去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道体内 实验初步研究

目的:将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,观测带瓣管道材料体内情况。方法:去细胞处理牛颈静脉体,无菌处理后种植标记过的犬骨髓间质干细胞,构建组织工程带瓣管道,犬开胸手术,将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,术后4、8、12行胸部B超检查;取出补片,HE染色;荧光显微镜下标记细胞检测;样本钙含量测定。结果:术后犬胸部B超观察:瓣叶无增厚,钙化,管道血流通畅,无血栓及钙化。术后4、8、12周除了瓣叶逐渐缩小外,补片无动脉瘤形成,瓣膜表面光滑,无血栓形成,弹性良好,血管壁内面光滑,无血栓形成。种植种子细胞牛颈静脉带瓣补片成活。4周钙含量增加,8周时候,钙含量又有增加,12周时钙含量与8周相比无明显变化。结论:组织工程技术构建组织工程右心带瓣管道有可行之处。     

去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道体内实验初步研究

目的：将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,观测带瓣管道材料体内情况。方法：去细胞处理牛颈静脉体,无菌处理后种植标记过的犬骨髓间质干细胞,构建组织工程带瓣管道,犬开胸手术,将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,术后4、8、12行胸部B超检查;取出补片,HE染色;荧光显微镜下标记细胞检测;样本钙含量测定。结果：术后犬胸部B超观察：瓣叶无增厚,钙化,管道血流通畅,无血栓及钙化。术后4、8、12周除了瓣叶逐渐缩小外,补片无动脉瘤形成,瓣膜表面光滑,无血栓形成,弹性良好,血管壁内面光滑,无血栓形成。种植种子细胞牛颈静脉带瓣补片成活。4周钙含量增加,8周时候,钙含量又有增加,12周时钙含量与8周相比无明显变化。结论：组织工程技术构建组织工程右心带瓣管道有可行之处。     

环氧交联结合肝素改性对牛颈静脉抗凝血性能的影响

目的:研究环氧交联结合肝素包被对组织工程肺动脉带瓣血管支架-去细胞牛颈静脉带瓣血管的抗凝血性能.方法:采用环氧交联结合鱼精蛋白偶联技术将肝素结合于去细胞牛颈静脉带瓣血管的内膜面,通过体外凝血时间检测及循血流下观察肝素化牛颈静脉带瓣管道的长期通畅性和血栓形成情况,以评价血液相容性.结果:肝素结合到去细胞牛颈静脉带瓣血管的内膜面膜表面后.其凝血酶原时间、部凝血活酶时间及凝血酶时间明显延长,重建犬右室流出道后10个月,牛静脉带瓣管道保持通畅,无血栓形成.结论:牛颈静脉带瓣管道通过环氧交联结合鱼精蛋白偶联将肝素结合其内膜面后具有良好而持久的抗凝血性能,表现出良好的血液相容性.     

环氧化合物交联牛颈静脉带瓣管道的体内抗钙化性能评价

目的:探讨环氧化合物交联的牛颈静脉带瓣管道的体内抗钙化性能.方法:取新鲜牛颈静脉带瓣管道16根,分为环氧化合物交联组、戊二醛交联组,经二种不同的方法处理后,建立犬右室肺动脉重建动物模型,观察10个月,采用原子吸收光谱法测定牛颈静脉的组织钙含量;von kossa 钙盐染色观察组织钙化情况;并对比研究重建后牛颈静脉的组织结构变化.结果:经环氧化合物交联的牛颈静脉管道的钙化程度轻,管壁及瓣膜的抗钙化性能比经戊二醛固定处理的均有明显提高.结论:环氧化合物交联方法与传统的戊二醛交联方法相比较,能较好的提高牛颈静脉体内抗钙化性能.     

牛颈静脉组织工程带瓣管道实验研究

目的:培养犬骨髓间充质干细胞,标记后种植于去细胞牛颈静脉,构建组织工程带瓣管道.方法:去除牛颈静脉细胞作为支架材料,评价去细胞效果.分离、培养和扩增犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为种子细胞,体外再细胞化牛颈静脉,构建组织工程带瓣管道.结果:去细胞处理后,牛颈静脉辩叶及血管壁内皮细胞、成纤维细胞去除完全,细胞外基质纤维呈波浪状排列整齐,结构完整.由犬骨髓分离出的BMSCs,SH2、Vimentin、α-SMA呈阳性;对CD34、Ⅷ因子、Laminin呈阴性,能满足组织工程种子细胞的需求.采用Hoechst荧光标记的种子细胞,可传入子代细胞,其荧光亮度无明显衰减.种子细胞种植7d后,细胞已经贴附于去细胞牛颈静脉上,部分深入到瓣叶支架内部.结论:犬骨髓间充质干细胞Hoechst标记后种植于去细胞牛颈静脉,构建组织工程带瓣管道,方法简单、可行.     

