电磁辐射对大鼠内皮祖细胞和肾脏组织学的影响

目的：研究电磁辐射对体外培养骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、黏附能力的影响,并探讨其与肾脏疾病的可能关系。方法：密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞（MNCs）,接种至纤维连接素包被的培养板上,培养6d后进行免疫细胞化学和免疫荧光鉴定EPCs。采用MTT比色法、Transwell小室和黏附能力测定实验,观察平均功率密度为65mW/cm2,时间20min的电磁辐射对EPCs的增殖、迁移、黏附能力的影响;同等剂量全身照射大鼠,光镜和透射电镜观察大鼠肾脏组织学和超微结构的变化。结果：从大鼠骨髓能成功分离培养获得EPCs。EPCs的增殖、迁移、黏附能力较对照组显著下降;大鼠接受全身照射后各时相点无明显组织学改变,但超微结构显示在照射后3h后开始出现肾小球毛细血管袢足突肿胀,12h后出现部分足突融合。结论：电磁辐射导致EPCs生物功能显著减弱,肾小球超微结构改变,电磁辐射可能与起肾脏疾病的发生有关。     

miR-92a对大鼠骨髓源性内皮祖细胞功能的影响

该文探讨了mi R-92a对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)迁移、黏附、增殖以及血管形成能力等的影响。采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓来源的单核细胞,体外培养于含10%胎牛血清的EGM-2MV完全培养基中。利用LipofectamineTM 3000分别将mi R-92a模拟物(mi R-92a mimics)、mi R-92a抑制剂(mi R-92a inhibitor)及其对应的对照组(negative control,NC)转染入第3~5代EPCs,即晚期EPCs。采用改良Boyden小室、黏附实验、CCK-8及Matrigel胶分别检测EPCs迁移、黏附、增殖及体外成血管能力。mi R-92a模拟物明显抑制了EPCs的迁移和体外成血管能力(P0.05),但不影响EPCs的黏附和增殖能力;而mi R-92a抑制剂则促进了EPCs的迁移和体外成血管能力(P0.05),亦不影响EPCs的黏附和增殖能力。结果表明,mi R-92a可抑制EPCs的迁移及体外成血管能力。该研究结果将为临床以mi R-92a和EPCs为靶点防治动脉粥样硬化性心血管疾病提供理论及实验依据。     

地骨皮提取液对内皮祖细胞功能的影响

通过观察地骨皮提取液对高糖培养的人脐血内皮祖细胞(EPCs)的黏附、迁移、增殖等能力的影响,探讨地骨皮提取液对高糖所致的血管内皮损伤是否具有保护作用。分离人脐血单个核细胞,接种培养后收集贴壁细胞,采用双荧光染色法及ecNOS和Flk-1基因的表达对EPCs的生物学特征进行鉴定。将分离到的EPCs分成5组:正常对照NG组、高糖HG组、HG+地骨皮提取液不同浓度组(1 g/组、2 g/L组和4 g/L组);用重贴壁法测定EPCs黏附能力,改良Boyden小室法测定其迁移能力及CCK-8法测定增殖能力。结果显示:(1)HG组EPCs的黏附、迁移及增殖能力较NG组明显下降;(2)HG+地骨皮提取液不同浓度组EPCs黏附、迁移和增殖能力均比HG组高;对迁移和增殖能力的影响以2 g/L干预组效果最为明显。提示地骨皮提取液能部分恢复高糖对EPCs黏附、迁移及增殖能力的抑制,对高糖所致的血管内皮损伤具有保护作用。     

