鲤、青鱼肠粘膜内分泌细胞的免疫组织化学鉴别和定位

使用过氧化物酶——抗过氧化物酶(PAP)的免疫组织化学染色技术,用10种哺乳动物激素培育出的抗血清对鲤、青鱼肠道粘膜中内分泌细胞的鉴別表明,它们的肠道粘膜上皮中存在有胃泌素、P物质、牛胰多肽、亮氨酸脑啡肽、胰高血糖素样免疫反应物、抑胃多肽等6种免疫活性內分泌细胞;而五羟色胺、胆囊收缩素和神经降压素没有免疫活性反应。在鲤的肠粘膜中存在生长抑素免疫活性内分泌细胞;青鱼中则未见到这种细胞。两种鱼的各种免疫活性內分泌细胞多数在前肠的分布密度较大;但青鱼肠粘膜中P物质和亮氨酸脑啡肽两种免疫活性内分泌细胞却在直肠中分布最多;胰高血糖素样免疫活性内分泌细胞在中肠分布最多。P物质和胃泌素免疫活性內分泌细胞大多数分布于肠褶顶部;其他各种免疫活性內分泌细胞则主要分布于肠褶的中、底部。本文比较了鲤、青鱼的肠内分泌细胞在各肠段中的分布密度,并对其形态学及分布特点进行描述和讨论。     

几种激素在鳜胃肠道内分泌细胞中存在的免疫细胞化学证据

用链酶亲和素－生物素过氧化物酶（Strept Avidin-Biotin-Complex,SABC）免疫细胞化学方法,使用4种兔抗消化 道激血清对鳜胃肠道中的内分泌细胞进行鉴别和定位。结果在鳜鱼胃的贲门、幽门及肠道中均发现不同程度地存在着生长抑素和五羟色胺免疫活性内分泌细胞。在鳜的贲门上皮和贲门腺之间,幽门上皮和幽门腺之间均分布有生长抑素免疫活性阳性细胞,在贲门腺和幽门腺处的分布较密。这些含五羟色胺的肽能神经元具有典型的APUD（Amine Precursor Uptake and Decarboxylation）细胞特征,提示鱼类的胃肠道同哺乳动物的胃肠道一样富含肽能神经元;为神经－内分泌系统的研究提供有力的形态学依据,另外两种抗血清－高血糖素和胃泌素的免疫细胞化学染色在鳜的胃肠道的各部位均未发现阳性反应。     

三种鲤科鱼类肠道内分泌细胞的初探

使用Grimelius嗜银染色法对草鱼,鲤,翘嘴红鳇3种不同食性的鲤科鱼的肠道内分泌细胞进行了研究,在3种鱼的整个肠道上均发现有内分泌细胞的分布。在前肠前段中,内分泌细胞分布最多,愈向后分布愈少,在肠褶各处均有内分泌细胞分布,以基部分布最密,内分泌细胞几乎都为开放型,位于上皮细胞和杯状细胞之间,将胞突伸向肠腔,有极少数内分泌细胞兼有开放型和封闭型细胞的特点,在它们顶端胞突伸向腔的同时,基部也伸出突起将分泌物送入邻近细胞或细胞间隙中,肠上皮中还发现一种与内分泌细胞具有同样嗜银特性的圆形颗粒。     

草鱼、鳡和翘嘴鲌消化道组织的早期发育

研究仔稚鱼消化机能的发育变化对于掌握鱼类早期发育阶段的消化特点、营养需要及提高仔稚鱼成活与生长等均有重要意义。采用HE、PAS等染色方法,对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鳡(Elopichthys bambusa)和翘嘴鲌(Culter alburnus)消化道组织的早期发育进行了研究,结果表明:(1)初孵仔鱼卵黄囊的相对体积以鳡的最大;(2)均在孵后2d和3d分别出现肠管和口裂,在孵后3d、4d和2d分别出现肠腔;(3)在孵后4d、7—9d和4d其肠腔内分别出现食物团,表明此时草鱼、鳡和翘嘴鲌已分别开始外源性摄食;(4)在孵后5d、6d和6d其肠道内表面分别出现黏膜褶,随后在稚鱼中其黏膜褶的高度和数量不同程度的发育;(5)草鱼和鳡的肠道分别在孵后14d和30d出现盘曲,而在翘嘴鲌的切片图中未发现其肠道的盘曲;(6)草鱼、鳡和翘嘴鲌的肠道分别于孵后17—23d、30d和24—29d出现数量较多的黏液细胞,此时标志着食性的转换和分化过程基本完善。     