组织工程血管补片动物模型的建立及围术期处理

目的评估组织工程血管补片动物模型的可行性并总结模型建立的围手术期处理。方法10只成年杂种犬,用自身的骨髓细胞和高分子可降解材料构建的组织工程血管补片扩大肺动脉流出道。结果实验中有1例在术中出现心动过缓,暂停手术操作后,其余手术均逐渐恢复,未造成不良后果。术后实验动物均存活。术后5～10min撤离呼吸机,拔除胸引管。术后两周肺动脉造影示左肺动脉通畅,未见动脉瘤形成,移植物处稍狭窄;取出移植物观察,血管管腔通畅,腔面光滑,无血栓,无感染。结论通过自身的骨髓细胞和高分子可降解材料构建的组织工程血管补片扩大犬肺动脉流出道成功建立了组织工程血管补片动物模型。为了保证模型的成功建立,应使用右侧卧位、尽早进行心电监护、及时处理心律紊乱和尽早撤离呼吸机等围术期护理要点。     

3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯在心血管组织工程中的应用

为了研究可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯 (3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate, PHBHHx)的血管内生物相容性, 采用脱细胞羊肺动脉为支架, 以PHBHHx涂层, 构建复合补片(Hybrid patch), 植入New Zealand兔腹主动脉内(12只), 以脱细胞未涂层羊肺动脉片(Uncoated patch)做为对照(12只)。分别于术后第1、4和12周处死动物, 取出移植补片进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜和钙含量测定。结果表明: hybrid patch管腔面光滑无血栓, 内膜增生适度, 再细胞化完全; 免疫荧光染色检测, 新生内膜组织中类内皮细胞呈CD31阳性反应, 单层连续排列, 间质细胞呈现SMA阳性反应; 钙含量测定, hybrid patch明显低于uncoated patch(P<0.05)。由此认为: PHBHHx的血管内生物相容性满意, 是心血管组织工程较为理想的腔内涂层材料。     

3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯在心血管组织工程中的应用

为了研究可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯 (3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate, PHBHHx)的血管内生物相容性, 采用脱细胞羊肺动脉为支架, 以PHBHHx涂层, 构建复合补片(Hybrid patch), 植入New Zealand兔腹主动脉内(12只), 以脱细胞未涂层羊肺动脉片(Uncoated patch)做为对照(12只)。分别于术后第1、4和12周处死动物, 取出移植补片进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜和钙含量测定。结果表明: hybrid patch管腔面光滑无血栓, 内膜增生适度, 再细胞化完全; 免疫荧光染色检测, 新生内膜组织中类内皮细胞呈CD31阳性反应, 单层连续排列, 间质细胞呈现SMA阳性反应; 钙含量测定, hybrid patch明显低于uncoated patch(P<0.05)。由此认为: PHBHHx的血管内生物相容性满意, 是心血管组织工程较为理想的腔内涂层材料。     

原花青素交联去细胞牛颈静脉带瓣管道的实验研究

目的:探讨原花青素(Proanthocyanidin,PA)交联去细胞牛颈静脉带瓣管道(valved bovine jugular vein conduit,BJVC)的方法和效果,为其在心血管外科和组织工程中的应用奠定实验基础.方法:新鲜BJVC 24根,随机分为原花青素交联组(PA组,n=8),戊二醛(Glutaraldehyde,GA)交联组(GA组,n=8)及新鲜对照组(Fresh组,n=8).分别检测各组牛颈静脉带瓣管道的生物物理性能.同时采用溶血实验和细胞毒性实验对PA和GA交联组分别进行生物学评价.结果:1.细胞成分去除彻底,纤维支架保存完整;2.固定指数检测显示虽然PA较GA交联速度慢,但两种交联剂交联效果无明显差异.3.生物物理性能检测显示:PA组管道厚度、管腔直径与新鲜对照组相当(P＞0.05),且优于GA组(P＜0.05);PA组合水量高于GA组(P＜0.05);两种方法交联后热皱缩温度、断裂强度、断裂延伸率均明显增强(P＜0.05),且PA组织断裂强度和断裂延伸率优于GA组(P＜0.05);Fresh组浸泡8d后失重率为98％,而PA组和GA组分别为3.68％和4.31％,两组间无显著差异.4.生物学评价结果表明,PA组细胞毒性低于GA组(P＜0.05);溶血实验结果表明两组溶血率均＜5％,符合国家生物材料溶血试验标准,且PA组明显低于GA组.结论:PA交联的BJVC具有良好的生物物理学特性,较低细胞毒性,为PA交联BJVC的深入研究做了初步探讨.     

犬骨髓分化细胞种植人工血管体内植入实验研究

目的:骨髓分化细胞预种植,探讨增强人工血管内皮化方法.方法:选取选杂种犬8条.每组实验犬2条.实验犬采自体骨髓,定向分化提取培养为内皮细胞,种植人工血管内膜表面.对照犬采用血清和培养基预凝支架.将人工血管重建犬右室流出道,于术后第1、3月观察植入的人工血管通畅情况,采用免疫组织化学方法鉴定细胞,在光镜和电镜下观察人工血管新生内膜表面内皮化情况.结果:骨髓细胞分化后鉴定,第2带细胞CD34染色阳性,第5代细胞CD31、Ⅷ因子染色阳性.细胞种植人工血管7天内皮细胞覆盖.光镜观察植入后1月实验组部分内皮化.对照组无内皮细胞覆盖;术后第3月实验组基本实现内皮化,对照组少量内皮细胞覆盖,存在钙化灶.1月实验组扫描电镜显示细胞排列紧密,对照组细胞少,有少量血栓附着;3月实验组血管表面细胞排列成片,对照组部分覆盖.结论:骨髓细胞定向分化所获取为内皮细胞.内皮细胞种植于去细胞后牛颈静脉血管,可获得较理想的内皮化,减少体内不良反应发生.