载脂蛋白A损伤小鼠骨髓源性EPCs血管发生能力及其机制

改善血流、促进血管新生是缺血性外周血管疾病的重要治疗措施．由于载脂蛋白A(ApoA)与纤溶酶原(plasminogen,Plg)具有75%～98%的结构同源性,因此,ApoA也可能通过类似Plg的方式抑制内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、黏附及迁移而影响血管发生的能力．本文研究ApoA对EPCs 血管发生的影响及机制．为了编码人ApoA全长cDNA序列的pSG-5表达载体,转染COS-7细胞株后进行培养,收集培养液,免疫亲和层析法分离纯化ApoA蛋白;从转ApoA基因小鼠、野生型对照鼠及正常对照鼠骨髓分离培养EPCs,经ApoA处理后移植下肢缺血实验小鼠,于移植后第3、7、14天后观察ApoA对EPCs黏附、迁移及血管发生能力的影响．研究发现,ApoA能显著降低 EPCs的黏附、迁移能力,Matrigel胶上,EPCs血管腔样结构严重破坏,体内实验揭示,EPCs归巢至ApoA转基因小鼠缺血组织血管周围的数量及毛细血管数量显著减少．结果表明,ApoA能损伤EPCs的黏附、迁移及归巢,最终损伤EPCs的血管发生能力．     

血脂康胶囊对高脂模型大鼠EPCs功能的影响

目的:高脂血症可增加心血管事件的发生率,本研究降脂红曲制剂血脂康胶囊对高脂模型大鼠的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响。方法:给予Wistar大鼠高脂饲料30 d,造成高血脂大鼠模型,灌服血脂康胶囊。密度梯度离心法分别分离正常对照组,高脂模型组和血脂康治疗组大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2MV进行体外培养。以4~6代EPCs为靶细胞。采用Edu标记技术、CCK-8检测法、粘附能力测定试验、改良的Boyden小室、Matrigel法、荧光定量RT-PCR等方法分别检测EPCs增殖、粘附、迁移、体外成血管及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)等炎性因子的表达。结果:高血脂模型组大鼠EPCs的增殖、粘附、迁移及成血管能力均明显低于对照组,但炎症因子MCP-1表达则高于对照组;与高脂模型组EPCs比较,血脂康可明显促进EPCs的增殖、粘附、迁移及成血管,下调MCP-1的表达。结论:高脂状态下大鼠EPCs的增殖、粘附、迁移及成血管等生物学功能受损,血脂康能调整脂质代谢,改善高脂血症大鼠EPCs功能,从而起到保护血管内皮的功能,减少心血管疾病的发生。     

尼氟酸对晚期内皮祖细胞生物学特性的影响

目的:探讨ClCa通道抑制剂--尼氟酸(Niflumic,NFA)对大鼠骨髓来源的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学特性的影响。方法:密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2完全培养液进行体外培养,以第三代或第四代的晚期EPCs作为靶细胞,应用RT-PCR检测晚期EPCs上是否存在Cl Ca通道标志基因TMEM16A和Cl Ca4的表达。采用CCK-8法、Ed U标记法、划痕实验、Boyden小室实验及Matrigel法分别检测10μmol/L NFA对细胞增殖、迁移及体外血管形成能力的影响;应用荧光定量PCR及流式细胞术检测内皮分化标志v WF和CD31基因及蛋白的表达。结果:晚期EPCs表达ClCa通道标志基因TMEM16A和ClCa4;NFA抑制晚期EPCs的迁移功能(P0.05);但对EPCs的增殖、分化及成血管能力有促进作用。NFA上调了晚期EPCs的CD31和v WF基因和蛋白表达。结论:NFA能促进EPCs的增殖、分化及成血管能力,抑制EPCs的迁移能力。NFA对EPCs生物学特性的这类影响将为心血管疾病治疗药物选择方面提供一定的参考依据。     

