;( 9)MS +NAA 0 .0 5 + 6 BA 0 .3;( 1 0 )MS +NAA 0 .1 + 6 BAl.0。上述培养基中加 30 g·L- 1 蔗糖 (sucrose)和 0 .6%的琼脂粉 (agar) ,pH5 .8。…     

星点木的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　星点木 (Dracaenagodseffiana)。2　材料类别　茎尖 (buds)、带节茎段 (stemseg mentswithnod)。3　培养条件　丛生芽诱导及增殖培养基 :( 1 )MS + 6 BA 2 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .2 ;( 2 )MS + 6 BA 1 .0 +NAA 0 .1 ;( 3)MS + 6 BA0 .5 +NAA 0 .0 5。生根培养基 :( 4 ) 1 /2MS ;( 5 )MS ;( 6)MS +NAA 0 .5。以上培养基均含 30 g·L- 1 蔗糖 (sucrose)、0 .7%琼脂 (agar) ,pH 5 .5～ 5 .8,。培养温度 ( 2 8± 2 )℃ ,光照度 1 5 0 0～ 2 0 0 0lx ,光照 1 2h·d- 1 。4　生长与分化情况4.1　丛生芽的诱导…     

大花蕙兰的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　大花蕙兰 (Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｆｌｏ ｒｕｍ)。2　材料类别　茎段。3　培养条件　 (1 )原球茎诱导增殖培养基 :ＭＳ +6 ＢＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) +ＮＡＡ 1 .0。 (2 )原球茎分化培养基 :ＭＳ +6 ＢＡ 2 .0 +ＮＡＡ 1 .0 +香蕉泥 1 5 0 ｇ·Ｌ- 1 。 (3 )生根培养基 ,1 /2ＭＳ +ＮＡＡ1 .0。ｐＨ 5 .6～ 5 .8,蔗糖 3 0 ｇ·Ｌ- 1 、琼脂 5 ｇ·Ｌ- 1固化培养 ,培养温度 (2 5± 2 )℃ ,环境湿度 6 0 %～80 % ,光照度 2 5 0 0ｌｘ ,每天光照 1 2ｈ。4　生长与分化情况4.1　启动培养　取大花蕙兰茎段 ,流…     

柳兰的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　柳兰 (Chamaenerionangustifoli um)。2　材料类别　带茎节的茎段。3　培养条件　芽诱导培养基 :MS + 6 BA 2mg·L- 1 (单位下同 ) +IBA 0 .5 +LH(水解乳蛋白 ) 5 0 0 ;增殖培养基 :MS + 6 BA 0 .5 +IBA 0 .1 ;生根培养基 :1 / 2MS +NAA 0 .1。培养基附加 0 .8%琼脂、3%蔗糖 ,pH值为 5 .6～ 5 .8。培养温度为( 2 0± 2 )℃ ,光照时间 1 4h·d- 1 ,光照度 1 60 0lx。4　生长与分化情况4.1　不定芽的诱导　选当年生的幼嫩枝条 ,在流水中冲洗 2h后 ,剪成 3cm长茎段 ,用滤纸吸去多余的水分 ;在超净工作台上用 70 %的酒精…     

红果冬青的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　红果冬青 (Ｅｕｏｎｙｍｕｓｊａｐｏｎｉｃａｓｃｖ .“ｈｏｎｇ”)。2　材料类别　带腋芽的茎段。3　培养条件　 (1 )预分化培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 .5 3 %蔗糖 0 .6 5 %琼脂 ;(2 )分化和继代培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ1 .0 ＮＡＡ 0 .5 3 %蔗糖 0 .6 5 %琼脂 ;(3 )生根培养基 :1 / 2ＭＳ ＮＡＡ 0 .2 2 %蔗糖 0 .6 %琼脂。培养基ｐＨ值为 6 .0 ,培养温度 2 0 2 5℃ ,每天光照 1 2ｈ ,光照度 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　将顶芽或带腋芽的茎段剪去叶片 ,留…     

樱桃番茄的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　樱桃番茄 (Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎ ｔｕｍｖａｒ.ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ)。2　材料类别　带芽的茎段、种子。3　培养条件　带芽的茎段生长培养基 :(1 )ＭＳ 0 .0 1ｍｇ·Ｌ-1ＮＡＡ 2 %蔗糖 6 %～ 7%卡拉胶。种子培养基 :(2 ) 1 /2ＭＳ大量元素 6 %～ 7%卡拉胶。以上培养基的ｐＨ值为5 .8～ 6 .0。在自然温度和光照条件下培养。4　生长与分化情况4 1　无菌材料的获得　将带芽的茎段剪去大叶片 ,用自来水冲洗 1 0ｍｉｎ ,蒸馏水洗 3～ 5次后 ,再用 0 .1 %升汞消毒处理 5～ 6ｍｉｎ ,然后用无菌水洗 4…     

朱丽亚甜瓜的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　日本引进的甜瓜品种“朱丽亚”(Cu cumismelovar.julia)。2　材料类别　茎段、种子。3　培养条件　种子发芽培养基 :( 1 ) 1 /2MS。茎段生长培养基 :( 2 )MS + 6 BA 2 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .0 5 ;( 3)MS + 6 BA 2 +PP3333.0 +NAA 0 .0 5。所有培养基均附加 0 .7%琼脂和 3%的蔗糖 ,pH 5 .8～ 6.0 ,培养温度为 2 3～ 2 7℃ ,光照 1 2h·d- 1 ,光照度为 2 0 0 0lx左右。4　生长与分化情况4.1　外植体的灭菌　种子用自来水冲洗 3～ 4次后 ,在无菌条件下用 0 .1 %HgCl2 消毒 1 0～ 1 2min ,然后用无菌水洗 4～ …     

花叶如意的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　花叶如意 (Farfugium japonicavar.auseomaculata)。2　材料类别　茎尖。3　培养条件　 ( 1 )分化培养基 :MS + 6 BA 1 .0～ 2 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .2 ;( 2 )增殖培养基 :MS + 6 BA 0 .5 +IBA 0 .2 ;( 3)生根培养基 :1 /2MS+IBA 1 .0或NAA 0 .5。以上培养基均添加 3%蔗糖、0 .8%琼脂。培养温度 2 5～ 2 8℃ ,每天光照 1 0h,光照度 1 0 0 0～ 1 5 0 0lx。移栽用营养液 1 /4MS。4　生长与分化情况4.1　茎尖的切取与分化　将地栽花叶如意去叶 ,清洗干净后置于自来水下冲洗 30min ,用 75 %酒精漂洗 30s,3%漂…     

土人参茎尖培养和植株再生

1　植物名称　土人参 (Talinumpaniculatum)。2　材料类别　实生苗之茎尖 ,种子取自本校花圃。3　培养条件　种子萌发培养基 :( 1 ) 1 /2MS +0 .7%琼脂 + 2 %蔗糖。丛生芽诱导培养基 :( 2 )MS + 6 BA 0 .5mg·L- 1 (单位下同 ) ;( 3)MS +NAA0 .5 + 6 BA 2 .0 ;( 4 )MS +NAA 0 .5 +KT 2 .0 ;( 5 )MS+NAA 0 .5 + 6 BA 3.0。丛生芽增殖培养基 :( 6)MS + 6 BA 2 .0 ;( 7)MS +NAA 0 .0 5 + 6 BA 3.0。生根培养基 :( 8) 1 /2MS +NAA 2 .0。上述 ( 2 )～ ( 8)培养基均附加 30 g·L- 1 蔗糖、7g·L- 1 琼脂 ,pH 5 .8。培养室温…