肾综合征出血热病毒对不同生理状态小鼠的实验感染及在小鼠淋巴细胞亚群中的定位

本文用双标记免疫细胞化学和双标记免疫电镜技术观察了环磷酰胺处理的BALB/c小鼠及乳鼠实验感染肾综合征出血热病毒后的发病和病毒定位情况,结果发现,免疫功能不成熟或有缺陷的小鼠感染后发病并有规律地死亡,而免疫功能正常鼠只呈隐性感染。在发病的和隐性感染的小鼠之间,病毒定位主要差别在于HFRSV是否感染免疫器官,即HFRSV抗原可见于发病鼠外周血,牌和胸腺的单个核细胞中,而在隐性感染小鼠的这些免疫器官中则为阴性,HFRS病毒颗粒及病毒抗原广泛见于发病鼠的T细胞亚群中,在Thy-1,L3T4和Lyt-2亚群中,双标记阳性细胞百分比分别为24.6+—15.3％,7.5％+—6.1％和17.7+—6.1％。对HFRSV在T细胞中分布的差异还作了动态比较。结果提示:细胞免疫可受HFRSV的直接影响,病毒对宿主免疫系统的感染是HFRSV感染发病的一个关键因素。     

Hantaan病毒感染无胸腺裸鼠的研究

有些Hantaan病毒的毒株已经在姬鼠和Wistar与Ficher系实验鼠体内,以及在人肺癌A_(549)细胞和克隆E_6绿猴细胞内生长。在姬鼠,Wistar和Ficher系鼠体内,由于组织中有免疫复合物的形成,造成了免疫荧光检测的困难。无胸腺裸鼠与研究组织内Hantaan病毒抗原提供了一种     

肾综合征出血热病毒糖蛋白的提纯和鉴定

以感染肾综合征出血热病毒(HFRSV)的Vero E6细胞为材料,用免疫亲和层析结合制备聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从感染细胞中提纯了HFRSV两种糖蛋白。先用免疫亲和层析从感染细胞的粗制抗原中获得含有四种蛋白的混合液,用[~3H]-氨基葡萄糖在感染细胞中标记病毒糖蛋白,观察到[~3H]-氨基葡萄糖只结合入78K和57K的病毒蛋白。再用制备SDS-PAGE从HFRSV混合液中提纯78K和57K两种蛋白。实验证明这两种糖蛋白均具中和抗原决定簇,57K的糖蛋白尚具血凝活性,初步鉴定表明这两种糖蛋白相当于文献报道的HFRSV G_1和G_2。     

肾综合征出血热实验动物模型的研究和应用

建立肾综合征出血热(HFRS)疾病动物模型是进一步深入研究其发病机理、药物筛选、疫苗制备、临床治疗的迫切需要。最早用于肾综合征出血热病毒(HFRSV)分离和实验研究的动物是非疫区黑线姬鼠,以后相继发现实验饲养的一些动物对HFRSV亦很敏感。目前有二种动物模型:一种为感染动物模型,供分离和培养病毒及感染试验用;另一种为致病模型,主要用于发病机理,疫苗制备及实验治疗等方面的研究。细胞培养分离病毒成功之后,大大简化了病毒的培养和扩增,然而体外细胞感染不可能代替完整的动物机体对病毒感染的反应性。因此建立一个     

广谱肾综合征出血热病毒单克隆抗体的A35的生物学性状

具有中和及血凝抑制活性的、能和世界各地分离到的肾综合征出血热病毒(HFRSV)发生反应的、广谱的单克隆抗体(McAb),对HFRSV的诊断和分子生物学研究都有重要意义。 本文着重比较了HFRSV McAbA5、A19、A25-1、A25-7和A35的生物学性状,并观察了对感染动物的实验治疗效果。     

汉滩病毒核蛋白与热休克蛋白GRP94、HSP27的相互作用

为研究汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)感染诱导乳鼠脑组织热休克蛋白GRP94、HSP27与病毒蛋白的相互关系,选出生2—3d的昆明乳鼠实验性感染汉滩病毒,取8d后发病乳鼠脑组织部分制石蜡切片,用免疫组化结合共聚焦显微镜检测组织中病毒抗原及GRP94、HSP27的表达,部分制匀浆液,用ELISA、免疫共沉淀方法分析病毒抗原和GRP94、HSP27的关系。结果示汉滩病毒感染诱导乳鼠脑组织神经细胞高表达GRP94且与细胞内病毒抗原有共定位关系,但未见HSP27诱导高表达;免疫共沉淀显示汉滩病毒核心抗原(HINV—NP)与GRP94、HSP27呈非共价复合物形式存在。该结果为进一步探讨HSPs在病毒感染复制中的作用以及抗病毒感染方面提供了有意义的实验资料。     