匹伐他汀对体外培养人脐静脉血内皮祖细胞数量及功能的影响

目的:通过体外培养人脐静脉血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs),观察他汀类新药(匹伐他汀)对EPCs数量及增殖、迁移和粘附功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离培养人脐静脉血单个核细胞,将其接种在包被有人纤维连接蛋白培养板上,培养7 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度匹伐他汀(分别为0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L)培养24h,用免疫荧光法观察EPCs吸收FITC-UEA-I和Dil-acLDL情况对EPCs进行鉴定,然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验对各实验组测定,来观察匹伐他汀对EPCs数量及增殖、迁移和粘附功能影响。结果:匹伐他汀组与对照组相比,匹伐他汀显著提高了体外培养EPCs的数量及增殖、迁移与粘附能力(P0.05)。匹伐他汀浓度在0.1μmol/L时对EPCs影响达到最大。随着药物浓度的继续增大,EPCs的上述功能反呈下降趋势,但1.0μmol/L组仍高于对照组。结论:匹伐他汀能增加体外培养EPCs的数量及增殖、迁移和粘附能力,可作为EPCs培养的一种改良方法,为其更好的应用于临床具有重要的意义。     

姜黄素衍生物B06对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的:观察姜黄素衍生物B06对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:雄性SD大鼠35只,随机均分成5组(n=7):正常对照组、高脂组、高脂治疗组、糖尿病组、糖尿病治疗组。采用高脂饮食结合链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。治疗组给予0.2 mg/kg·d剂量的B06灌胃,维持8周。检测血肌酐、尿素氮、尿酸,光镜和电镜观察大鼠肾组织的形态学改变,Masson染色观察肾组织的胶原纤维,并用免疫组化方法检测肾脏IV型胶原、纤维连接蛋白的表达。结果:糖尿病组大鼠血肌酐、尿素氮水平升高;光镜下见肾小球系膜基质增多,胶原纤维增多,肾小球毛细血管基底膜增厚;电镜下足细胞足突肿胀及足突融合;Masson染色示肾小球亮绿色阳性基质增多;免疫组化显示IV型胶原、纤维连接蛋白的表达水平升高。经B06干预后,血肌酐、尿素氮下降;肾小球病变减轻,肾脏组织IV型胶原、纤维连接蛋白的表达水平降低。结论:B06对2型糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能是通过降低肾脏IV型胶原、纤维连接蛋白的表达,从而抑制细胞外基质的积聚和肾小球系膜增殖,发挥抗肾纤维化的作用。     

抗坏血酸对糖尿病肾脏足细胞的作用及机制探讨

目的：研究抗坏血酸对糖尿病大鼠肾小球滤过屏障最外层足细胞的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,经抗坏血酸治疗5周后,测定血糖（BG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、24 h尿白蛋白排泄率（UAER）、肾皮质超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）水平,并观察足细胞超微结构,检测足细胞损伤标志-desmin蛋白的表达。结果：与正常对照组大鼠比较,糖尿病组大鼠血BG、HbA1c显著增高,肾皮质SOD、CAT活性显著降低,MDA含量、肾小球内desmin蛋白表达明显增加,足细胞足突融合显著,UAER显著升高（均P〈0.05）;与糖尿病组大鼠比较,在血BG、HbA1c无明显差异条件下（均P〉0.05）,抗坏血酸可明显增加糖尿病大鼠肾皮质SOD活性,降低肾皮质MDA含量和desmin蛋白表达水平,并显著减轻足细胞足突融合,减少UAER（均P〈0.05）,肾皮质CAT活性虽有一定程度增高但差异无显著性（P〉0.05）。结论：糖尿病大鼠肾小球滤过屏障最外层足细胞有明显损害,补充抗坏血酸对足细胞起保护作用,其机制可能与增强肾脏抗氧化能力,减轻肾脏氧化应激有关。     

