组织工程静脉血管种子细胞的培养

目的获取可应用于静脉血管组织工程的种子细胞内皮细胞。方法选取北京地区雄性杂种犬,取其双侧颈外静脉,采用翻转后酶消法,获取原代内皮细胞,对其进行原代培养和传代培养,冻存、复苏和鉴定,并利用光学显微镜进行观察。结果获取犬的颈外静脉后,实验采取了翻转后酶消法,所获得的内皮细胞纯度和数量得到了提高;经过鉴定确实为内皮细胞来源;活性好,增殖快,在较短的时间内能够达到后期实验所需数量。结论经体外培养的犬的颈外静脉内皮细胞可以作为组织工程血管的种子细胞。     

Caveolin-1促进乳癌Hs578T耐药细胞株侵袭和转移

通过基因转染技术培育caveolin-1过表达乳癌HS578T耐药细胞株Hs578T/Dox cav-1和空载体细胞株Hs578T/Dox vector,探讨caveolin-1蛋白对耐药肿瘤细胞体内和体外侵袭转移能力的影响.由于caveolin-1表达的增加,Hs578T/Dox cav-1细胞形态变为长梭形,伪足更长而伸展,其粘附能力高于空载体Hs578T/Dox vector细胞株((0.897±0.163)vs(0.633±0.053),P<0.01).侵袭小室试验发现,Hs578T/Dox cav-1侵袭转移能力增强,培养6h迁徙进入微孔膜的细胞数比Hs578T/Dox vector细胞株明显增多((107.8±10.9)vs(80.8±8.07),P<0.01),侵袭破坏matrigel基质蛋白胶进入膜内的细胞数也明显增多((68.8±9.88)vs(25.6±5.41),P<0.01).悬浮培养的Hs578T/Dox cav-1细胞比Hs578T/Dox vector细胞更容易聚集,形成相对较致密的细胞团块,24h检测流式细胞凋亡指数下降((8.79±1.54)%vs(16.42±1.42)%,P<0.01).这表明其具有更强的抗失巢凋亡和继续生存的能力,为循环转移的肿瘤细胞定植前取了更多时间.Hs578T/Dox vector细胞在裸鼠皮下种植成瘤试验中不能成瘤,而Hs578T/Dox cav-1细胞接种15只裸鼠,全部形成肿瘤,平均直径(0.8±0.45)cm.发现一只成瘤裸鼠双肺可见瘤样肿块转移.HE病理组织染色见肿瘤细胞弥漫性分布,细胞核异型性明显.上述结果表明,caveolin-1对Hs578T耐药肿瘤细胞侵袭、转移和成瘤性具有明显的促进作用.     

结缔组织生长因子在胰腺组织纤维化中的作用及机制探讨

目的 观察胰腺纤维化后结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)在胰腺组织内的表达;进一步研究参与CTGF作用于胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)的分子信号调控通路.方法 建立大鼠胰腺纤维化动物模型,HE染色、天狼猩红染色和免疫组织化学染色等方法观察胰腺纤维化后PSCs的活化情况及CTGF在胰腺组织的表达.Real-time RT PCR检测CTGF的基因表达.Western Blot检测PSCa内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)水平.结果 胰腺组织纤维化后,PSCs大量活化,并显著表达CTGF.CTGF作用后,PSCs内CTGF mRNA、α-SMA和Collagen Ⅰ的合成均有显著增加,在给予不同的细胞信号通路阻断剂后,PSCs内α-SMA的合成有显著下降,而Collagen Ⅰ的降低没有表现出统计学差异.结论 CTGF参与了胰腺纤维化的调控,MAPK和PI3-K信号通路均参与了CTGF的调控作用.     

Caveolin-1抑制胰腺癌细胞PANC1的体内外生长和增殖

窖蛋白-1(caveolin-1)是胞膜窖(caveolae)中重要的结构和功能蛋白.Caveolin-1参与细胞的多种生命活动并与恶性肿瘤的发生相关.为探讨caveolin-1对胰腺癌细胞PANC1的体外增殖、迁移、侵袭以及裸鼠体内成瘤能力的影响,通过基因转染技术培育caveolin-1过表达细胞株PANC1/cav-1作为实验组,转染空载体细胞株PANC1/vector作为对照组,采用RT-PCR及Western blot方法检测caveolin-1的表达量,流式细胞术分析细胞周期,软琼脂细胞克隆实验检测细胞增殖能力,侵袭小室实验检测癌细胞迁移和侵袭的能力,建立裸鼠皮下种植瘤模型并检测肿瘤组织的增殖与凋亡.PANC1/cav-1中的caveolin-1表达稳定,表达量明显高于对照组细胞株和亲本细胞株(P<0.01),细胞周期检测显示大量PANC1/cav-1细胞被抑制于G0/G1期,caveolin-1抑制PANC1的增殖,迁移和侵袭能力.在裸鼠的体内实验中,caveolin-1显著抑制PANC1细胞在裸鼠体内的生长,Ki-67染色和TUNEL染色表明在PANC1细胞中过表达caveolin-1,可以抑制肿瘤增殖并诱导肿瘤凋亡.上述结果表明,caveolin-1可能通过对胰腺癌细胞周期的影响(抑制于G0/G1期),抑制胰腺癌PANC1细胞在体内外的增殖、迁移和侵袭,并导致肿瘤凋亡.     

油红O染色鉴定胰腺星状细胞

目的胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)是一类胞浆内含有Vitamin A脂滴的特殊类型的细胞。油红O能够使脂肪组织及细胞内的脂滴着色。本研究的目的是采用油红O染色的方法对分离培养的PSCs进行鉴定。方法采用Histodenz密度梯度离心分离提取PSCs。异丙醇配制油红O染液,培养的PSCs应用油红O染液染色。结果油红O染色后可清晰显示PSCs内的脂滴。结论油红O染色可以特异性地显示脂滴,是鉴别PSCs的有效方法。