花鲈消化道内分泌细胞的鉴别和定位

应用免疫组织化学Elivision二步法 ,用 5 羟色胺 (5 HT)、生长抑素 (SST)、胃泌素 (Gas)、胰高血糖素 (Glu)、胰多肽 (PP)等 5种抗哺乳动物血清对花鲈 (Lateolabraxjaponicus)消化道内分泌细胞 ,进行免疫组织化学定位的研究。结果表明 :5 HT和SST细胞分布于食管、胃贲门部、胃体部和胃幽门部 ,而肠道各段均未检出。Gas细胞分布于胃幽门部和前肠、中肠 ;食管、胃贲门部、胃体部和后肠未检出。Glu细胞分布于前肠和中肠 ,其余各段均未检出。PP细胞在消化道各段均未检出。本文将对花鲈消化道内分泌细胞的分布密度、分布型及形态进行描述和讨论。     

两种有胃鱼消化道6种内分泌细胞的免疫组织化学比较研究

目的 应用6种胃肠激素抗血清对胡子鲶(Clarias fuscas)和瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli Richardson)消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学比较.方法 应用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术(streptavidin biotin-peroxidase complex method,SABC法)免疫组织化学方法.结果 除胡子鲶后肠外,五羟色胺细胞在两种鱼的消化道各段均有分布,其中贲门部或幽门部密度最高,前中肠次之,食道最少;胡子鲶消化道中生长抑素细胞主要分布于胃贲门部和胃部,食管、胃幽门及肠道内未见分布,而瓦氏黄颡主要分布于食管和胃部,肠道内未见分布;胃泌素细胞在胡子鲶消化道内只在肠内检测到,瓦氏黄颡只在幽门胃和前肠两个部位检测到;胰多肽细胞只在瓦氏黄颡的幽门胃和前肠两个部位有分布;胰高血糖素和P-物质两种细胞在两种鱼的消化道各段均未见其分布.结论 两种有胃鱼消化道中六种内分泌细胞的分布既有一定的共性,体现了两者消化生理的共同点;同时又存在较大的种间差异,与各自食性及生活环境相适应.     

巢湖翘嘴红鲌的生物学及其资源变动的研究

翘嘴红鲌(Erythrocnlter ilisha-eformis)是巢湖大型经济鱼类的优势种。1952年巢湖鲌类(主要是翘嘴红鲌)产量是179.2万斤,近二十年来一直波动在50万斤上下。倘若能增殖和恢复翘嘴红鲌的资源,将可使巢湖鱼产量增加百万余斤。     

蝘蜓消化管内分泌细胞的免疫组织化学定位

目的阐明爬行动物蝘蜓消化管各段内分泌细胞的类型、局部分布、分布密度和形态学特征。方法应用免疫组织化学技术中链霉卵白素-过氧化物酶(S-P)法。结果在蜓消化管内鉴别出5种内分泌细胞,即:5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、生长抑素(somatostatin,SS)、胃泌素(gastrin,GAS)、高血糖素(glucagon,GLU)、P-物质(substance P,SP)免疫活性(i mmnoreactive,IR)细胞。5-羟色胺免疫活性细胞是消化管中最主要的内分泌细胞类型,以不同密度分布于消化管各段,其中胃幽门部位分布密度最高。生长抑素免疫活性细胞在消化管内仅局限分布于胃部。胃泌素免疫活性细胞仅见于幽门和十二指肠部位。高血糖素免疫活性细胞仅分布于回肠和直肠。P-物质免疫活性细胞仅出现在直肠部位。蝘蜓消化管内分泌细胞形态多样:圆形、椭圆形、纺锤形、梭形、楔形、锥形以及不规则形。胃部多数内分泌细胞分布于胃腺中,食管和肠管中多数内分泌细胞则分布于上皮细胞间。结论蜓和其它爬行动物胃肠内分泌细胞的分布存在一定共同特征,然而也存在着一些特有的差异。     

中华绒螯蟹各发育期APUD细胞的免疫细胞化学定位

使用12种哺乳类、鱼类、昆虫激素为抗原制备的抗哺乳类血清,应用链要和素－生物素过氧化物酶复合法免疫细胞化学技术对中华绒螯蟹1－5期Sou状细民体、大眼幼体、幼蟹体内及成蟹消化系统的APUD细胞进行鉴别和定位。结果在1－5期Sou状幼体及大眼幼体、幼蟹体内未见到典型的免疫活性阳性细胞;在成蟹消化系统中见到神经丝蛋白（NFP）、胰岛素（Ins）、血管活性肠肽（VIP）、降钙素（Cal）、五羟色胺（5－HT）、降钙素基因相关肽（CGRP）、生长激素（GH）、钙调素（CaM及蜕皮激素（MH）等9种免疫活性在其除了后肠以外的不同部位有各自的阳性反应表现,而物质（SP）、胰高血糖素（Glu）、神经特异烯醇酶（NSE）等3种抗血清在中华绒螯蟹成蟹消化系统中却未见其免疫活性阳性反应痕迹。本文着重描述以上9种免疫活性阳性反应在成蟹消化系统中分布情况及其阳性反应特征。     