缺血预处理大鼠脊髓匀浆培养液增强骨髓基质细胞存活、增殖和迁移能力

目的探讨缺血预处理大鼠脊髓匀浆培养液对骨髓基质细胞(bone narrow stromal cells,BMSCs)存活、增殖和迁移能力的影响。方法体外分离培养BMSCs,予以传代。正常脊髓匀浆培养液组(Normal组):将BMSCs置于正常大鼠脊髓匀浆培养液中培养;缺血再灌注损伤脊髓匀浆培养液组(IR组):将BMSCs置于缺血再灌注损伤大鼠脊髓匀浆培养液中培养;缺血预处理脊髓匀浆培养液组(IPC组):将BMSCs置于缺血预处理后缺血再灌注损伤脊髓匀浆培养液中培养。流式细胞仪检测各组BMSCs凋亡率,MTT法检测BMSCs增殖,Transwell小室检测BMSCs迁移能力。结果与Normal组比较,IR组的BMSCs凋亡率增高,增殖能力下降,迁移能力下降;与IR组比较,IPC组的BMSCs凋亡率降低,增殖能力和迁移能力增强。结论缺血预处理大鼠脊髓匀浆培养液增强骨髓基质细胞存活、增殖和迁移能力。     

两种不同内皮祖细胞的分离培养与鉴定

目的:探讨从小鼠骨髓中分离、培养、诱导分化及鉴定两种内皮祖细胞的方法,为进一步研究和临床应用奠定基础。方法:密度梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞,接种于内皮祖细胞条件培养基,通过贴壁培养法培养出早期内皮祖细胞和晚期内皮祖细胞,并在0 d、6 d、10 d流式鉴定早期内皮祖细胞,在第8周流式鉴定晚期内皮祖细胞。结果:通过体外贴壁扩增培养,从小鼠骨髓细胞中成功培养出EEPC(早期内皮祖细胞)和EOC(晚期内皮祖细胞),表达CD34+/CD133+/VEGFR2+的EEPC比例从最初的0.08%能够增长至70%;EOC大约出现于3-4周,5-8周时呈现指数增长,具有典型的内皮细胞鹅卵石样形态,表达CD31、VEGFR2等内皮细胞表面标志而不表达CD34、CD133等干细胞表面标志。结论:确立了内皮祖细胞体外分离培养和诱导分化的实验方法,为进一步研究奠定基础。     

体外缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡发生的机制研究

目的:研究体外大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在缺血缺氧条件下发生凋亡的作用机制。方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧条件下培养,通过Annexin V/PI双染细胞凋亡检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中蛋白的变化。结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功。②对照组(无缺血缺氧)与缺血缺氧组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,而通过磷酸化Akt的表达量显著性增加提示PI3K(Phosphoinosi-tide-3kinase)/Akt(ProteinkinaseB,PKB)信号通路被激活(P<0.05);同时缺血缺氧组与缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组比较,缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组的凋亡率显著降低,而通过磷酸化Akt的表达量显著减少提示PI3K/Akt信号通路被抑制(P<0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路对体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞凋亡发生有关键性作用。     

阿司匹林对体外培养骨髓基质细胞成骨性分化的影响

目的:探讨阿司匹林对骨髓基质细胞成骨性分化的影响。方法:培养SD大鼠骨髓基质细胞(BMSCs),传代3次后进行成骨诱导分化,诱导培养基中加入不同浓度阿司匹林(0.5、1、2、5、10mmol/L),同时设立对照组。采用cck-8法分析细胞增殖情况。比较阿司匹林组与对照组在细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)分泌量、钙结节染色等方面的成骨性差异。结果:阿司匹林无促进细胞增殖活性,而高浓度阿司匹林能够强烈抑制细胞增殖。0.5、1、2mmol/L浓度阿司匹林可促进BMSCs的成骨性分化,中低浓度组碱性磷酸酶含量、骨钙素分泌量在不同阶段显著高于对照组。14天茜素红染色可见中低浓度组钙结节数量高于对照组。结论:中低浓度阿司匹林作用于骨髓基质细胞可促进其成骨细胞特性表达,这表明阿司匹林有促进骨代谢合成的作用。     

Effects of different intensities of extremely low frequency pulsed electromagnetic fields on formation of osteoclast-like cells

