去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道体内实验初步研究

目的:将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,观测带瓣管道材料体内情况.方法:去细胞处理牛颈静脉体,无菌处理后种植标记过的犬骨髓间质干细胞,构建组织工程带瓣管道,犬开胸手术,将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,术后4、8、12行胸部B超检查;取出补片,HE染色;荧光显微镜下标记细胞检测;样本钙含量测定.结果:术后犬胸部B超观察:瓣叶无增厚,钙化,管道血流通畅,无血栓及钙化.术后4、8、12周除了瓣叶逐渐缩小外,补片无动脉瘤形成,瓣膜表面光滑,无血栓形成,弹性良好,血管壁内面光滑,无血栓形成.种植种子细胞牛颈静脉带瓣补片成活.4周钙含量增加,8周时候,钙含量又有增加,12周时钙含量与8周相比无明显变化.结论:组织工程技术构建组织工程右心带瓣管道有可行之处.     

去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道体内实验初步研究

目的：将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,观测带瓣管道材料体内情况。方法：去细胞处理牛颈静脉体,无菌处理后种植标记过的犬骨髓间质干细胞,构建组织工程带瓣管道,犬开胸手术,将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,术后4、8、12行胸部B超检查;取出补片,HE染色;荧光显微镜下标记细胞检测;样本钙含量测定。结果：术后犬胸部B超观察：瓣叶无增厚,钙化,管道血流通畅,无血栓及钙化。术后4、8、12周除了瓣叶逐渐缩小外,补片无动脉瘤形成,瓣膜表面光滑,无血栓形成,弹性良好,血管壁内面光滑,无血栓形成。种植种子细胞牛颈静脉带瓣补片成活。4周钙含量增加,8周时候,钙含量又有增加,12周时钙含量与8周相比无明显变化。结论：组织工程技术构建组织工程右心带瓣管道有可行之处。     

环氧交联结合肝素改性对牛颈静脉抗凝血性能的影响

目的:研究环氧交联结合肝素包被对组织工程肺动脉带瓣血管支架-去细胞牛颈静脉带瓣血管的抗凝血性能.方法:采用环氧交联结合鱼精蛋白偶联技术将肝素结合于去细胞牛颈静脉带瓣血管的内膜面,通过体外凝血时间检测及循血流下观察肝素化牛颈静脉带瓣管道的长期通畅性和血栓形成情况,以评价血液相容性.结果:肝素结合到去细胞牛颈静脉带瓣血管的内膜面膜表面后.其凝血酶原时间、部凝血活酶时间及凝血酶时间明显延长,重建犬右室流出道后10个月,牛静脉带瓣管道保持通畅,无血栓形成.结论:牛颈静脉带瓣管道通过环氧交联结合鱼精蛋白偶联将肝素结合其内膜面后具有良好而持久的抗凝血性能,表现出良好的血液相容性.     

牛颈静脉组织工程带瓣管道实验研究

目的:培养犬骨髓间充质干细胞,标记后种植于去细胞牛颈静脉,构建组织工程带瓣管道.方法:去除牛颈静脉细胞作为支架材料,评价去细胞效果.分离、培养和扩增犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为种子细胞,体外再细胞化牛颈静脉,构建组织工程带瓣管道.结果:去细胞处理后,牛颈静脉辩叶及血管壁内皮细胞、成纤维细胞去除完全,细胞外基质纤维呈波浪状排列整齐,结构完整.由犬骨髓分离出的BMSCs,SH2、Vimentin、α-SMA呈阳性;对CD34、Ⅷ因子、Laminin呈阴性,能满足组织工程种子细胞的需求.采用Hoechst荧光标记的种子细胞,可传入子代细胞,其荧光亮度无明显衰减.种子细胞种植7d后,细胞已经贴附于去细胞牛颈静脉上,部分深入到瓣叶支架内部.结论:犬骨髓间充质干细胞Hoechst标记后种植于去细胞牛颈静脉,构建组织工程带瓣管道,方法简单、可行.     