红外荧光素Alexa Fluor 647标记的2型腺相关病毒保持天然的感染活性

近年来红外荧光素的研发及相应的标记技术的进展在生物医学领域的研究中备受关注,通过与尖端仪器的结合在一系列生物样本的检测中得到广泛的应用. 然而,红外荧光标记技术在病毒感染生物学研究中的应用却少见报道.本文建立了Alexa Fluor 647（AF647）红外荧光素标记重组2型腺相关病毒（AAV2）的方法,并通过凝胶电泳的银染、红外荧光成像和透射电镜分析等手段,对标记病毒的结构和形态与未标记的病毒进行了细致的比较,同时进一步鉴定了其感染293T细胞后的转导活性.结果发现,AAV2在标记后的理化性质和感染活性均未发生改变. 应用狭缝印迹和激光共聚焦显微成像技术,分别对标记病毒的细胞摄取效率和在宿主细胞内的分布进行描述,为红外标记AAV2在研究中的应用提供了范例.AF647标记的 AAV2为腺相关病毒的感染动力学研究提供了新的手段,具有敏感度高、抗荧光漂白和低非特异干扰等优点,并且对直接有效地结合形态学分析和生化分子生物学检测,具有重要的应用价值.     

汉滩病毒核蛋白与热休克蛋白GRP94、HSP27的相互作用

为研究汉滩病毒(Hantaan virus, HTNV)感染诱导乳鼠脑组织热休克蛋白GRP94、HSP27与病毒蛋白的相互关系,选出生2～3d的昆明乳鼠实验性感染汉滩病毒,取8d后发病乳鼠脑组织部分制石蜡切片,用免疫组化结合共聚焦显微镜检测组织中病毒抗原及GRP94、HSP27的表达,部分制匀浆液,用ELISA、免疫共沉淀方法分析病毒抗原和GRP94、HSP27的关系.结果示汉滩病毒感染诱导乳鼠脑组织神经细胞高表达GRP94且与细胞内病毒抗原有共定位关系,但未见HSP27诱导高表达;免疫共沉淀显示汉滩病毒核心抗原(HINV-NP)与GRP94、HSP27呈非共价复合物形式存在.该结果为进一步探讨HSPs在病毒感染复制中的作用以及抗病毒感染方面提供了有意义的实验资料.     

应用APAAP光镜技术发现两株HFRSV敏感细胞中HFRSV包涵体

本文应用抗HFRSV McAb的APAAP(碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶)免疫组化技术,首次用光镜在HFRSV感染8—14天的Hep-2和wish细胞中查出病毒包涵体,并且根据其位置和形态特征可分为:(1)中央型包涵体;(2)外周型包涵体;(3)脱落包涵体。上述所见包涵体均在电镜下得到证实。此结果对于了解HFRSV感染细胞后的致病变作用以及研究HFRSV感染细胞包涵体的特征、来源、性质和形成过程具有十分重要的意义。     

应用鼠单抗显示鼠组织中特异性抗原的免疫细胞化学方法

作者在应用小鼠抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)单克隆抗体(MAbs)免疫细胞化学法定位HFRSV自然感染大鼠组织中的病毒抗原时发现,部分大鼠组织的特异性HFRSV MAbs的染色切片及无关MAb对照和空白对照染色的切片中均出现血液。血细胞,血管壁,单核吞噬细胞系统,肾小球毛细血管及散在的心肌和肝细胞阳性,说明组织中有交叉反应。免疫双扩试验,羊抗鼠IgG桥抗可与大鼠Ig产生免疫沉淀反应,提示,组织中的交叉反应是由桥抗与大鼠细胞中本身存在的Ig(EIg)反应所致。为了避免EIg对特异性病毒抗原染色的干扰,我们以HFRSV MAbs预先分别与二抗羊抗鼠IgG结合,再用正常鼠Ig结合可能存在的二抗中尚未结合MAbs的Fab结合位点,制成一抗分子复合物,并以此作为一个新的相当于羊源性单克隆抗体孵育组织,以抗羊抗体连接羊PAP的多重PAP法显示一抗分子复合物的特异性抗原结合位点,结果显示该方法具有一抗的特异性,以有多重PAP法的敏感性,可有效的避免因EIg产生的交叉反应。用小鼠抗大鼠Kappa轻链MAb按同样方法制备一抗分子复合物用于染色证实,产生交叉阳性的部位确为大鼠组织中的Ig。病毒抗原及Ig的定位结果说明,HFRSV自然感染大鼠组织中的病毒抗原有广泛分布,也存在免疫复合物,但后者有别于HFRS人体组织的分布,另外,心肌及肝细胞Ig阳性说明该组织存在因HFRSV感染所造成的组织损伤,该损伤可能与机体的免疫反应有关。     