Over the past 30 years, the beneficial therapeutic effects of selected low energy, time varying electromagnetic fields (EMF) have been documented with increasing frequency to treat therapeutically resistant problems of the musculoskeletal system. However, the underlying mechanisms at a cellular level are still not completely understood. In this study, the effects of extremely low frequency pulsed electromagnetic fields (ELF-PEMF) on osteoclastogenesis, cultured from murine bone marrow cells and stimulated by 1,25(OH)(2)D(3), were examined. Primary bone marrow cells were cultured from mature Wistar rats and exposed to ELF-PEMF stimulation daily for 7 days with different intensities of induced electric field (4.8, 8.7, and 12.2 micro V/cm rms) and stimulation times (0.5, 2, and 8 h/day). Recruitment and authentication of osteoclast-like cells were evaluated, respectively, by determining multinuclear, tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) positive cells on day 8 of culture and by the pit formation assay. During the experiments, cytokines such as tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), interleukin 1-beta (IL-1beta), and prostaglandin-E(2) (PGE(2)) were assayed using the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). These findings suggest that ELF-PEMF can both enhance (approximately 50%) and suppress (approximately 27%) the formation of osteoclast-like cells in bone marrow culture, depending on the induced electric field intensity. In addition, consistent correlations were observed between TNF-alpha, IL-1beta, and osteoclast-like cell number after exposure to different induced electric field intensities of ELF-PEMF. This in vitro study could be considered as groundwork for in vivo ELF-PEMF clinical applications on some osteoclast-associated bone diseases.     

基质衍生因子(SDF-1)对骨髓间充质干细胞定向迁移的影响

目的:研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXCR4轴在骨髓间充质干细胞迁徙到受损胰腺中的作用。方法:密度梯度离心、贴壁培养骨髓间充质干细胞,建立STZ诱导糖尿病模型并制备正常和受损胰腺组织提取液,利用Transwell小室体外迁移体系观察不同浓度SDF-1和不同组织提取液对骨髓间充质干细胞的趋化作用,及SDF-1/CXCR4特异抑制剂AMD3100对骨髓间充质干细胞迁移的影响。结果:成功培养了骨髓间充质干细胞并建立了糖尿病大鼠模型。SDF-l对骨髓间充质干细胞有剂量依赖性的趋化作用,造模1周的胰腺组织提取液对骨髓间充质干细胞有明显的趋化作用,而这种作用可部分被SDF-1受体CXCR4的抑制剂AMD3100抑制。结论:受损胰腺组织提取液对骨髓间充质干细胞有明显的趋化作用,SDF-1/CXCR4轴可能在组织提取液趋化骨髓间充质干细胞迁移中起主要的作用。     

Pulsed electromagnetic field stimulation of bone marrow cells derived from ovariectomized rats affects osteoclast formation and local factor production

This study examined the effects of a specific pulsed electromagnetic field (PEMF) stimulation on osteoclast formation in bone marrow cells from ovariectomized rats and to determine if the signal modulates the production of cytokines associated with osteoclast formation. Adult female Wistar rats were subjected to bilateral or sham ovariectomy, and primary bone marrow cells were harvested at 4 days (Subgroup I) and 7 days (Subgroup II) after surgery. Primary bone marrow cells were subsequently placed in chamber slides and set inside solenoids powered by a pulse generator (300 micros, 7.5 Hz) for 1 h per day for 9 days (OVX + PEMF group). Others (INT, SHAM, and OVX groups) were cultured under identical conditions, but no signal was applied. Recruitment and authentication of osteoclast-like cells were evaluated by determining multinuclear, tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) positive cells on day 10 of culture and by pit formation assay, respectively. The PEMF signal caused significant reductions in osteoclast formation in both Subgroups I (-55%) and II (-43%). Tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), interleukin 1beta (IL-1beta), and interleukin 6 (IL-6) in OVX + PEMF group of Subgroup I were significantly reduced at 5, 7, and 9 days as compared to OVX group. The results found in this study suggest that osteoclastogenesis can be inhibited by PEMF stimulation, putatively due to a concomitant decrease in local factor production. Bioelectromagnetics 25:134-141, 2004.     

