PAGE活性染色法分析D.radiodurans过氧化氢酶和起氧化物歧化酶

用ＰＡＧＥＡ活性染色分析了Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ过氧化氢酶（Ｃａｔ）和起氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。２种同种异型Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ（Ｒ１和Ｓａｒｋ）的Ｃａｔ在电泳带型上存在差异,两者Ｋａｔ均可分为Ａ、Ｂ和Ｃ３条带,但各带所占比例明显不同,ＳＯＤ的分析结果表明,Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ ＳＯＤ以Ｆｅ＾２＋和Ｍｎ＾２＋离子的嵌合体形式存在,其中Ｆｅ－ＳＯＤ成分占９０％以上。ＰＡＧＥ活性染色法     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｉｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分得到了Ｌ－册梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－册梨糖脱氢氧化为Ｌ－册梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测     

DDPH对猪肺动脉平滑肌细胞PDGF·BB和bFGF表达的影响：免疫细胞化学研究

ＤＤＰＨ［１－（２．６－二甲基苯乙氧基）－２－（３．４二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐］是南京药科大学合成的降压新化合物,也具有降低肺动脉高压和抑制肺动脉平滑肌细胞增殖作用。本实验用细胞培养、免疫细胞化学、图像分析、３Ｈ－ＴｄＲ、细胞周期测定等方法,进一步探讨ＤＤＰＨ对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）增殖的抑制机制。结果：缺氧促进肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣｓ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ两种生长因子的表达（积分光密度ＯＤ值）增高。缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）能促进ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值增高,ｂＦＧＦ的ＯＤ值无明显改变。加药组（ＨＥＣ－ＣＭ＋ＤＤＰＨ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ的ＯＤ值均显著降低,尤以ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值减少最多．提示：ＤＤＰＨ能抑制ＨＥＣＣＭ引起ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ表达增多和细胞增殖。结果与大鼠实验观察相符。     

低氧、血管紧张素Ⅱ对肺内小动脉平滑肌细胞膜Ca2 ┐ATPase活力的影响

本课题观察了低氧及血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ,ＡｎｇⅡ）对分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ－Ｃｓ）膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的影响,同时用钙通道阻断剂维拉帕米（ｖｅｒａｐａｍｉｌ,ＶＰ）进行干预,进一步了解细胞内钙与Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的关系。结果表明：ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力对低氧具有短暂的耐受性,随低氧时间延长,Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力呈时间依赖性抑制;低氧、ＡＮＧⅡ均能抑制Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力（Ｐ＜０．０１）低氧＋ＡⅡ对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的抑制具叠加效应（Ｐ＜０．０５）;ＶＰ可逆转低氧、ＡｎｇⅡ、低氧＋ＡｎｇⅡ对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的抑制（Ｐ＜０．０１）。结果提示：低氧,ＡＮＧⅡ可通过抑制肺血管平滑肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力而可能削弱肺血管平滑肌舒张功能也可能是低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）形成的原因之一。     

外源钙调素对粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

外源钙调素（ＣａＭ）对粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）细胞增殖的影响。实验结果表明外源ＣａＭ能明显抑制粟酒裂殖酵母细胞的增殖,其作用方式是延长了粟酒裂殖酵母细胞生长的延滞期,抗粟酒裂殖酵母ＣａＭ抗体,ＴＦＰ及Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ能降低ＣａＭ对细胞生长的抑制作用,而Ｃａ＾２＋及Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ对ＣａＭ的抑制作用均无影响。以上结果提示,外     

中温碱性脂肪酶的研究：Ⅲ.扩展青霉PF868变株碱性脂肪酶的纯化及其…

扩展青霉ＰＦ８６８变株发酵液经硫酸铵盐析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００及Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析纯化,获得纯化倍数为３２．４的酶粉。该酶分子量为２３４４２Ｄａｌ,酶学特性表明：该酶的最适作用温度为３２℃,５０℃保温３０ｍｉｎ仍保留５０％酶活性,最适ｐＨ为９．０,作用ｐＨ稳定范围在７．０－１０．０之间,Ｃａ＾２＋和Ｍｇ＾２＋对酶有激活作用,Ｆｅ＾２＋,Ｃｕ＾２＋和Ｍｎ＾２＋酶活力有抑制作用。     

光谱技术研究固氮酶铁硫簇的理化特性

Ｎ－甲基甲酰胺碱度是提取高质量固氮酶铁钼辅基的关键因素之一。过量的亚甲蓝能氧化并分解铁钼铺基为含双钼铁硫簇［Ｍｏ２Ｆｅ＾２＋Ｆｅ５＾３＋Ｓ６］＾－和铁硫簇（［Ｆｅ＾２＋Ｆｅ５＾３＋Ｓ６］＾－。固氮酶铁钼铺基和［Ｍｏ２Ｆｅ＾２＋Ｆｅ５＾３＋Ｓ６］＾－在紫外可见光谱区中均无特征吸收峰,而［Ｆｅ＾２＋Ｆｅ５＾３＋Ｓ６］＾－在３２０ｎｍ处却呈弱吸收峰。棕色固氮菌固氮酶和该菌的突变菌株ＵＷ４５固氮酶（缺铁钼     

L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分离得到了Ｌ－山梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－山梨糖脱氢氧化为Ｌ－山梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得分子量约为６０ＫＤ。动力学性研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对Ｌ－山     

树舌多糖Fb、Fc的结构研究

从树舌子实体中分离纯化出另两个级分Ｆｂ、Ｆｃ经超速离心,电泳,ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析等确定其均为质点、极性均一级分。经ＧＣ、ＩＯ４＾－氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,部分酸水解,甲基化及其产物ＧＣ、ＧＣ－ｍｓ分析,ＩＲ等分析确定Ｆｂ是由１→６和１→４甘露糖基构成主链,分枝点率及分枝率较少。     