8种有胃真骨鱼消化道降钙素免疫活性细胞的定位及形态学研究

应用过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫细胞化学技术对鳜、大口黑鲈、尼罗非鲫、短盖巨脂鲤、鲇、黄颡鱼、黄鳝和乌鳢等8种有胃真骨鱼消化道粘膜中降钙素免疫活性内分泌细胞进行了免疫细胞化学定位及形态学比较．结果表明,在尼罗非鲫、鳜和大口黑鲈消化道的任何部位均未见到阳性反应。另外5种鱼消化道的不同部位可不同程度地见到阳性细胞,其中黄颡鱼的整个消化道均有降钙素免疫活性的阳性反应;黄鳝和乌鳢的肠道中则无阳性反应,但在它们的胃以及黄鳝的食道中见到阳性细胞;鲇除食道中没有发现阳性细胞外,消化道各段中均有阳性细胞的存在;短盖巨脂鲤则仅在食道中发现阳性细胞。降钙素免疫活性细胞在肠道中的形态大多为长校形,胞体膨大,胞核是空油状,有两个相对的胞突分别伸向肠腔和基膜;胃中的降钙素细胞在位于胃上皮细胞之间时形状多为较短的梭形,而位于胃腺中时其形状较前者更加粗、短,胞突短小,常常呈不规则形状沿胃腺管边缘分布。     

环境毒物对金黄色葡萄球菌毒性影响的研究

采用毒物在营养琼脂中垂直扩散方法,通过测定毒物在营养球脂中抑制金黄色葡萄球菌生长产生蓝色抑菌带的长度,研究Hg、Cr^6 、Pb、CN^—、As、NO2^—、F^—及苯酚对金黄色葡萄球菌的毒性影响。结果表明：受试毒物的浓度与抑菌带有相关性,相关系数具显著意义;对毒物的敏感性为Cr^6 ＞Hg＞As＞CN^—＞Pb＞NO2^—＞苯酚＞F—;多种毒物共同作用其毒性影响增加。     

鲤的微卫星引物对草鱼基因组分析适用性的初步研究

运用微卫星DNA-聚合酶链反应(STR—PCR)基因分型技术,选取已发表的28对鲤的微卫星引物,探讨鲤的引物用于草鱼基因组微卫星分析的可能性。通过优化PCR反应条件,消除了影子带和异源核酸双链分子两类微卫星相关假阳性带对STR—PCR分析的干扰。在此基础上,筛选出7对引物可在湘江野生草鱼基因组中扩增出特异性条带,占总数的25％;其中的4对引物(约占总数的14．3％)在8尾湘江野生草鱼小群体中即检测到了个体间等位基因的多态性。这些初步的结果表明鲤的微卫星引物可以用于草鱼基因组的分析。     

草鱼和鲤杂交的细胞学研究—鱼类远缘杂交核质不同步现象

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为母本、鲤(Cyprinus carpio)为父本进行人工杂交,杂种胚胎发育至孵化期全部死亡;同时获得了少数雌核发育草鱼和雄核发育的鲤。分析比较了草鲤杂种胚胎染色体变化及胚胎发育情况。发现杂种胚胎染色体数目变化较大,一般在24—73之间,绝大部分细胞染色体在发育过程中不断丢失而出现非整倍体;极少数细胞在受精后雌性原核和雄性原核不结合而引起雌核发育和雄核发育;草鱼和鲤胚胎发育时序有较大差别;因此细胞分裂不能同步。可能是杂种胚胎染色体不断丢失的主要原因。     

Comparative study on the gut microbiotas of four economically important Asian carp species

Gut microbiota of four economically important Asian carp species(silver carp, Hypophthalmichthys molitrix; bighead carp,Hypophthalmichthys nobilis; grass carp, Ctenopharyngodon idella; common carp, Cyprinus carpio) were compared using 16 S rRNA gene pyrosequencing. Analysis of more than 590,000 quality-filtered sequences obtained from the foregut, midgut and hindgut of these four carp species revealed high microbial diversity among the samples. The foregut samples of grass carp exhibited more than 1,600 operational taxonomy units(OTUs) and the highest alpha-diversity index, followed by the silver carp foregut and midgut. Proteobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes and Fusobacteria were the predominant phyla regardless of fish species or gut type. Pairwise(weighted) UniFrac distance-based permutational multivariate analysis of variance with fish species as a factor produced significant association(P0.01). The gut microbiotas of all four carp species harbored saccharolytic or proteolytic microbes, likely in response to the differences in their feeding habits. In addition, extensive variations were also observed even within the same fish species. Our results indicate that the gut microbiotas of Asian carp depend on the exact species, even when the different species were cohabiting in the same environment. This study provides some new insights into developing commercial fish feeds and improving existing aquaculture strategies.     