含HTNV S基因重组痘苗病毒在HFRS患者B淋巴母细胞系中的表达

采用Ficoll密度梯度离心法(淋巴细胞分离液)分离肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞(PBMC),并用EB病毒(EBV)感染B淋巴细胞,建立永生化的B淋巴母细胞系(B-LCL).然后,用含汉滩病毒(Hantaan virus ,HTNV) S基因的重组痘苗病毒感染B-LCL,应用间接免疫荧光检测核衣壳蛋白的表达.结果表明,B淋巴细胞经EBV感染4周左右,可形成永生化B-LCL.成功转化后的B-LCL,体积增大,且增殖的淋巴细胞积聚成团.汉滩病毒S基因在B-LCL中能有效表达核衣壳蛋白.含S基因的重组痘苗病毒感染的B-LCL可用作HTNV核衣壳蛋白特异性CTL活性研究的靶细胞.     

含HTNV S基因重组痘苗病毒在HFRS患者B淋巴母细胞系中的表达

采用Ficoll密度梯度离心法(淋巴细胞分离液)分离肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞（PBMC),并用EB病毒(EBV)感染B淋巴细胞,建立永生化的B淋巴母细胞系(B—LCL)。然后,用含汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)S基因的重组痘苗病毒感染B—LCL,应用问接免疫荧光检测核衣壳蛋白的表达。结果表明,B淋巴细胞经EBV感染4周左右,可形成永生化B—LCL。成功转化后的B—LCL,体积增大,且增殖的淋巴细胞积聚成团。汉滩病毒S基因在B—LCL中能有效表达核衣壳蛋白。含S基因的重组痘苗病毒感染的B—LCL可用作HTNV核衣壳蛋白特异性CTL活性研究的靶细胞。     

用碘标记核酸检查鼻咽癌上皮细胞中的EB病毒基因

用同位素碘化钠直接标记核酸。以细胞内原位杂交实验检查鼻咽癌上皮细胞中的EB病毒基因。共检查病理确诊的10例鼻咽癌活检标本的细胞涂片,其中9例直接证实有EB病毒核酸。本文建立并改进了细胞内原位核酸杂交技术,首先使用重组的单链DNA作探针,并将碘标记的核酸用于原位核酸杂交实验。     

Nested PCR在检测牛白血病病毒前病毒中的应用

用ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ检测牛白血病病毒的前病毒形式。从牛白血病病毒基因ｇｐ５１上选择两对引物进行ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ体外扩增,产物经２％ａｇａｒｏｓｅ凝胶电泳和用生物素标记的探针鉴定,证实其特异性。结果表明该方法能从两个ＢＡＴ－ＢＬＶ细胞内检测出ＢＬＶ的前病毒ＤＮＡ形式。     

BrdU标记的人巨细胞病毒感染HEL细胞的方法学研究

目的 以标记在人巨细胞病毒(HCMV)DNA上的BrdU为示踪剂,研究病毒在受染HEL细胞中的移动过程;同时结合病毒蛋白pp65的表达探讨病毒复制、增殖的过程。方法 以BrdU标记的HCMV(MOI=4)感染HEL细胞,分别选取感染后2h、4h、6h、24h及48h 5个时间点的细胞,用抗BrdU单克隆抗体,研究病毒核酸的胞内定位;同时用抗HCMV蛋白pp65的单克隆抗体检测此蛋白的表达及分布。结果 免疫细胞荧光染色结果提示:在感染5个时间点,病毒DNA依次位于胞质、胞核及同时位于胞核和胞质;蛋白pp65的表达及分布规律为:胞内无表达、胞核分布、胞核与胞质同时分布及巨细胞和融合细胞内分布。结论 以BrdU为标记物标记双链DNA病毒核酸不仅为研究HCMV．的胞内移动提供了良好的模型,同时也为其他病毒的研究提供了良好的工具;本实验结合HCMV蛋白pp65的表达和分布直观地反应了HCMV感染HEL细胞并在其中复制、增殖的过程。     

抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体抗病毒作用的研究

本文报道在内质网和细胞浆内稳定表达抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体,研究抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体抗病毒作用及其抗病毒作用机理。在获得稳定表达抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体的细胞系的基础上,用MTT法检测细胞内表达抗汉坦病毒单链抗体对细胞增殖的影响,证实细胞内抗体的表达不会影响到细胞的生长。不同时间收集病毒感染毒后细胞培养培养上清和细胞裂解物,用ELISA方法检测细胞内外病毒结构蛋白含量的变化,结果表明定位于细胞内质肉和细胞浆内的抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体均能不同程度降低感染细胞上清中的核蛋白含量,但是不能或轻微抑制细胞内汉坦病毒核蛋白的合成。利用病毒微量滴定免疫荧光方法,对细胞内抗体与病毒的增殖关系进行了研究,证实无论在内质网还是在胞质,抗核蛋白细胞内抗体都能够抑制病毒的增殖,具有抗病毒活性。抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体不能抑制病毒结构蛋白的合成,其抗病毒效果是通过抑制病毒的包装而实现。     

与蚕豆萎蔫病毒2号胞间运动和长距离转运相关的寄主细胞超微结构研究

电镜超微结构观察和免疫金标记显示:受蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV 2)中国分离物B935侵染的豌豆(Pisum sativum)和蚕豆(Vicia faba)叶细胞中膜结构增生,形成膜结构增生区,病毒以结晶体和管状体形式存在于细胞质中。在病变早期,叶肉细胞的胞间连丝处连接有小管结构,病毒样颗粒呈纵列排在小管中,穿越胞间连丝的小管能被BBWV 2的金标记抗体特异性标记。维管束组织的薄壁细胞、伴胞及转移细胞内存在膜增生区及病毒管状体,在筛管壁附近存在的病毒样颗粒能被BBWV 2金标记抗体特异性标记。实验结果表明BBWV 2胞间运动形式与豇豆花叶病毒(CPMV)相似,以完整粒子通过在胞间连丝处形成的小管结构穿越胞间连丝;细胞质中存在的直径160nm管状体只是一种病毒聚集体,与胞间运动无直接关系;该病毒在筛管中可能也是以完整粒子形式进行长距离转运的。     

两种病毒侵染中国对虾后细胞超微病理学变化与免疫标记

应用电子显微技术研究人工感染的中国对虾病毒病原及其宿主细胞超微病理学变化。结果显示病虾体内存在球状与杆状两种病毒病原,有时在同一病虾组织的同一细胞中可见两种病毒同时侵染现象,该现象提示存在复合感染的可能。利用胶体金免疫标记技术对感染病虾细胞质中出现的球状病毒作定位标记,初步结果表明已分离提纯的球状病毒与感染病虾细胞质中观察到的病毒粒子性质基本相同。病毒侵染后,细胞内主要的细胞器如线粒体、内质网、核糖体均发生了显著变化;侵染后期,可见溶酶体及多种膜性结构大量增生、细胞核被一些微管样结构包裹等特殊变化的发生。     

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原和抗体

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验(VIC-ELISA)检测肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染性滴度比双抗体间接ELISA和间接免疫荧光法(IFA)分别敏感10倍和100倍。VIC-ELISA检测兔抗HFRSV抗体的滴度比双抗体间接夹心ELISA和IFA分别敏感1.6倍和8倍。VIC-ELISA能敏感、快速、有效地检测HFRSV抗原和抗体。     

多克隆和单克隆抗体鉴定有肾综合征出血热病毒的四种血清型

<正> 前言 有肾综合征出血热(HFRS)病毒广泛地分布于欧亚大陆、日本、美洲和非洲。斯堪的纳维亚、苏联、中国和朝鲜是人类HF-RS疾病的地方性流行疫区。朝鲜出血热(KHF)的病因汉坦(Hantaan)病毒76-118株是由Lee等人于1978年从黑线姬鼠(A-podemus agrarius)分离到。1975年以来,日本从一些HFRS病例联想到与实验室大鼠