组织工程血管补片动物模型的建立及围术期处理

目的评估组织工程血管补片动物模型的可行性并总结模型建立的围手术期处理。方法10只成年杂种犬,用自身的骨髓细胞和高分子可降解材料构建的组织工程血管补片扩大肺动脉流出道。结果实验中有1例在术中出现心动过缓,暂停手术操作后,其余手术均逐渐恢复,未造成不良后果。术后实验动物均存活。术后5～10min撤离呼吸机,拔除胸引管。术后两周肺动脉造影示左肺动脉通畅,未见动脉瘤形成,移植物处稍狭窄;取出移植物观察,血管管腔通畅,腔面光滑,无血栓,无感染。结论通过自身的骨髓细胞和高分子可降解材料构建的组织工程血管补片扩大犬肺动脉流出道成功建立了组织工程血管补片动物模型。为了保证模型的成功建立,应使用右侧卧位、尽早进行心电监护、及时处理心律紊乱和尽早撤离呼吸机等围术期护理要点。     

环氧化合物交联牛颈静脉带瓣管道的体内抗钙化性能评价

目的:探讨环氧化合物交联的牛颈静脉带瓣管道的体内抗钙化性能.方法:取新鲜牛颈静脉带瓣管道16根,分为环氧化合物交联组、戊二醛交联组,经二种不同的方法处理后,建立犬右室肺动脉重建动物模型,观察10个月,采用原子吸收光谱法测定牛颈静脉的组织钙含量;von kossa 钙盐染色观察组织钙化情况;并对比研究重建后牛颈静脉的组织结构变化.结果:经环氧化合物交联的牛颈静脉管道的钙化程度轻,管壁及瓣膜的抗钙化性能比经戊二醛固定处理的均有明显提高.结论:环氧化合物交联方法与传统的戊二醛交联方法相比较,能较好的提高牛颈静脉体内抗钙化性能.     

3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯在心血管组织工程中的应用

为了研究可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯 (3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate, PHBHHx)的血管内生物相容性, 采用脱细胞羊肺动脉为支架, 以PHBHHx涂层, 构建复合补片(Hybrid patch), 植入New Zealand兔腹主动脉内(12只), 以脱细胞未涂层羊肺动脉片(Uncoated patch)做为对照(12只)。分别于术后第1、4和12周处死动物, 取出移植补片进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜和钙含量测定。结果表明: hybrid patch管腔面光滑无血栓, 内膜增生适度, 再细胞化完全; 免疫荧光染色检测, 新生内膜组织中类内皮细胞呈CD31阳性反应, 单层连续排列, 间质细胞呈现SMA阳性反应; 钙含量测定, hybrid patch明显低于uncoated patch(P<0.05)。由此认为: PHBHHx的血管内生物相容性满意, 是心血管组织工程较为理想的腔内涂层材料。     

3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯在心血管组织工程中的应用

为了研究可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯 (3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate, PHBHHx)的血管内生物相容性, 采用脱细胞羊肺动脉为支架, 以PHBHHx涂层, 构建复合补片(Hybrid patch), 植入New Zealand兔腹主动脉内(12只), 以脱细胞未涂层羊肺动脉片(Uncoated patch)做为对照(12只)。分别于术后第1、4和12周处死动物, 取出移植补片进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜和钙含量测定。结果表明: hybrid patch管腔面光滑无血栓, 内膜增生适度, 再细胞化完全; 免疫荧光染色检测, 新生内膜组织中类内皮细胞呈CD31阳性反应, 单层连续排列, 间质细胞呈现SMA阳性反应; 钙含量测定, hybrid patch明显低于uncoated patch(P<0.05)。由此认为: PHBHHx的血管内生物相容性满意, 是心血管组织工程较为理想的腔内涂层材料。     