Structural conservation and food habit-related liver expression of uncoupling protein 2 gene in five major Chinese carps

The full-length cDNA of grass carp (Ctenopharyngodon idellus) and silver carp (Hypophthalmichthys molitrix) uncoupling protein 2 (UCP2) was obtained from liver. The grass carp UCP2 cDNA was determined to be 1152 bp in length with an open reading frame that encodes 310 amino acids. Five introns (Intron 3, 4, 5, 6 and 7) in the translated region, and partial sequence of Intron 2 in the untranslated region of grass carp UCP2 gene were also obtained. Gene structure comparison between grass carp and mammalian (human and mouse) UCP2 gene shows that, the UCP2 gene structure of grass carp is much similar to that of human and mouse. Partial UCP2 cDNA sequences of bighead carp (Aristichthys nobilis) and mud carp (Cirrhinus molitorella), were further determined. Together with the common carp (Cyprinus carpio) UCP2 sequence from GenBank (AJ243486), multiple alignment result shows that the nucleotide and amino acid sequences of the UCP2 gene, were highly conserved among the five major Chinese carps that belong to four subfamilies. Using beta-actin as control, the ratio UCP2/beta-actin mRNA (%) was determined to be 149.4 +/- 15.6 (common carp), 127.4 +/- 22.1(mud carp), 96.7 +/- 12.7 (silver carp), 94.1 +/- 26.8 (bighead carp) and 63.7 +/- 16.2 (grass carp). The relative liver UCP2 expression of the five major Chinese carps, shows a close relationship with their food habit: benthos and detritus-eating fish (common carp and mud carp) > planktivorious fish (silver carp and bighead carp) > herbivorous fish (grass carp). We suggest that liver UCP2 might be important for Chinese carps to detoxify cyanotoxins and bacteria in debris and plankton food.     

鲢,鳙,银鲫和团头鲂肠道内分泌细胞中3种肽激素的免疫组化研究

应用ＡＢＣ免疫组化技术,用抑胃多肽、５－羟色胺和内啡肽３种哺乳动物抗血清对鲢、鳙、银鲫和团头鲂的肠粘膜中内分泌细胞进行了检测。结果４种鱼的肠粘膜中均有抑胃多肽免疫反应内分泌细胞存在,但未发现５－羟色胺和内啡肽的免疫反应。抑胃多肽免疫反应内分泌细胞主要分布在前肠前段,并单个地散布在肠褶顶部上皮细胞与杯状细胞之间,多呈长梭形。本文比较了不同食性鱼类和其他动物肠道抑胃多肽免疫反应内分泌细胞的分布规律,讨论了用５－羟色胺和内啡肽免疫染色的结果。     

Purification and characterization of a rhamnose-binding lectin with immunoenhancing activity from grass carp (Ctenopharyngodon idellus) ovaries

A rhamnose-specific lectin was isolated from ovaries of the grass carp (Ctenopharyngodon idellus). The grass carp lectin possesses a molecular mass of 205 kDa. It is composed of six subunits each with a molecular mass of 35 kDa. The N-terminal amino acid sequence of the grass carp shows similarity to those of other fish species with 26-35% amino acid identity. It is mitogenic toward murine splenocytes and peritoneal exudate cells.     

Further evidence for paternal DNA transmission in gynogenetic grass carp

Gynogenesis is an important breeding method in aquaculture and has been widely applied to many fish species. If gynogenetic progenies are to inherit paternal partial genomic DNA, this will increase genetic variation and will provide a useful outcome for breeding. In this study, we investigated the genetic variation in homeobox(Hox) gene clusters(Hox A4 a, Hox A9 a, Hox A11 b,Hox B1 b, Hox C4 a, Hox C6 b, and Hox D10 a) among koi carp(Cyprinus carpio haematopterus, KOC; the stimulation sperm source), grass carp(Ctenopharyngodon idellus), and gynogenetic grass carp(GGC). We found paternal DNA(a special DNA fragment and Hox C6 b) derived from KOC and a recombinant gene belonging to Hox C6 b in GGC. We are the first to report the recombinant Hox C6 b in GGC. Our study provides further evidence for paternal DNA transmission to gynogenetic progenies,which is a finding with great significance for the genetic breeding of fish.