芳香黄杆菌弹性蛋白酶的纯化及性质研究

报道了弹性蛋白亲和层析分离弛化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶,经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,收率可达５０％,并制备了酶的结晶。该酶在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测得分子量为２１３８０,ＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点８．９最适作用温度为５０℃,最适作用,ＰＨ为７．４在４０℃以下热稳定性良好,ＰＨ４．５－９．５范围内稳定,重金属离子Ｆｅ＾３＋,Ｚｎ＾２＋,Ｃｏ＾２＋,Ｈｇ＾２＋,Ｎｉ＾２＋Ａｇ＾＋,Ｃｕ     

粘质赛氏菌胞外蛋白酶的提取,纯化及部分性质研究

经过硫酸铵３０％￣５０％分级沉淀、二步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的粘质赛氏菌胞外蛋白酶制品,收集可达５３％,并制备了酶的结晶。该酶以Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量约为８１０００,该酶的最适ｐＨ为７．０,最适温度为４５℃,Ｚｎ＾＋、Ｍｎ＾＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｕ＾２＋、Ｃｏ＾２＋等重金属离子不同程度地抑制酶活性。     

人早期胎盘绒毛纤维连接蛋白的分离纯化及鉴定

人妊娠５－８周的胎盘绒毛经匀浆后,用２ｍｏｌ／Ｌ ｕｒｅａ－ＰＢＳ提取,通过Ｈｅｐａｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱层析,再经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ凝胶过滤层析,得到人早期胎盘纤维连接蛋白（ｅａｒｌｙ ｐｌａｃｅｎｔａ ｆｉｂ－ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,ｅｐＦＮ）。经还原及非还原ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹电泳分析,ｅｐＦＮ分子量约５００ｋＤ,是由两个２５０ｋＤ亚基组成,与人足月胎盘纤维连接     

神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca^2＋—Mg^2＋ATPase的影响

神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ＾２＋－Ｍｇ２＋ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ｃａ＾２＋存在。在２００μｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋存在的反应体系中,１００μｇ／ｍＬ Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大,为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟嗪（ＴＥＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的     

光系统Ⅱ反应中心CP47／D1／D2／Cyt b—559复合物中色素分子空？…

线二色光谱（ＬＤ）是研究色素分子在光合膜上空间取向和排布的重要手段。采用低温（１００Ｋ）吸收光谱和线二色光谱技术研究光系统Ⅱ核心复合物ＣＰ４７／Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔ ｂ－５５９中色素分子的空间取向。结果表明,在光系统Ⅱ核心复合物ＣＰ４７／Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔ ｂ－５５９中６８０ｎｍ处有吸收的叶绿素分子Ｑｙ跃迁与光合膜平面平行。β－胡萝卜素分子有两种不同的空间取向,其中在４７０和５０５ｎｍ处有吸收的β－     

叶绿素缺乏的大麦突变体的光合作用和叶绿素荧光

和早熟３号大麦（野生型）（ＤＧ）相比,黄化大麦（突变体）（ＬＧ）叶片Ｃｈｌ含量低,而Ｃｈｌ ａ／ｂ较高;光合速率低,表观量子效率低,而饱和光强较高,气孔导度较高;荧光参数Ｆｏ低,而ＰＳⅡ的光化学效率（Ｆｖ／Ｆｍ）以及Ｔ１／２、Ｆｍ／Ｆｏ、Φｅ均高。以单位叶绿素计算,黄化大麦的ＰＳⅡ电子传递活性和全链电子传递活性较高,而ＰＳＩ电子传递活性较低。推测黄化大麦ＰＳⅡ的光化学效率增高可能是由于其ＰＳⅡ向Ｐ     

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2基因的表达

将江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２基因克隆至表达载体ｐＢＬＭＶＬ２,转化入大肠杆菌ＲＲ１,经过温敏诱导,ＳＤＳ－Ｐ;ＡＱＧＥ检测,在约１４ｋＤ处有一表达条带。表达产物酸性磷脂酶Ａ２约占细菌蛋白总量的３０％,并以包涵体的形式存在。纯化包涵体后,将产物变性,复性,然后用ＦＰＬＣ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ＾ＴＭ１２纯化,产物经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测只有单一条带。     

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）细胞Ｃａ＾２＋内流,ＴＦＰ浓度不同,促进Ｃａ＾２＋内流程度也不一样,５０μｍｏｌ／Ｌ ＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大,Ｃａ＾２＋内流出现峰值也越早,１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／Ｌ ＴＦＰ处理后,胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＾＋浓度也会对ＴＦＰ引起的     

昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法

谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ,ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心;取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４）,四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４）,铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明,采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带,分子量为２４ｋＤ,２４．５ｋＤ左右;Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为２４ｋＤ左右;ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为２３ｋＤ左右     

重组人尿激酶原的分离纯化及性质研究

本文报道从人尿激酶原（ｐｒｏ－ｕｒｏｋｉｎａｓｅ,ｐｒｏ－ＵＫ）基因重组工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＪＡ２２１表达产物的复性液中纯化尿激酶原的方法。复性产物经Ｚｎ＾２＋选择性沉淀,尿激酶抗体亲和柱层析,ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ ４Ｂ亲和吸附,即得比活达１１００００ＩＵ／ｍｇ的纯化产品。样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,在还原及非还原条件下,均表现为分子量为４３ｋｄ的单一条带。动力学研究测得