原花青素交联去细胞牛颈静脉带瓣管道的实验研究

目的:探讨原花青素(Proanthocyanidin,PA)交联去细胞牛颈静脉带瓣管道(valved bovine jugular vein conduit,BJVC)的方法和效果,为其在心血管外科和组织工程中的应用奠定实验基础.方法:新鲜BJVC 24根,随机分为原花青素交联组(PA组,n=8),戊二醛(Glutaraldehyde,GA)交联组(GA组,n=8)及新鲜对照组(Fresh组,n=8).分别检测各组牛颈静脉带瓣管道的生物物理性能.同时采用溶血实验和细胞毒性实验对PA和GA交联组分别进行生物学评价.结果:1.细胞成分去除彻底,纤维支架保存完整;2.固定指数检测显示虽然PA较GA交联速度慢,但两种交联剂交联效果无明显差异.3.生物物理性能检测显示:PA组管道厚度、管腔直径与新鲜对照组相当(P＞0.05),且优于GA组(P＜0.05);PA组合水量高于GA组(P＜0.05);两种方法交联后热皱缩温度、断裂强度、断裂延伸率均明显增强(P＜0.05),且PA组织断裂强度和断裂延伸率优于GA组(P＜0.05);Fresh组浸泡8d后失重率为98％,而PA组和GA组分别为3.68％和4.31％,两组间无显著差异.4.生物学评价结果表明,PA组细胞毒性低于GA组(P＜0.05);溶血实验结果表明两组溶血率均＜5％,符合国家生物材料溶血试验标准,且PA组明显低于GA组.结论:PA交联的BJVC具有良好的生物物理学特性,较低细胞毒性,为PA交联BJVC的深入研究做了初步探讨.     

应用生物材料重建上腔静脉

目的:探讨胸部肿瘤手术中上腔静脉及其属支切除后生物材料重建上腔静脉的方法和效果。方法:2003年5月到2005年12月,11例累及上腔静脉及其属支的胸部肿瘤病人使用牛颈静脉或自体心包重建上腔静脉。手术置换血管前后中心静脉压予以连续测定,并随访病人治疗结果。结果:重建生物血管12根,其中牛颈静脉7根,自体心包缝制管道5根,一例同时应用了牛颈静脉与自体心包管道。手术前中心静脉压偏高[(26．2±2．8)cmH_2O,n=11],手术重建上腔静脉后略有降低[(20．8±2．0)cmH_2O,与手术前比较,P＜0．05],手术后48小时已经降低到接近正常范围[(13．5±1．9)cmH_2O,与手术前比较,P＜0．05]。手术中无死亡,1例术后发生肺部感染最后致呼吸衰竭,5周后死亡,其余病人均度过围手术期。2例分别于术后7个月和11个月死于原发肿瘤复发,一例术后一年发现有脊柱转移,目前带瘤生存,余7例病人目前无复发迹象。结论:牛颈静脉或自体心包可以作为一种可以接受的上腔静脉重建替换材料。     

去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道生物相容性实验

目的:检测去细胞处理牛颈静脉的生物相容性.方法:去细胞处理牛颈静脉,与新鲜牛颈静脉分别于兔皮下包埋,术后2,4,12周取材,HE染色;进行血浆蛋白吸附和血小板粘附实验,检测血液相容性.结果:包埋早期有炎性细胞浸润,后期炎性细胞消失,以成纤维细胞为主.去细胞牛颈静脉与新鲜牛颈静脉血浆蛋白吸附和血小板粘附无显著差异.结论:去细胞牛颈静脉有良好的生物相容性.     

组织工程静脉血管种子细胞的培养

目的获取可应用于静脉血管组织工程的种子细胞内皮细胞。方法选取北京地区雄性杂种犬,取其双侧颈外静脉,采用翻转后酶消法,获取原代内皮细胞,对其进行原代培养和传代培养,冻存、复苏和鉴定,并利用光学显微镜进行观察。结果获取犬的颈外静脉后,实验采取了翻转后酶消法,所获得的内皮细胞纯度和数量得到了提高;经过鉴定确实为内皮细胞来源;活性好,增殖快,在较短的时间内能够达到后期实验所需数量。结论经体外培养的犬的颈外静脉内皮细胞可以作为组织工程血管的种子细胞。     