大鼠骨髓间充质干细胞分化的内皮样细胞促进血管新生及Rho激酶的作用

本文研究大鼠骨髓间充质干细胞分化生成的内皮样细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells-differentiated endothelial like cells,rBMSC-ECs)在血管新生中的作用及Rho激酶(Rho kinase,ROCK)活性抑制的影响。实验建立rBMSC-ECs与主动脉环体外共培养实验模型,设单纯血管环组、血管环与细胞共培养组和HA-1077低、中、高浓度组,HA-1077组在共培养的基础上分别在培养液中加不同浓度(10、30、60mmol/L)的ROCK特异抑制剂HA-1077。结果显示,培养第3天,血管环与细胞共培养组新生微血管数是单纯血管环组的1.3倍(P<0.05);HA-107710、30和60mmol/L组较共培养组分别减少57.70%、64.13%和48.23%(均P<0.01)。第6天,共培养组及HA-1077组rBMSC-ECs数量明显增加,并迁移至血管环周边,新生微血管生长缓慢;HA-1077组新生微血管数较共培养组明显减少。第9天,共培养组新生微血管部分增粗、增厚、延长,部分退化;一些rBMSC-ECs出芽,形成毛细血管...     

恒磁场抑制缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的:研究恒磁场对体外缺血缺氧培养条件下大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs) 凋亡的影响并探讨其作用机制.方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs).经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,将骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧条件下培养,通过TUNEL检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中特定蛋白质的变化.结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功.②缺血/缺氧组与缺血/缺氧+磁场组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,Akt磷酸化水平显著上升(P＜0.05).提示恒磁场可以使PI3K(Phosphoinositide-3kinase)/Akt(ProteinkinaseB,PKB)信号通路被激活而抑制凋亡的发生.结论:恒磁场通过激活PI3K/Akt信号通路抑制体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞的凋亡.     

HAPO促进放射损伤小鼠的造血重建

目的 明确人促血液血管细胞生成素 (HAPO)对骨髓抑制小鼠的造血重建作用。方法 研究HAPO、G-CSF对骨髓抑制小鼠的促造血作用,以700 cGy 137Csγ射线全身照射的Balb/c小鼠为模型,观察照射后小鼠的生存率;检查血常规;计数内源性脾结节;计数骨髓细胞数;采用半固体培养基进行集落培养检测骨髓细胞的高增殖潜能;取小鼠骨髓细胞接种于96孔培养板,分别在照射前或照射后加HAPO、G-CSF培养72hr,MTT方法测定活细胞数;取小鼠骨髓细胞,分别在照射后加HAPO,培养3周后观察各组小鼠骨髓细胞的生长情况。结果 HAPO、G-CSF均可明显提高放射后的小鼠的生存率;使内源性的脾集落增加。照射后的各组小鼠外周血白细胞变化较为明显,HAPO组白细胞恢复快于PBS组,也可高于G-CSF组。各组小鼠骨髓细胞数虽然14天时G-CSF组最为明显,但32天时HAPO组骨髓细胞数超过G-CSF组,至42天时基本恢复正常;而G-CSF组在32天、42天时骨髓细胞数仍低于正常值。在7天、14天、32天时取各组小鼠骨髓细胞高增殖潜能检测试验,HAPO组生成的GEMM-CFU数均最多。在照射前与HAPO、G-CSF孵育的骨髓细胞,HAPO组活细胞数量比对照组明显增高,而G-CSF组与对照组无明显差异。骨髓细胞被照射后培养72hr时,MTT测定显示不同剂量HAPO、G-CSF均能促进放射后骨髓细胞的增殖。骨髓细胞被照射后继续培养3周,HAPO组均有造血岛生成,细胞sca-1、CD31呈阳性,周围CD31阳性的内皮细胞增多。而PBS组则未出现造血岛,基质细胞中极少有CD31阳性细胞的内皮细胞,未发现sca-1阳性细胞。结论 体内、外实验表明,人促血液血管细胞生成素HAPO对放射损伤的Balb/c小鼠有明显的促造血重建作用,提高小鼠的生存率,促进其造血干细胞的增殖与生长。