Hemodynamics and right-ventricle functional characteristics of a swine carotid artery-jugular vein shunt model of pulmonary arterial hypertension: An 18-month experimental study

The continuous changes in pulmonary hemodynamic properties and right ventricular (RV) function in pulmonary arterial hypertension (PAH) have not been fully characterized in large animal model of PAH induced by a carotid artery–jugular vein shunt. A minipig model of PAH was induced by a surgical anastomosis between the left common carotid artery and the left jugular vein. The model was validated by catheter examination and pathologic analyses, and the hemodynamic features and right-ventricle functional characteristics of the model were continuously observed by Doppler echocardiography. Of the 45 minipigs who received the surgery, 27 survived and were validated as models of PAH, reflected by mean pulmonary artery pressure ≥25 mmHg, and typical pathologic changes of pulmonary arterial remodeling and RV fibrosis. Non-invasive indices of pulmonary hemodynamics (pulmonary artery accelerating time and its ratio to RV ventricular ejection time) were temporarily increased, then reduced later, similar to changes in tricuspid annular displacement. The Tei index of the RV was elevated, indicating a progressive impairment in RV function. Surgical anastomosis between carotid artery and jugular vein in a minipig is effective to establish PAH, and non-invasive hemodynamic and right-ventricle functional indices measured by Doppler echocardiography may be used as early indicators of PAH.     

Effect of various types of sports on the anatomy of the common carotid artery and the internal jugular vein

By means of ultrasonography the common carotid artery and the internal jugular vein at certain sports have been investigated. In swimmers the internal jugular vein is essentially dilated as compared to the common carotid artery. In high jumpers there is not any noticeable differences between the width of the artery and the vein. These data should be taken into account at training sportsmen. They are also important for development of investigations in the ultrasound anatomy.     

大鼠经颈外静脉导丝引导插管测肺动脉压与传统方法的比较

目的探讨大鼠经颈外静脉插管方法及测肺动脉压的最佳方法。方法将80只雄性SD大鼠按随机分组原则分成2组：经导丝引导插管测肺动脉压组（G组）,传统方法插管测肺动脉压组（T组）,每组均40只。记录插管操作一次成功率、多次调整成功率（n≤4次）、总成功率、一次插管时间、总插管时间、及一次测压时间、总测压时间及肺动脉高压大鼠肺动脉压力数值。结果 G组比T组插管操作一次成功率、多次调整成功率（n≤4次）、总成功率更高（P〈0.05）,G组比T组的一次插管时间、总插管时间以及一次测压时间、总测压时间要短（P〈0.01）,G组所测的肺动脉高压大鼠的肺动脉压力比T组所测的高（P〈0.01）。结论经导丝引导插管测肺动脉压法插管和测压具有成功率高、准确到达肺动脉、数据更准确、操作省时的优点。与用传统方法插管测肺动脉压组相比较,是一种更好的对大鼠进行颈外静脉插管和测肺动脉压的方法。     

外源性硫化氢对家兔内毒素休克诱发肺动脉高压的干预作用*

目的: 探讨外源性硫化氢(H₂S)对家兔内毒素休克(ES)诱发肺动脉血管反应性的影响。方法: 本实验采用家兔经颈静脉注射脂多糖(LPS,8 mg/0.8 ml/kg)复制家兔ES模型,并提前15 min腹腔注射H₂S供体硫氢化钠(NaHS,28 μmol/kg)进行干预。随机将新西兰大耳白家兔分为4组(n=8):溶剂对照组、LPS组、LPS+NaHS组和NaHS组。监测平均动脉压(MAP)和平均肺动脉压(MPAP)的变化;应用血管环张力测定技术,检测各组家兔离体肺动脉张力变化;应用光镜和扫描电镜分别观察肺动脉管壁结构及肺动脉内皮细胞超微结构变化。结果: ①注射LPS后家兔出现MAP降低、MPAP升高,成功复制家兔ES模型;与LPS组相比,LPS+NaHS组家兔MPAP在各个时间点均显著降低(P均﹤0.05);②与正常对照组相比,LPS组家兔肺动脉对苯肾上腺素(PE)的收缩反应增强,对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应降低(P均﹤0.01);与LPS组相比,LPS+NaHS组家兔肺动脉对PE的收缩反应降低,而对ACh的舒张反应增强(P均﹤0.05)。③光镜下可见正常对照组家兔血管内皮细胞结构连续,内皮下弹力纤维完整,平滑肌层排列整齐;LPS组家兔部分肺动脉内皮细胞脱落,内皮下弹力纤维断裂,平滑肌层结构紊乱;与LPS组相比,LPS+NaHS组家兔肺动脉壁各层损伤减轻; NaHS组肺动脉壁各层形态结构接近正常对照组。扫描电镜检查发现LPS组家兔肺动脉部分内皮细胞缺失;LPS+NaHS组肺动脉内皮细胞形态接近对照组,仅可见细胞间隙稍增宽,未见细胞脱落。结论: 外源性H₂S可保护肺动脉内皮细胞,调节ES时肺动脉反应性的改变,从而降低ES家兔PAH。     

磁共振血管造影对颈部静脉系统疾病诊断的应用价值

目的：探讨三维动态增强磁共振血管成像（30 DCE MRA）对于颈部静脉系统疾病的临床应用价值。方法：对7例疑有颈部静脉病变的病人进行了3D DCE MRA检查,观察对病变血管及正常血管显示情况。结果：7例检查图像都能清晰显示正常血管结构及病变情况。其中2例正常,2例颈静脉血栓,1例颈静脉癌栓,1例颈静脉扩张,2例动静脉瘘。所有病例均经手术及（或）DSA证实。结论：3D DCE MRA是一种简便,易行,有效的血管检查方法,分辨率高,假阳性率低,在临床上已广泛应用,但临床上多限于动脉系统疾病的诊断。只要选择合适的序列、扫描时间及对比剂的剂量就能较好显示静脉血管情况。此项技术的应用,在颈部静脉病变诊断中有很大的实用价值。     

Comparison of Ca2+-handling properties of canine pulmonary vein and left atrial cardiomyocytes

Cardiac tissue in the pulmonary vein sleeves plays an important role in clinical atrial fibrillation. Mechanisms leading to pulmonary vein activity in atrial fibrillation remain unclear. Indirect experimental evidence points to pulmonary vein Ca(2+) handling as a potential culprit, but there are no direct studies of pulmonary vein cardiomyocyte Ca(2+) handling in the literature. We used the Ca(2+)-sensitive dye indo-1 AM to study Ca(2+) handling in isolated canine pulmonary vein and left atrial myocytes. Results were obtained at 35 degrees C and room temperature in cells from control dogs and in cardiomyocytes from dogs subjected to 7-day rapid atrial pacing. We found that basic Ca(2+)-transient properties (amplitude: 186 +/- 28 vs. 216 +/- 25 nM; stimulus to half-decay time: 192 +/- 9 vs. 192 +/- 9 ms; atria vs. pulmonary vein, respectively, at 1 Hz), beat-to-beat regularity, propensity to alternans, beta-adrenergic response (amplitude increase at 0.4 Hz: 96 +/- 52 vs. 129 +/- 61%), number of spontaneous Ca(2+)-transient events after Ca(2+) loading (in normal Tyrode: 0.9 +/- 0.2 vs. 1.3 +/- 0.2; with 1 microM isoproterenol: 7.6 +/- 0.3 vs. 5.1 +/- 1.8 events/min), and caffeine-induced Ca(2+)-transient amplitudes were not significantly different between atrial and pulmonary vein cardiomyocytes. In an arrhythmia-promoting model (dogs subjected to 7-day atrial tachypacing), Ca(2+)-transient amplitude and kinetics were the same in cells from both pulmonary veins and atrium. In conclusion, the similar Ca(2+)-handling properties of canine pulmonary vein and left atrial cardiomyocytes that we observed do not support the hypothesis that intrinsic Ca(2+)-handling differences account for the role of pulmonary veins in atrial fibrillation.